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蛋白質定量最常用的分析方法是

發布時間:2024-05-22 20:15:04

A. 常用蛋白質氮定量測定方法它有哪些

測定蛋白質最基本的方法是定氮法,即先測定樣品中的總氮量,再由總氮量計算出樣品中蛋白質的含量.蛋白質含量測定最常用的方法是凱氏定氮法,它是測定總有機氮的最准確和操作較簡便的方法之一,在國內外應用普遍.此外,雙縮脈法、染料結合法、酚試劑法等也常用於蛋白質含量測定,由於方法簡便快速,故多用於生產單位質量控制分析. 蛋白質及氨基酸的測定 蛋白質是生命的物質基礎,是構成生物體細胞組織的重要成分,一切有生命的活體都含有不同類型的蛋白質.人體內的酸鹼平衡、水平衡的維持;遺傳信息的傳遞;物質的代謝及轉運都與蛋白質有關.人及動物只能從食品得到蛋白質及其分解產物,來構成自身的蛋白質,故蛋白質是人體重要的營養物質,也是食品中重要的營養指標. 蛋白質是復雜的含氮有機化合物,分子量很大,它們由20種氨基酸通過醯胺鍵以一定的方式結合起來,並具有一定的空間結構.不同的蛋白質其氨基酸構成比例及方式不同,故各種不同的蛋白質其含氮量也不同.蛋白質可以被酶、酸或鹼水解,最終產物為氨基酸.氨基酸是構成蛋白質的最基本物質,在構成蛋白質的氨基酸中,亮氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、色氨酸和纈氨酸等8種氨基酸在人體中不能合成,必須依靠食品供給,故被稱為必需氨基酸,它們對人體有著極其重要的生理功能,常會因其在體內缺乏而導致患病,或通過補充而增強了新陳代謝作用.所以食品及其原料中蛋白質和氨基酸的分離、鑒定和定量具有極其重要的意義.

B. 敘述生物樣品中蛋白質含量測定方法有哪些

蛋白質含量測定方法有:凱氏定氮法,雙縮脲(Biuret)法,酚試劑法(Lowry)法,考馬斯亮藍(Bradford)法,紫外吸收法,BCA法及杜馬斯燃燒法。其中BCA法與Bradford法成為當今實驗室最為常用的兩種蛋白濃度定量檢測方法

BCA法常用現成的試劑盒來做,操作簡單又穩定。以下是厚百上BCA蛋白定量試劑盒:

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C. 蛋白質定量測定的方法有哪些

定氮法,雙縮尿法(Biuret法)、Folin-酚試劑法(Lowry法)和紫外吸收法。考馬斯亮藍法(Bradford法)。
凱氏定氮 靈敏度低,適用於0.2~ 1.0mg氮,誤差為 ±2% 費時
8~10小時 將蛋白氮轉化為氨,用酸吸收後滴定 非蛋白氮(可用三氯乙酸沉澱蛋白質而分離) 用於標准蛋白質含量的准確測定;干擾少;費時太長
雙縮脲法(Biuret法) 靈敏度低 1~20mg 中速 20~30分鍾 多肽鍵+鹼性Cu2+®紫色絡合物 硫酸銨;Tris緩沖液;某些氨基酸 用於快速測定,但不太靈敏;不同蛋白質顯色相似
紫外吸收法 較為靈敏 50~100mg 快速 5~10分鍾 蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處的光吸收 各種嘌吟和嘧啶;
Folin-酚試劑法(Lowry法) 靈敏度高 ~5mg 慢速 40~60分鍾 雙縮脲反應;磷鉬酸-磷鎢酸試劑被Tyr和Phe還原 硫酸銨;Tris緩沖液;甘氨酸;
各種硫醇 耗費時間長;操作要嚴格計時;顏色深淺隨不同蛋白質變化
考馬斯亮藍法(Bradford法) 靈敏度最高 1~5mg 快速5~15分鍾 考馬斯亮藍染料與蛋白質結合時,其lmax由465nm變為595nm 強鹼性緩沖液;
SDS 最好的方法;干擾物質少;顏色穩定; 顏色深淺隨不同蛋白質變化

D. 常用來測定蛋白質含量的方法有哪些優缺點是什麼

1、凱氏定氮法

凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法。即在有催化劑的條件下,用濃硫酸消化樣品將有機氮都轉變成無機銨鹽,然後在鹼性條件下將銨鹽轉化為氨,隨水蒸氣蒸餾出來並為過量的硼酸液吸收,再以標准鹽酸滴定,就可計算出樣品中的氮量。

由於蛋白質含氮量比較恆定,可由其氮量計算蛋白質含量,故此法是經典的蛋白質定量方法。

優點:可用於所有食品的蛋白質分析中;操作相對比較簡單;實驗費用較低;結果准確,是一種測定蛋白質的經典方法;用改進方法(微量凱氏定氮法)可測定樣品中微量的蛋白質。

缺點:凱氏定氮法只是一個氧化還原反應,把低價氮氧化並轉為氨鹽來測定,而不能把高價氮還原為氮鹽的形式,所以不可以測出物質中所有價態的氮含量。

2、雙縮脲法

雙縮脲法是一個用於鑒定蛋白質的分析方法。雙縮脲試劑是一個鹼性的含銅試液,呈藍色,由1%氫氧化鉀、幾滴1%硫酸銅和酒石酸鉀鈉配製。

當底物中含有肽鍵時(多肽),試液中的銅與多肽配位,配合物呈紫色。可通過比色法分析濃度,在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑒定反應的靈敏度為5-160mg/ml。鑒定反應蛋白質單位1-10mg。

優點:測定速度較快,干擾物質少,不同蛋白質產生的顏色深淺相近。

缺點:①靈敏度差; ② 三羥甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA等會干擾該反應。

3、酚試劑法

取6支試管分別標號,前5支試管分別加入不同濃度的標准蛋白溶液,最後一支試管加待測蛋白質溶液,不加標准蛋白溶液,在室溫下放置30分鍾,以未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照,於650nm波長處測定各管中溶液的吸光度值。

優點:靈敏度高,對水溶性蛋白質含量的測定很有效。

缺點:①費時,要精確控制操作時間;②酚法試劑的配製比較繁瑣。

4、紫外吸收法

大多數蛋白質在280nm波長處有特徵的最大吸收,這是由於蛋白質中有酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸存在,可用於測定0.1~0.5mg/mL含量的蛋白質溶液。

取9支試管分別標號,前8支試管分別加入不同濃度的標准蛋白溶液,1號試管不加標准蛋白溶液,最後一支試管加待測蛋白質溶液,而不加標准蛋白溶液,每支試管液體總量通過加入蒸餾水補足而保持一致,將液體混合均勻,在280nm波長處進行比色,記錄吸光度值。

優點:簡便、靈敏、快速,不消耗樣品,測定後能回收。 

缺點:①測定蛋白質含量的准確度較差,專一性差; ②干擾物質多,若樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等能吸收紫外光的物質,會出現較大的干擾。

5、考馬斯亮藍法

考馬斯亮藍顯色法的基本原理是根據蛋白質可與考馬斯亮藍G-250 定量結合。當考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合後,其對可見光的最大吸收峰從 465nm 變為 595nm。

在考馬斯亮藍 G-250 過量且濃度恆定的情況下,當溶液中的蛋白質濃度不同時,就會有不同量的考馬斯亮藍 G-250 從吸收峰為 465nm 的形式轉變成吸收峰為 595nm 的形式,而且這種轉變有一定的數量關系。

一般情況,當溶液中的蛋白質濃度增加時,顯色液在 595nm 處的吸光度基本能保持線性增加,因此可以用考馬斯亮藍 G-250 顯色法來測定溶液中蛋白質的含量。

優點:靈敏度高,測定快速、簡便,干擾物質少,不受酚類、游離氨基酸和緩沖劑、絡合劑的影響,適合大量樣品的測定。

缺點:由於各種蛋白質中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此用於不同蛋白質測定時有較大的偏差。

E. 三種常見蛋白質含量測定方法

三種常見蛋白質含量測定方法如下:

3、Lowry法也是一種多功能性的定量方法,該方法能測定有機物中蛋白質、氨基酸等氮含量,以及各種物質中的親合體,操作過程簡單,精度也較高,比Kjeldahl法快7倍以上,Lowry法原理是蛋白質分解成其中的氨基酸,通過對色比色反應,底物絡合過程蘆磨自絡合金屬,再經冷醯麟處理,醯騰中色素降解,形成比色熒光,定量檢測氮含量,從而間接得到蛋白質含量。

F. 蛋白含量測定的最常用的是什麼方法

蛋白質含量測定法,是生物化學研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四種古老的經典方法,即定氮法,雙縮尿法(Biuret法)、Folin-酚試劑法(Lowry法)和紫外吸收法。另外還有一種近十年才普遍使用起來的新的測定法,即考馬斯亮藍法(Bradford法)。其中Bradford法和Lowry法靈敏度最高,比紫外吸收法靈敏10~20倍,比Biuret法靈敏100倍以上。定氮法雖然比較復雜,但較准確,往往以定氮法測定的蛋白質作為其他方法的標准蛋白質。
值得注意的是,這後四種方法並不能在任何條件下適用於任何形式的蛋白質,因為一種蛋白質溶液用這四種方法測定,有可能得出四種不同的結果。每種測定法都不是完美無缺的,都有其優缺點。在選擇方法時應考慮:①實驗對測定所要求的靈敏度和精確度;②蛋白質的性質;③溶液中存在的干擾物質;④測定所要花費的時間。
考馬斯亮藍法(Bradford法),由於其突出的優點,正得到越來越廣泛的應用。

G. 定量檢測M蛋白採用

正確答案:B
解析:1
.血清區帶電泳是血清蛋白經典分析方法,通過與正常的電泳圖譜進行比較分析,很容易發現異常的區帶,僅可初步判定M蛋白的性質,但不能完全確定M蛋白的類型
。2
.免疫固定電泳具有周期短、敏感性高、分辨清晰、結果易於分析等優點,可對M蛋白進行分型與鑒定
。3
.免疫比濁分析准確迅速,是目前M蛋白定量的最常用的方法

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