等電點測量方法有哪些

1. 等電聚焦電泳法測定蛋白質的等電點

等電聚焦電泳法是一種高解析度的生物化學分析技術，用於測定蛋白質等電點。該技術基於蛋白質的兩性電解質特性，即在不同pH環境中會帶正或負電荷，從而在電場中移動。在一個具有連續pH梯度的環境中，蛋白質會聚焦在與其等電點相匹配的pH位置，通過測量聚焦位置的pH值，即可確定其等電點。

六十年代中期，等電聚焦技術迅速發展，如今已能分辨0.001pH單位的精細差異。其優點包括分辨力高、重復性好、樣品處理量大以及操作簡便。在生物化學、分子生物學和臨床醫學中，這項技術廣泛應用，用於生物大分子的分離、鑒定以及等電點的測定。

兩性電解質載體，如進口的Ampholine和國產的類似產品，是實現pH梯度的關鍵。它們在電場中形成連續的pH梯度，使蛋白質聚焦。理想的選擇需具備緩沖性強、導電性好和分子量適中的特性。在電泳過程中，維持穩定的pH梯度至關重要，通常使用聚丙烯醯胺凝膠作為支持介質，以防止擴散。

等電聚焦電泳有多種形式，包括垂直管式和水平板式。後者具有加樣量大、節省試劑且能避免電極液電滲作用的優點。測定pH梯度的方法包括直接測量、標准曲線法和使用微電極。

實驗中，需要用到的儀器和試劑包括電泳儀、凝膠材料、各種溶液和精確的pH測量工具。操作步驟包括配製膠液、裝管、電泳、膠條剝除和固定，以及測定和繪制pH梯度曲線。在固定後，通過測量聚焦位置的pH值，計算蛋白質的等電點。

在實驗過程中，對試劑的純度和新鮮度要求嚴格，以確保實驗結果的准確性。同時，要注意防止燒膠和保護凝膠，如控制電壓和電流，以及在處理過程中盡量減少對膠的損害。

總的來說，等電聚焦電泳法是一種精密且實用的生物技術，通過巧妙利用pH梯度，為我們提供了測定蛋白質等電點的強大工具。

2. 測量蛋白質等電點的方法有哪些謝謝

交錯分配法。

對一種特定的蛋白質，在不同鹽系統中，pH和其分配系數之間的關系應不同，而在等電點時，得到的均為不帶電時分子的分配系數。

對不同的鹽系統，其等電點時的分配系數應相等，兩條pH和分配系數關系的曲線必交於一點，該點所對應的pH值即為該特定蛋白質的等電點。根據這一原則測定蛋白質等電點的方法，稱為交錯分配法。

特性

蛋白質在溶液中有兩性電離現象。假設某一溶液中含有一種蛋白質。當pI=pH時該蛋白質極性基團解離的正負離子數相等，凈電荷為0，此時的該溶液的是pH值是該蛋白質的pI值。某一蛋白質的pI大小是特定的，與該蛋白質結構有關，而與環境pH無關。

在某一pH溶液中當pH>pI時該蛋白質帶負電荷，反之pH<pI時該蛋白質帶正電荷，pH=pI時該蛋白質不帶電荷。人體內pH=7.4；而體內大部分蛋白質的 pI<6； 所以人體內大部分蛋白質帶負電荷。

以上內容參考：網路-蛋白質等電點