什麼方法能讓檢測試劑變成陰性

㈠ ELISA試劑盒有幾種檢測方法

1、用OVA（卵清蛋白）做一些哮喘，過敏性腸炎的模型，後來會檢測粘膜特異性的sIgA以及血清裡面IgG，IgE等指標。

2、對於一些小分子的檢測，比如前列腺素、糖皮質激素的檢測，我的理解是要用競爭法ELISA去檢測，也要採用這個方法的盒子。一般細胞因子的檢測，都是採用常規的夾心法ELISA檢測，因為因子分子量比較大，一般10幾個KD左右，很容易找到兩個或者多個抗原表位。而小分子很難找到兩個不同的表位，也就決定了包被抗體和檢測抗體無法同時結合小分子並固相化。解決方案就是酶標板上包被二抗，每個孔加入一定量的酶標的小分子，然後加樣品，再加不帶標記的檢測抗體，顯色底物。樣品的目的小分子的含量越高，吸光度越低。

3、對於胰島素的檢測。

4、做實驗面向的ELISA試劑盒種屬主要是人，大鼠和小鼠，現在市面上雞、牛、馬、羊、兔各種指標的盒子都有售，真不知道這些抗體是怎麼來的。這些炎症指標還是有很大種屬特異性的。

5、好多人有個誤區，拿來一個指標就想當然地嘗試用ELISA去檢測，其實應該多動腦，該檢測活性的檢測活性，該做western的做western。ELISA試劑盒檢測方法簡單，靈敏度高。

㈡ HIV核酸檢測的HIV核酸檢測方法及程序

1.1 方法和試劑
1.1.1 方法
（1）檢測方法為商品化試劑盒和實驗室自建方法，商品化試劑應嚴格按說明書操作。下面介紹的方法是實驗室自建方法，供參考。
（2）檢測血漿或血清樣品使用逆轉錄PCR（RT-PCR）方法，建議第一輪PCR擴增使用RT-PCR一步法；檢測血細胞或組織樣品使用PCR方法。一般使用擴增兩輪的套式PCR方法。
（3）設立陽性、陰性及空白對照。陽性對照為與待測樣品同質、含有目的基因的樣品；陰性對照為與待測樣品同質、不含有目的基因的樣品。陽性和陰性對照樣品應與待檢樣品處理程序一致。陰性對照的設置數量應根據實驗樣品的數量設置在不同的位置。
1.1.2 試劑
（1）PCR引物：一般使用擴增HIVgag和/或pol和/或env和/或LTR等引物。進行RNA逆轉錄時可使用下游特異性引物或隨機引物。引物設計可參考文獻或自行設計，應盡量涵蓋常見的HIV流行毒株，也可使用兼並性引物。
（2）主要試劑：包括核酸提取純化、逆轉錄、PCR所需的試劑。使用商品化核酸提取純化試劑、逆轉錄酶反應試劑和PCR擴增試劑。
（3）抗污染試劑：實驗室自建檢測方法可使用抗污染試劑，參考尿嘧啶DNA糖基化酶抗污染方法。
1.2 擴增目的基因片段
1.2.1 樣品的採集和處理
1.2.2 核酸提取
可使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設備並按說明書操作。提取RNA時應注意防止RNA降解。DNA應置於-20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應置於-80℃保存。
1.2.3 逆轉錄合成cDNA
使用商品化試劑並按說明書操作。逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。建議使用商品化RT-PCR一步法試劑進行第一輪擴增反應。
1.2.4 PCR擴增反應
使用商品化試劑按說明書操作。PCR反應需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板（DNA或cDNA）。在擴增儀中，按照設定的程序進行擴增。一般使用二次擴增的套式PCR擴增方法。
1.3 擴增產物分析及結果報告
1.3.1 擴增產物分析
擴增產物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標准比較，判斷擴增片段是否在預期的分子量范圍內。其它擴增產物分析方法還有限制性內切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。自動化核酸擴增儀使用酶聯比色分析或熒光探針雜交等原理測定。
1.3.2 結果判定和報告
（1）實驗成立的條件：每一次檢測需同時做兩個陽性對照、兩個陰性對照，只有陽性對照擴增出預期的片段、陰性對照沒有擴增出任何片段、雙份平行樣品結果一致的情況下實驗才成立，可以作出核酸陽性或陰性反應結果的判定。
（2）HIV核酸檢測陽性：使用商品化檢測試劑，發現核酸陽性反應，應該重復採集樣品進行復測，復測結果呈核酸陽性反應則判定為核酸陽性，復測結果為核酸陰性反應則判為不確定結果，需進一步隨訪檢測。
（3）HIV核酸檢測陰性：只可報告本次實驗結果陰性。
（4）應在完成檢測後7個工作日內發出檢測報告。 2.1 方法
HIV核酸定量檢測主要基於靶核酸擴增RT-PCR和信號放大擴增兩種方法。國內常用的方法中，NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1採用國際單位（IU/ml），與NASBA的拷貝數關系基本為1:1；Amplicor Cobas 的拷貝數約為1.2～1.5國際單位；bDNA方法的拷貝數約為0.8～1.0國際單位。不同方法的關系與HIV的亞型有關。
2.2 試劑
必須使用經中國葯品生物製品監督管理局注冊批準的商品化試劑並嚴格按說明書操作。
2.2.1 靶核酸擴增試劑和性能
（1）RT-PCR擴增試劑
1）Amplicor HIV-1 Monitor v1.5（RT-PCR微孔板捕獲比色分析法），核酸手工提取（異丙醇沉澱），比色分析測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，可擴增HIV-1M組的A-H基因亞型。標准法的檢測線性范圍是400～750，000；超敏法的線性范圍是50～100，000 RNA拷貝/毫升。
2）COBAS Amplicor HIV-1 Monitor v1.5, 核酸手工提取（異丙醇沉澱），儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，可擴增HIV-1M組的A-H基因亞型。標准法的檢測線性范圍是400～750，000；超敏法的線性范圍是50～100，000 RNA拷貝/毫升。
3）COBAS AmpliPrep/COBAS Amplicor HIV-1 Monitor v1.5 （COBAS Amplicor 分析儀）,儀器提取核酸，儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，可擴增HIV-1M組的A-H基因亞型。標准方法的檢測線性范圍是400～1，000，000；超敏方法的線性范圍是50～100，000 RNA拷貝/毫升。
以上三種試劑均採用基於PCR擴增靶核酸檢測法，僅在設備的使用、自動化程度和樣品制備的方法有所不同。
4）COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Test（實時熒光探針RT-PCR分析法）, 儀器提取核酸,實時熒光探針PCR擴增儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，可擴增HIV-1M組的A-H基因亞型。檢測線性范圍是40～10，000，000 RNA拷貝/毫升，比上述三種方法的檢測線性范圍要寬，樣品可不經稀釋一次完成檢測。
以上四種試劑均使用一個內部定量標准品，1個陰性、1個弱陽性和1個強陽性外部外部質控品。均使用dUTP/UNG防污染試劑。
5）LCx HIV RNA Quantitative Assay（競爭性RT-PCR微顆粒酶免疫分析法）,手工或儀器提取核酸（活化硅膠柱純化），儀器測定。擴增靶核酸位置是pol（整合酶）基因區，可擴增HIV-1基因M組的A-G亞型和0組病毒，尤其可檢測M組C基因亞型和一些重組病毒。檢測線性范圍是50～1，000，000 RNA 拷貝/毫升；使用一個內部定量標准品和六個外部定量標准品。
6）RealTime HIV-1 Assay（實時熒光探針RT-PCR分析法）,使用獨特的雙鏈熒光探針。手工或儀器提取核酸（磁性顆粒純化），儀器測定。擴增靶核酸位置是pol（整合酶）基因區，擴增HIV-1基因亞型是M組的A-G亞型和0組以及N組病毒。檢測線性范圍是40～1，000，000 RNA 拷貝/毫升。使用一個內部定量標准品。檢測結果與LCx HIV RNA Quantitative Assay結果高度相關。
（2）基於核酸序列擴增試劑（NASBA擴增技術）：以等溫方式直接擴增HIV-1 RNA。
NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1（實時熒光探針分析法）, 使用熒游標記的分子信標探針技術檢測擴增子。手工或儀器提取核酸（硅膠純化，異丙醇沉澱）,儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，擴增HIV-1基因亞型是M組的A-G亞型。檢測線性范圍是50～3，000，000 RNA 國際單位/毫升；使用一個內部定量標准品，沒有陰陽性外部外部質控品。每次檢測8的整數倍樣品，直至48個。檢測結果與Versant HIV-1 RNA、和Amplicor HIV-1 Monitor v1.5 方法的結果有著高度的相關性。國際上已經推薦使用V2.0試劑盒。
2.2.2 信號放大擴增試劑和性能
Versant HIV-1 RNA 3.0.bDNA（分枝狀DNA探針雜交微孔板捕獲比色分析法）, 利用分枝狀DNA多級信號放大原理。無需RNA純化和PCR擴增步驟。離心濃縮病毒子並用去垢劑和蛋白酶K消化病毒釋放病毒RNA，儀器測定。擴增靶核酸位置是pol基因區，擴增HIV-1基因亞型是M組的A-H亞型，檢測線性范圍是50～500，000 RNA 拷貝/毫升；使用六個外部定量標准品，1個陰性、1個弱陽性和1個強陽性外部外部質控品。每次可檢測12的整數倍樣品。
以上試劑均可使用EDTA和ACD作為樣品的抗凝劑，NucliSens HIV-1 QT和NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1以及Versant HIV-1 RNA 3.0.bDNA試劑還可以使用肝素作為抗凝劑。如果必須使用經肝素處理的血漿樣品進行RT-PCR擴增，則必須在樣品中直接加肝素酶消化肝素。
2.2.3 實時熒光定量PCR技術
實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最後通過標准曲線對未知模板進行定量分析的方法。每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數Ct值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系。利用已知起始拷貝數的標准品可作出標准曲線，其中橫坐標代表起始拷貝數的對數，縱坐標代表Ct值）。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標准曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。
實時熒光定量PCR擴增的實驗檢測過程可分為：（1）樣品制備,抽提和濃縮目標RNA分子，並除去可能存在的抑制因子。（2）Real-time PCR，檢測PCR的產物使用熒游標記的寡核苷酸探針。檢測的原理基於熒光信號增長曲線與循環數相關。（3）RT-PCR反應，病毒RNA利用逆轉錄酶將RNA逆轉錄為cDNA，然後通過DNA聚合酶對特定片段進行擴增。（4）擴增產物的檢測，基於檢測閾值的設定，當病毒載量高時，低循環數即能檢測到熒光信號，當病毒載量低時，高循環數時才能檢測到熒光。循環數與樣品載量成線性關系。利用標准品製作循環數與載量的標准曲線就能對樣品載量進行定量檢測。 使用集合核酸擴增檢測技術和方法，利用核酸檢測方法的高度敏感性，對高度懷疑感染人群且抗體陰性的樣品進行集合核酸檢測，可及時發現窗口期感染者。該方法較單份樣品的核酸檢測具有更高的成本效益。
3.1 樣品集合程序
3.1.1 根據預處理樣品量，計算預形成一級和二級集合數量，在登記表格上記錄一級和二級集合及對應的原始樣品編號。
3.1.2 吸取130mL樣品，移入標記二級集合的離心管中；10份樣品形成一個1300mL的二級集合樣品，充分渦旋震盪混勻。
3.1.3 從5個二級集合管中分別吸取210mL樣品，移入標記有一級集合的離心管中，形成由50份樣品1050mL體積組成的一級集合樣品，充分渦旋震盪混勻。
3.1.4 從每個一、二級集合管中吸取500mL集合樣品，分裝至另一相應標記的離心管，用超敏感核酸檢測試劑進行檢測。
3.1.5 制備陰性集合外部質控品：使用50份HIV抗體和核酸陰性樣品，按上述步驟，分別集合成5個陰性二級集合外部質控品和1個一級集合外部質控品。
3.1.6 制備陽性集合外部質控品：從9份HIV抗體和核酸陰性樣品和一份至少含有HIV RNA10c/ml陽性樣品中，分別移取130mL加入離心管中，形成一個1300mL的陽性二級集合外部質控品。再分別從4個已制備好的陰性二級集合外部質控品和上述陽性二級集合外部質控品中，移取210mL至標記為一級陽性集合外部質控品的離心管中，形成一級陽性集合外部質控品。
3.1.7 一級和二級陰、陽性集合外部質控品分別用於RT-PCR中每一輪一級和二級集合樣品的檢測。
3.2 集合樣品的檢測和分解路線
使用商品化核酸檢測試劑，應嚴格按照試劑說明書操作。按照各商品化核酸試劑集合PCR的方案進行檢測，集合樣品的數量根據各試劑方案操作。方法簡述如下：
3.2.1 用HIV RNA RT-PCR超敏檢測方法對一級集合樣品進行檢測，陽性反應的一級集合樣品進入下一檢測步驟。
3.2.2 用HIV RNA RT-PCR超敏檢測方法對所有組成陽性一級集合的二級集合樣品進行檢測，陽性反應的二級集合樣品進入下一檢測步驟。
3.2.3 用HIV RNA RT-PCR標准檢測方法檢測所有組成陽性二級集合樣品的的10份單個樣品，確定核酸陽性的單個樣品。 HIV感染產婦所生嬰幼兒在出生後18個月內可應用HIV核酸（DNA或RNA）檢測進行早期HIV感染診斷。盡管HIV RNA檢測敏感性在感染早期較高（出生後1個月內），但是HIV DNA檢測不受母親圍產期抗逆轉錄病毒治療和人乳汁中抗逆轉錄病毒葯物以及嬰幼兒預防性抗逆轉錄病毒治療的干擾而影響早期診斷。另外，考慮母親血液污染因素，不推薦使用臍帶血進行HIV核酸檢測。嬰幼兒的抗體檢測流程和結果判斷見第二章（HIV抗體檢測）。
4.1 適用范圍
未滿18個月的HIV感染產婦所生嬰幼兒；未滿18個月的嬰幼兒，其母親HIV感染狀態不詳，兒童出現HIV相關臨床表現，臨床懷疑HIV感染者。
4.2 檢測程序及結果報告
4.2.1 於嬰兒出生後6周（42天）採集第一份血樣本（血樣本可制備成DBS或EDTA抗凝全血），送檢。
4.2.2 若第一份血樣本檢測呈陽性反應，盡快再次採集第二份血樣本進行檢測。若兩份血樣本檢測均呈陽性反應，報告「嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陽性」，診斷兒童HIV感染。及時對HIV感染兒童進行追蹤和病情監測，將其轉介到兒童抗病毒治療醫療服務機構，並為其提供機會性感染預防等服務措施；若第二份血樣本檢測呈陰性反應，待嬰兒滿3個月再次採集血樣本進行檢測。若第一份血樣本檢測呈陰性反應，繼續提供兒童保健和隨訪服務，待嬰兒滿3個月再次採集血樣本進行檢測。
4.2.3 若嬰兒滿3個月再次檢測呈陰性反應，報告「嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陰性」，按照未感染兒童處理，繼續提供兒童保健隨訪服務；於兒童滿12個月時，按照「HIV感染產婦所生兒童HIV抗體檢測流程」（圖4），開始HIV抗體檢測，最終確定兒童感染狀態。若嬰兒滿3個月再次檢測呈陽性反應，盡快再次採集血樣本進行檢測。第三份血樣本檢測呈陽性反應，報告「嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陽性」；若第三份血樣本檢測呈陰性反應，報告「嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陰性」；分別按照前述流程提供相應服務。
4.2.4 不同時間「嬰兒HIV感染早期診斷」檢測均呈陰性反應的喂哺母乳的兒童，應在完全停止喂哺母乳後的6周和3個月（若6周時檢測結果為陽性可盡快）再次采血進行核酸定性檢測，進行早期診斷。兒童滿18個月後則可直接進行抗體檢測。
4.2.5 如果嬰兒第一次采血時已滿3個月，但未滿12個月，則應盡快在不同時間採集兩份血樣本；同時將兩份血樣本送檢，按照前述流程進行檢測。如果兒童第一次采血時已滿12個月，則應首先按照「艾滋病感染產婦所生兒童HIV抗體檢測流程」（ 圖4）進行HIV抗體檢測。若兩種不同原理或廠家生產的HIV抗體檢測試劑檢測結果均為陰性，則排除兒童感染；若HIV抗體檢測試劑檢測結果呈陽性反應，不能通過抗體檢測確定兒童感染狀態，則可在不同時間採集兩份血樣本，按照前述流程進行「嬰兒HIV感染早期診斷」檢測。如果兒童第一次采血時已滿18個月，則應按照HIV抗體檢測流程（圖1）進行HIV抗體檢測，無需進行「嬰兒HIV感染早期診斷」檢測。

㈢ 泰國ATK檢測試劑怎麼使用

泰國ATK檢測試劑使用方法如下：
1、在進行樣本採集之前先把鼻子擦乾凈，然後打開鼻拭子的包裝，不要觸碰拭子頭。仰起頭，用手拿拭子尾部，然後將拭子一側貼著鼻孔內部沿鼻道伸入1-1.5厘米後，貼著鼻腔旋轉4圈以上，停留不少於15秒，然後用另外一個拭子在另一鼻腔重復操作。
2、把兩個採集到樣本的鼻拭子立即放入采樣管，拭子頭要放入保存液中旋轉混合超過30秒，然後用手擠壓裝有拭子頭的採集管5次以上。隔著採集管將拭子頭的液體擠干，最厚把拭子丟棄。
3、蓋緊采樣管蓋子後，將液體垂直滴入檢測卡樣本孔里。等待大約十分鍾後就可以根據說明書判斷結果了。檢測卡的「C」處顯示出紅色或紫色條帶，「T」處未顯示條帶則結果為陰性。檢測卡的「C」和「T」處均顯示出紅色或紫紅色條帶，T」處條帶顏色不論深淺，均為陽性結果。

㈣ 新冠檢測試劑c和t是什麼意思

根據最新通知，今後居民可以自行購買新冠試劑進行病毒抗原檢測，目的也是為了提高檢測速度，因為如果我們的檢測完全依靠核酸，面對傳染速度更快的奧密克戎會有一定困難。那新冠檢測試劑應該怎麼用呢?c和t代表的是什麼意思?

樣本採集
1、年齡14歲以上的，可自行進行鼻腔拭子采樣。自檢者先用衛生紙擤去鼻涕。小心拆開鼻拭子外包裝，避免手部接觸拭子頭。隨後頭部微仰，一手執拭子尾部貼一側鼻孔進入，沿下鼻道的底部向後緩緩深入
1-1.5 厘米後貼鼻腔旋轉至少4圈(停留時間不少於15秒)，隨後使用同一拭子對另一鼻腔重復相同操作。
2、年齡2-14
歲自檢者應由其他成人代為采樣。采樣時，先用衛生紙擤去鼻涕，隨後頭部微仰。采樣人員小心拆開鼻拭子外包裝，手部避免接觸拭子頭，一手輕扶被採集人員的頭部，一手執拭子貼一側鼻孔進入，沿下鼻道的底部向後緩緩深入
1 厘米後貼鼻腔旋轉至少4圈(停留時間不少於15秒)，隨後使用同一拭子對另一鼻腔重復相同操作。
抗原檢測
1、根據試劑說明書，將採集樣本後的鼻拭子立即置於采樣管中，拭子頭應在保存液中旋轉混勻至少30秒，同時用手隔著采樣管外壁擠壓拭子頭至少5次，確保樣本充分洗脫於采樣管中。
2、用手隔著采樣管外壁將拭子頭液體擠干後，將拭子棄去。采樣管蓋蓋後，將液體垂直滴入檢測卡樣本孔中。
廢棄物處理
1、隔離觀察人員。檢測結果不論陰性還是陽性，所有使用後的采樣拭子、采樣管、檢測卡等裝入密封袋由管理人員參照醫療廢物或按程序處理。
2、社區居民。檢測結果陰性的，使用後的所有鼻拭子、采樣管、檢測卡等裝入密封袋中後作為一般垃圾處理;檢測結果陽性的，在人員轉運時一並交由醫療機構按照醫療廢物處理。

㈤ elisa試劑盒實驗原理

上海科艾博生物（COIBO）科技
從大的方面說ELISA屬於酶免疫技術。 免疫酶技術是將酶作為標記物，標記抗體或抗原後，與相應的抗原或抗體發生反應，通過標記酶相應底物的顏色反應作抗原抗體的定性和定量的檢測依據。
目前應用最多的免疫酶技術是酶聯免疫吸附實驗（ELISA），如果要分類的話，它屬於異相固相酶免疫技術。所謂異相是指在檢測時不需要將酶標記抗原抗體和游離抗原抗體分開，所謂固相就是指的ELISA的96孔板固相載體了。看下面均相酶免疫測定的原理圖：
ELISA的主要原理很簡單，有這么三個， 1、包被 抗原或者抗體能以物理性吸附於固相載體表面，可能原理是蛋白質和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，吸附之後能保持抗原抗體反應等免疫活性； 2、標記 抗原或者抗體可通過共價鍵與酶連接成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其免疫活性和酶的催化特點； 3、顯色 酶結合物與相應包被在固相載體的抗原或者抗體結合後，也被固定在固相載體上，加入酶的底物之後可出現顯色反應，根據反應的顏色深淺可計算抗原或者抗體的相對含量。ELISA 實驗設計根據檢測對象的不同，我分別給童鞋們介紹抗原的檢測方法設計和抗體的檢測方法設計。抗原的檢測設計 1、雙抗夾心法 針對至少2個抗原決定簇的多價抗原。首先介紹一下抗原決定簇，抗原決定簇就是決定抗原性的特殊化學基團，也叫抗原表位，理論上一個抗原決定簇能誘導產生一種單克隆抗體（可能有童鞋又要問單克隆抗體是神馬東東了，以後介紹啊）。由6－12氨基酸或碳水基團組成，它可以是由連續序列（線性表位）組成或由不連續的蛋白質三維結構（構象表位）組成。臨床上具有2個抗原決定簇的多價抗原有很多，比較常見有HBsAg、AFP、HCG等大分子抗原。檢測步驟也簡單，就是包被、洗滌、加樣、洗滌、加樣、洗滌、顯色。具體說來是先將純化的相應抗體包被在固相載體上，再加入待測樣品，若其中含有待測抗原就會與固相抗體結合，洗掉雜質後，再加入酶標記的檢測抗體進行反應，洗掉多於的酶標抗體後，加入底物顯色，顯色與否以及顏色的深淺就代表了待測抗原是否存在以及相對含量了，簡單吧。
對於雙抗夾心法檢測大分子抗原要注意幾點，1.固相抗體和酶標檢測抗體一定是分別針對待測抗原的兩個不同抗原決定簇，不然兩個抗體就會為爭同一個決定簇而打架，會出現假陰性的不良結果；2.如果檢測的樣本是血清，就要注意風濕病患者體內內風濕因子RF這種奇葩異種抗體的存在，它能夠神奇地結合固相抗體和檢測抗體，造成假陽性的不良結果；3.包被的固相抗體含量一定是高於樣品中的抗原含量，不然檢測到的含量會比實際含量低；4.如果有童鞋想高端省事一些，將待測樣品與酶標檢測抗體同時加入固相載體，在酶標檢測抗體高於樣品中的待測抗原的情況下，會出現假陰性結果，這種現象書本叫鉤狀效應。 2、競爭法 針對小分子抗原。這種方法也可以用於大分子抗原，只是相對雙抗夾心法這種強悍的策略，競爭法完全沒有優勢，所以競爭法只在檢測小分子這個邊緣地帶發揮余熱了。臨床上主要用於T3、T4、孕酮等激素以及葯物等。檢測步驟與雙抗夾心法更簡單，包被、洗滌、加樣、洗滌、顯色，少了一步加樣的過程，但是設計上復雜一些，首先將純化的相應抗體包被在固相載體上，然後每組樣本需要分兩組，一組同時加入事先混勻好的酶標檢測抗原和樣本的混合物，一組只加入酶標記抗原，兩組顏色只差便是待測抗原的含量，有點暈啊。
對於競爭法也需要注意一點，酶標記抗原和待測樣本一定要事先混勻好，然後同時加入固相載體，不然會造成不公平競爭，檢測出現偏差；抗體的檢測設計 就方法來說，有間接法、雙抗原夾心法、競爭法和捕獲法四種設計。 1、 間接法，這個是檢測抗體最常用也最簡單的方法。操作步驟與雙抗夾心一樣，只是包被是純化的相應抗原而不是抗體了，加入樣品後洗滌，再加入的酶標記抗抗體，然後顯色，顏色深淺與樣品中待測抗體的濃度正相關。這個間接法的原理和步驟與雙抗夾心一樣一樣的，為了區分就把包被抗原檢測抗體叫做間接法了，以此類推，之前的雙抗夾心法也可以叫做直接法，命名其實就是這么回事，規則多了就容易讓人糊塗。間接法也有一些自己的特點，1.酶標記抗抗體可選擇性檢測抗體的亞型，可用於鑒別感染時期，如果是IgM那麼提示感染早期；2.酶標抗抗體檢測抗體特異性不高，容易產生假陽性，如果封閉不完全，可出現全板陽性，挺嚇人的。臨床上常用該方法檢測抗HCV抗體、抗HEV抗體、抗CMV抗體、抗HSV抗體、抗沙眼衣原體抗體等等。
2、 雙抗原夾心法，這個完全是山寨雙抗夾心法的。原理和步驟也與雙抗夾心一樣一樣的，與間接法相比，具有優越的靈敏度和特異性，但不是很常用，因為就目前的技術條件，想得到能用於ELISA檢測的純化抗原還是有一定的難度。臨床上常用於檢測HIV抗體初篩，TP抗體和抗HBs抗體等，這些檢測對特異性和靈敏度，准確性都要求特別高。
3、 競爭法，和檢測抗原設計的競爭法完全一致，臨床上用的不多，我仔細總結了一下兩個很具有代表性的，也各具特點。1、抗HBc抗體，檢測方法與抗原相同，包被抗原之後，分兩組，一組加入預先混勻的酶標抗體和待測樣品，一組只加入酶標抗體，兩組的顯色之差可代表待測抗體的相對含量，需注意的是待測抗體與酶標抗體是同一物質；2、抗HBe抗體檢測，方法與抗原競爭法設計稍有區別，包被的抗HBe抗體後，檢測也分兩組，一組先加入酶標HBeAg再立即加入待測樣品，一組只加酶標HBeAg，兩組顯色之差代表待測抗體的相對含量，這種設計中包被抗體和待測抗體是同一物質。值得注意的是混合組不是事先混勻再加入，而是先加入待測抗體後再加入酶標抗原。所有的這些復雜的注意事項確實很容易把人搞暈，但是童鞋們只需要記住一條，競爭很殘酷，我們就要想盡一切辦法保證競爭的公平性，這樣就不會錯。
4、 捕獲法，這種方法比較少用，由於具有識別抗體類型的優點，僅用於需要早期診斷的急性感染或者具有爆發性感染的疾病，如HAV-IgM、HBc-IgM、ToRCH等等。原理還是逃不脫經典的雙抗夾心，具體方法是先包被能識別抗體類別的抗抗體，洗滌後加樣品，再洗滌，加酶標記抗原，洗滌後顯色，這些步驟閉上眼睛都能寫出來。

最後說兩句，與抗原檢測不同，抗體檢測的設計不是根據抗體的結構特點了，這么多種設計方法，童鞋們用的時候就會選擇障礙了，掌握2個原則，1.實驗要求，如果需要特異性和准確性特別高，那肯定是雙抗原夾心法，要求馬馬虎虎，那就間接法，如果要明確抗體類型，最好的選擇就是捕獲法了；2.實驗成本，與純化抗體不一樣，有時候想要獲得純化的抗原是非常困難的，更別說兩種不同的純化抗原了，所以雙抗原夾心法臨床上用的並不多。ABS-ELISA順便說一下ABS-ELISA設計，其實是和上面說的一樣的，通過親和素-生物素系統（ABS）方法顯色反應，增加檢測靈敏度而已，但是增加操作步驟與實驗成本，而且現在單克隆抗體的技術越見成熟，抗體特異性和親和力大大提高，靈敏度已經不是問題，所以這些次等裝備已經不常用。
結果判定最後和童鞋說說ELISA結果判定，分定性和定量兩種。對於定性試驗，參比陰、陽性對照的吸光度，以P/N或者S/CO比值形式報告。1. P/N比值是指（待測樣本-空白對照）/（陰性樣本-空白對照），一般以P/N≥2.1判為陽性，或許求知慾旺盛的童鞋會問，那麼競爭法用P/N比值怎麼判，呵呵，這里先不說，賣個乖，你可以網路或者私信我啊；2. S/CO比值，S是待測樣本吸光度值，CO為CUT-OFF值，通常取值陰性對照平均值的2.1倍。S/CO比值≥1為陽性，競爭法S/CO比值≤1為陽性。定量檢測沒有什麼可說的，老老實實做標准曲線，既鍛煉實驗操作能力，又可作為實驗內部參照。
記得有這么個規定，定性檢測不能目測判斷，要憑借酶標儀檢測，定量要在每次實驗都得與待測樣本相同實驗條件下繪制標准曲線，有一難度，但是為了對實驗負責，你就從了吧。

㈥ 核酸含量的測定方法及原理都有哪些

核酸檢測的主要原理其實是反轉錄和聚合酶鏈式擴增反應。也叫做RT-PCR。目前對新型冠狀病毒進行的核酸檢測也主要採用此種方式。簡單來說就是採取患者鼻咽拭子、痰和其他下呼吸道分泌物、血液、糞便，檢測人員通過。核酸提取試劑盒提取患者標本里邊兒的核酸，然後把提取到的核酸放進檢測試劑中進行復制擴增。然後再根據檢測結果進行判斷如果是陰性代表沒有感染，如果是陽性代表有感染。目前對新型冠狀病毒核酸檢測會存在假陰性的可能，所以可以選擇多次測量。如果連續兩次核酸檢測為陰性，同時沒有臨床症狀可以排除感染，並且對已經感染了新型冠狀病毒肺炎的患者，如果連續兩次檢測核酸為陰性，注意間隔時間必須大於一天，同時臨床症狀緩解，影像學好轉也可以解除隔離。

㈦ 怎麼樣正確的進行ELISA試劑盒的檢測

最全的ELISA試劑盒說明書在這里（通用版）

規格：96T 48T
用途：科研實驗（僅供實驗室研究使用）
保存：2-8℃。
有效期：6個月

結合物的制備
1. 戊二醛交聯法
戊二醛是一種雙功能團試劑，它可以使酶與蛋白質的氨基通過它而聯結。鹼性磷酸一般用此法進行標記。交聯方法一步法、兩步法兩種。在一步法中戊二醛直接加入酶與抗體的混合物中，反應後即得酶標記抗體。
ELISA中常用的酶一般都用此法交聯。它具有操作簡便、有效和重復性好等優點。缺點是交聯反應是隨機的，酶與抗體交聯時分子間的比例不嚴格，結合物的大小也不均一，酶與酶，抗體與抗體之間也有可能交聯，影響效果。在兩步法中，先將酶與戊二醛作用，透析除去多餘的戊二醛後，再與抗體作用而形成酶標抗體。也可先將抗體與戊二醛作用，再與酶聯結。兩步法的產物中絕大部分的酶與蛋白質是以1:1的比例結合的，較一步法的酶結合物更有助於本底的改善以提高敏感度，但其偶聯的有效率較一步法低。
2. 過碘酸鹽氧化法：本法只適用於含糖量較高的酶。辣根過氧化物酶的標記常用此法。反應時，過碘酸鈉將HRP分子表面的多糖氧化為醛基很活潑，可與蛋白質上的氨基形成Schiff氏鹼而結合。酶標記物按克分子比例聯結，其最佳比例為：酶/抗體=1-2/1。此法簡便有效，一般認為是HRP最可取的標記方法，但也有人認為所有試劑較為強烈，各批實驗結果不易重演。
按以上方法制備的酶結合物一般都混有未結合物的酶和抗體。理論上，結合物中混有的游離酶一般不影響ELISA中最後的酶活性測定，因經過徹底洗滌，游離酶可被除去，並不影響最終的顯色。但游離的抗體則不同，它會與酶標抗體競爭相應的固相抗原，從而減少了結合到固相上的酶標抗體的量。因此制備的酶結合物應予純化，去除游離的酶和抗體後用於檢測，效果更好。純化的方法很多，分離大分子化合物的方法均可應用。硫酸銨鹽析法最為簡便，但效果並不理想，因為此法只能去除留在上清中的游離酶，但相當數量的游離抗體仍與酶結合物一起沉澱而不能分開。用離子交換層析或分子篩分離更為可取，高效液相層析法可將制備的結合物清晰地分成三個部分：游離酶、游離抗體和純結合物而取得最佳的分離效果，但費用較貴。
結合物製得後，在用作ELISA試劑前尚需確定其適當的工作濃度。使用過濃的結合物，既不經濟，又可使本底增高；結合物的濃度過低，則又影響檢測的敏感性。所以必須對結合物的濃度予以選擇。最適的工作濃度就是指結合物稀釋至這一濃度時，能維護一個低的本底，並獲得測定的最佳靈敏度，達到最合適的測定條件和測定費用的節省。就酶標抗體本身而言，它的有效工作濃度是指與其相應抗原包被的載體作試驗時，能得到陽性反應的最高稀釋度。例如某一HRP：抗人IgG制劑標明的工作濃度為1:5000，表示該制劑經1:5000稀釋後，在與人IgG包被的固相作ELISA試驗時，將發生陽性反應。但在用於具體的ELISA檢測中，酶標抗體的最適工作濃度受到固相載體的性質、包被抗原或抗體的純度以及整個檢測系統如標本、反應溫度和時間等的影響，因此必須在實際測定條件下進行"滴配"選擇能達到高敏感度的最大稀釋度作為試劑盒中的工作濃度。
結合物的保存
酶標抗體中的酶和抗體均為生物活性物質，保存不當，極易失活。高濃度的結合物較為穩定，冰凍乾燥後可在普通冰箱中保存一年左右，但凍干過程中引起活力的減低，而且使用時需經復溶，頗為不便。結合物溶液中加入等體積的甘油可在低溫冰箱或普通冰箱的冰格中較長時間保存。早期的ELISA試劑盒中的結合物一般均按以上兩種形式供應，配以稀釋液（見3.2.5）臨用時按標明的稀釋度稀釋成工作液。現在較先進的ELISA試劑盒均已用合適的緩沖液配成工作液，使用時不需再行稀釋，在4-8℃保存期可達6個月。由於蛋白質濃度較低，結合物易失活，需加入蛋白保護劑。另外再加入抗生素（例如慶大黴素）和防腐劑（HRP結合物加硫柳泵，AP結合物可加疊氮鈉），以防止細菌生長。
結合物的稀釋液
用於稀釋高濃度的結合物以配成工作液。為避免結合物在反應中直接吸附在固相載體上，在稀釋緩沖液中常加入高濃度的無關蛋白質（例如1%牛血清白蛋白），通過競爭以抑制結合物的吸附。一般還加入具有抑制蛋白質吸附於塑料表面的非離子型表面活性劑，如吐溫20，0.05%的濃度較為適宜。在間接測定抗體時，血清標本需稀釋後進行測定，也可應用這種稀釋液。
試劑盒組成

標本要求
1. 標本採集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於-20℃保存，但應避免反復凍融
2. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標准品的稀釋：本試劑盒提供原倍標准品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2. 加樣
分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘各步操作相同）、標准孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標准品准確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加於酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋後備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震盪混勻，37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以內進行。
操作程序總結：

計算
以標准物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標准曲線，根據樣品的OD值由標准曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標准物的濃度與OD值計算出標准曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

注意事項
1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後方可使用，酶標包被板開封後如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3. 各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其准確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鍾內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標准曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大於標准品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定，計算時請最後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為准.
8. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。
洗滌液
在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水。
酶反應終止液
常用的HRP反應終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的最終體積而異，在板式ELISA中一般採用2mol/L。
陽性對照品和陰性對照品
陽性對照品和陰性對照品是檢驗試驗有效性的控製品，同時也作為判斷結果的對照，因此對照品，特別是陽性對照品的基本組成應盡量與檢測標本的組成相一致。以人血清為標本的測定，對照品最好也為人血清，因為正常人血清在各種ELISA模式中可產生不同程度的本底。由於大量正常人血甭較難得到，國外試劑盒中的對照品多以復鈣人血漿為原料，即在血漿中加入鈣離子，使其中的纖維蛋白質凝固，除去凝塊後所得的液體，其組成與血清相似。陰性對照品須先行檢測，確定其中不含待測物質。例如HBsAg檢測的陰性對照品中不可含HBsAg，最好抗HBs也是陰性。陽性對照品多以含蛋白保護劑的緩沖液為基質，其中加入一定量的待檢物質，此量最好在試劑說明書中標明。加入的量應與試劑的敏感度相稱，在測定中得到的吸光值與受檢標本吸光值比較，可對標本中受檢物質的量有一個粗略的估計。國外檢測HBsAg的ELISA試劑盒檢測敏感度約為0.5ng/ml，陽性對照品中含量約為10ng/ml。在對照品中一般加入抗生素和防腐劑，以利保存。
包被用抗體
包被固相載體的抗體應具有高親和力和高特異性，可取材於抗血清或含單克隆抗體的腹水或培養液。如免疫用抗原中含有雜質（即便是極微量的），在抗血清中將出現雜抗體，必須除去（可用吸收法）後才能用於ELISA，以保證試驗的特異性。抗血清不能直接用於包被，應先提取IgG，通常採用硫酸銨鹽析和Sephadex凝膠過濾法。一般經硫酸銨鹽析粗提的IgG已可用於包被，高度純化的IgG性質不穩定。如需用高親和力的抗體包被以提高試驗的敏感性，則可採用親和層析法以除去抗血清中含量較多的非特異性IgG。腹水中單抗的濃度較高，特異性亦較強，因此不需要作吸收和親和層析處理，一般可將腹水作適當稀釋後直接包被，必要時也可用純化的IgG。應用單抗包被時應注意，一種單抗僅針對一種抗原決定簇，在某些情況下，用多種單抗混合包被，可取得更好的效果。
包被的條件
包被用抗原或抗體的濃度，包被的溫度和時間，包被液的pH等應根據試驗的特點和材料的性質而選定。抗體和蛋白質抗原一般採用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液，也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在ELISA板孔中加入包被液後，在4-8℃冰箱中放置過夜，37℃中保溫2小時被認為具有同等的包被效果。包被的最適當濃度隨載體和包被物的性質可有很大的變化，每批材料需通過實驗與酶結合物的濃度協調選定。一般蛋白質的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml。
包被的方式
將抗原或抗體固定在過程稱為包被。換言之，包被即是抗原或抗體結合到固相載體表面的過程。蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用於。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響。載體對不同蛋白質的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。 IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力，其聯結多發生在Fc段上，抗體結合點暴露於外，因此抗體的包被一般均採用直接吸附法。蛋白質抗原大多也可採用與抗體相似的方法包被。當抗原決定簇存在於或鄰近於疏水區域時，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下，直接包被效果不佳，可以採用間接的捕獲包被法，即先將針對該抗原的特異抗體作預包被，其後通過抗原抗體反應使抗原固相化。此間接結合在固相上的抗原遠離載體表面，其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質較多的抗原也可採用捕獲包被法，試驗的特異性、敏感性均由此得以改善，重復性亦佳。間接包被的另一優點是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至於/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質抗原可採用特殊的包被方式。例如，在檢測抗DNA抗體時，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結合。可將聚苯乙烯板先經紫外線照射，以增加其吸附性能。固相載體先用鹼性蛋白質，如聚賴氨酸、魚精蛋白等作預包被，也可提高核酸的結合力。也可用親和素生物素系統作間接包被，即用親和素先包被載體，然後加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴大應用於各種抗原物質的定量測定。
脂類物質無法與固相載體結合，可將其在有機溶劑中溶解後加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風吹乾，待酒精揮發後，讓脂質自然干固在固相表面。抗心磷脂抗體的ELISA試劑一般採用這種包被方式。
洗板方法：
1. 手工洗板方法：吸去或甩掉酶標板內的液體；在實驗台上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鍾，根據需要，重復此過程數次。
2. 自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中。待檢樣本：體液、血清、血漿、細胞培養上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等

㈧ 檢測化學試劑常用手段，例如鹽酸，硫酸，氫氧化鈉，氨水，雙氧水等

檢測鹽酸的常用方法：取出少量，加入一定量的硝酸銀溶液，有白色沉澱（氯化銀）析出，再加入少量稀硝酸，沉澱不溶解；
檢測硫酸的常用方法：取出少量，加入一定量的氯化鋇或者硝酸鋇溶液，有白色沉澱（硫酸鋇）析出，再加入少量稀硝酸，沉澱不溶解；
註：檢驗氫離子用紫色石蕊試液，酸可以使紫色石蕊試液變紅
檢測氨水的常用方法：取出少量，用濕潤的紫色石蕊試紙，會使紫色石蕊試紙變藍（氨水具有弱鹼性）
檢測雙氧水的常用方法：取出少量，在酒精燈下加熱，試劑中有氣泡產生，將帶火星的木條階級試劑瓶口，帶火星的木條能復燃（有氧氣產生）
檢測氫氧化鈉（溶液）的常用方法：取出少量，將其中加入少量稀鹽酸，5分鍾後，用Ph試紙，發現試紙無變化

㈨ 哪些行為可能導致核酸檢測過程中出現「假陰性」

在進行核酸檢測中，由於採集到的新冠病毒核酸含量過低、探針與採集標本物的結合不夠緊密等原因，可能導致核酸檢測過程中出現「假陰性」。

日前，據媒體報道，最近一則「可樂、橙汁、醋、泡菜會使核酸檢測出現假陽性」的消息廣為流傳，其實，這種情況在實際檢測結果中並不會出現，是假的。專家介紹，在做核酸檢測之前2小時內不吃東西，提前半小時不喝水，主要是為了避免核酸檢測過程中出現「假陰性」的情況。

我認為，在實際核酸檢測過程中，以上介紹的相關情況，可能會導致核酸檢測過程中，出現「假陰性」結果，但這僅是極個別情況，對此，小夥伴們不必過於糾結。目前，隨著核酸檢測技術的進步，以及在核酸檢測過程中，核酸檢測人員對於檢測結論還需要經過多重比對，才能確認最終檢測結果，以上的「假陰性」情況基本不會出現。我想，相信科學而不盲從，按照相關要求及時進行核酸檢測，並做好自身防護，才能築牢抵禦病毒的有力屏障。