⑴ 【求助/交流】目的基因與表達載體連接時有哪些要點
2.片段和載體酶且要完全，確定大小沒問題 不過有些載體本身就很很難連接！ 建議在連接時，先加入載體和目的基因，85度熱浴15min,除去殘留的酶和未純化干凈的雜蛋白。然後再加入酶和BUFFER。 適當延長連接時間24小時以內都沒問題的！ 如果還是不行，就試試對載體去磷酸化，每一步處理都要在結束後熱變性，失活殘留的酶，適當加大目的基因的量（10以內），連接溫度也可以在4-16度內用PCR做個梯度！不過如果有平末端的，就不用做這個梯度了。dfdxhghg(站內聯系TA)我們只做醫學論文，所以更專業！我們全部的工作人員均來自醫學院校和附屬醫院，全部擁有碩士以上學歷，有豐富的論文寫作經驗。做醫學論文，我們有比其他公司無法比擬的優勢！很多論文公司的人員根本不懂醫學，醫學論文等專業知識上面很難溝通和探討。
⑵ 目的基因片段與載體DNA連接的主要形式呢急…再次感謝！！！
1、黏性末端DNA的連接：單酶切黏性末端、雙酶切黏性末端、不規則黏性末端
2、平末端DNA的連接：直接連接法、同聚物加尾法、銜接物連接法、DNA接頭連接法、PCR法引入酶切位點的連接
1、限制性內切酶鏈接 2、TOPO克隆（一種克隆技術） 3、網關系統（門戶系統） 4、平端連接
⑶ 常用的目的基因與載體的連接方法有哪些
目前已知有三種方法可以用來在體外連接DNA片段：
第一種方法是，用DNA連接酶連接具有互補粘性末端的DNA片段；（人教版高中生物選修3中提到的E·coliDNA連接酶，來源於大腸桿菌，可用於連接粘性末端；T4DNA連接酶，來源於T4噬菌體，可用於連接粘性末端和平末端，但連接效率低。） 第二種方法是，用T4DNA連接酶直接將平末端的DNA片段連接起來，或是用末端脫氧核苷酸轉移酶給具平末端的DNA片段加上poly（dA）-poly（dT）尾巴之後，再用DNA連接酶將它們連接起來； 第三種方法是，先在DNA片段末端加上化學合成的銜接物或接頭，使之形成粘性末端之後，再用DNA連接酶將它們連接起來。這三種方法雖然互有差異，但共同的一點都是利用DNA連接酶所具有的連接和封閉單鏈DNA的功能。 粘性末端DNA片段的連接 DNA連接酶最突出的特點是，它能夠催化外源DNA和載體分子之間發生連接作用，形成重組的DNA分子。 平末端DNA片段的連接 常用的平末端DNA片段連接法，主要有同聚物加尾法、銜接物連接法及接頭連接法。
⑷ 常用的目的基因與載體的連接方法有哪些
目前已知有三種方法可以用來在體外連接DNA片段：
第一種方法是，用DNA連接酶連接具有互補粘性末端的DNA片段；（人教版高中生物選修3中提到的E·coliDNA連接酶，來源於大腸桿菌，可用於連接粘性末端；T4DNA連接酶，來源於T4噬菌體，可用於連接粘性末端和平末端，但連接效率低。）
第二種方法是，用T4DNA連接酶直接將平末端的DNA片段連接起來，或是用末端脫氧核苷酸轉移酶給具平末端的DNA片段加上poly（dA）-poly（dT）尾巴之後，再用DNA連接酶將它們連接起來；
第三種方法是，先在DNA片段末端加上化學合成的銜接物或接頭，使之形成粘性末端之後，再用DNA連接酶將它們連接起來。這三種方法雖然互有差異，但共同的一點都是利用DNA連接酶所具有的連接和封閉單鏈DNA的功能。
粘性末端DNA片段的連接
DNA連接酶最突出的特點是，它能夠催化外源DNA和載體分子之間發生連接作用，形成重組的DNA分子。
平末端DNA片段的連接
常用的平末端DNA片段連接法，主要有同聚物加尾法、銜接物連接法及接頭連接法。
⑸ 能將目的基因與載體的鏈接方法說的詳細一點嗎謝謝！
載體一般用質粒，質粒是環狀的DNA分子。用限制酶將目的基因切下來後，用同樣的限制酶去切質粒，這樣質粒就變成了一個帶缺口的環狀DNA，又因為質粒和目的基因是用同種限制酶切下來的，所以它們的黏性末端的鹼基是相同的，在DNA連接酶的作用下，鹼基互補配對，DNA連接酶連接的是脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵，這樣，目的基因就與載體連接在一起了。
⑹ 如何將目的基因與運載體連接起來形成重組dna分子
使用限制酶。謝謝採納。
⑺ 如何將目的基因與已經構建好的載體拼接
設計引物，引物兩端帶有設計好的酶切位點，找個有目的基因的細胞，提了ran，然後把目的片段p出來，然後跑膠，試劑盒回收目的片段。把載體和目的片段用同樣的雙酶切，再跑膠，回收切開的載體和目的片段，連接吧。
⑻ 基因工程中，載體與載體連接物，目的基因與目的基因連接物，目的基因與載體連接物分別是指什麼，滿意的話
經過同一種限制性內切酶切割後會產生相同的粘性末端，所以目的基因可與目的基因連接，載體可與載體連接，也有目的基因和載體連接。
用限制性內切酶切了以後，讓片段自己連接，就會出現三種連接方式，然後我們選擇出來需要的重組片段
⑼ 目的基因與載體連接不上，為什麼
如果只用一種限制酶有可能倒敘相連，而這樣在篩選的時候會被認為沒有插入目的基因
⑽ 要將目的基因與載體連接起來,在基因操作上應選用啥
相同的限制性核酸內切酶及DNA連接酶 前者在供體和受體上分別進行切割 使目的基因的兩端與運載體有相同的粘性末端 DNA連接酶則將其連接
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