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核酸抗體檢測用什麼方法

發布時間:2024-02-22 14:22:58

❶ 核酸檢測是怎麼檢測

核酸檢測是通過磁分離技術將病毒核酸分離,可檢查艾滋病、乙肝或丙肝,還可用於新冠病毒的檢查。核酸檢測是採用PCR擴增方法進行檢測血液中是否存在病毒核酸,是利用磁珠上標記特異性吸附特異性核酸,然後在通過磁分離技術將病毒核酸分離出來,適合用來檢查艾滋病、乙肝或者丙肝等疾病的感染。核酸檢查是准確度比較高,靈敏度高的醫學方法,但是核酸檢查的成本高,需要去三甲醫院才可以進行檢查,而且核酸檢查適合於目前的新冠狀病毒感染者,可以及時的區分出患者。

❷ 核酸有幾種檢測方法

核酸檢測主要是鼻拭子或咽拭子法,經由鼻孔或口腔插入取得上呼吸道分泌物標本後送實驗室檢測。核酸檢測主要是指目前對於新型冠狀病毒肺炎的一種確診的實驗手段,核酸檢測一般分為鼻拭子、咽拭子或者肺泡灌洗液以及痰液,通過呼吸道的標本,我們在實驗室里可以檢測2019新型冠狀病毒的核酸,從而作為臨床診斷的一個重要的依據。那臨床上目前最常採用的檢測方法是鼻拭子或者是咽拭子,操作的時候由醫護人員採用特製的長柄取樣的棉簽,經由鼻孔或者經由口腔插入到鼻腔及咽腔中,在咽喉壁或者鼻腔的粘膜上進行塗抹,取得上呼吸道分泌物標本,這個標本取出之後再送到實驗室進行相關的核酸檢測。在做的過程中患者不用緊張,可能會有一些輕微的不適例如惡心,相信配合好醫護人員的話,能夠很快完成這個檢查,不會給您帶來很大的影響。

❸ 核酸幾種方法

1.定磷法。簡單快捷,靈敏度高,但易受蛋白質和核苷酸影響。
2.定糖法。靈敏度高,但特異性差,戊糖也會產生反應,容易產生干擾。
3.紫外線吸收法。適用於濃度大的核酸溶液,而人體感染新冠病毒後,咽部所含的病毒量極少,無法通過此種方法被檢測。
4.熒光法。目前廣泛被使用的是熒光定量RT-PCR檢測法,通過對標本進行逆轉錄擴增、使病毒片段達到一定數量,可以被檢測到,但是由於受采樣標本、運輸等多種因素影響,也有假陰性的可能。

❹ 核酸檢測方法有哪些

核酸檢測採用咽拭子檢測,有口咽拭子采樣和鼻咽拭子采樣兩種方式。

口咽拭子采樣就是在咽喉部位用棉簽塗擦,刷取咽喉部位上皮細胞的檢測。受檢測者只要放鬆心情,張口發出「啊——」的聲音就可以了,檢測過程並沒有創傷風險,是非常安全的檢測。

檢測時可能會有惡心、想要嘔吐的不適感覺,不過這些不適症狀通常只需要半分鍾到兩分鍾左右就可以完全緩解了。鼻咽拭子采樣是將一根細棉簽深入鼻孔,從下鼻道深入抵達鼻咽後壁,然後捻轉棉簽取樣。棉簽進入鼻腔的深度約為鼻尖到耳垂的距離。

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核酸檢測相關知識:

核酸檢測是檢測病毒的方法,它可以更早發現感染。現在臨床中對乙肝、丙肝、艾滋病都開展了核酸檢測,可以在抗體產生前檢測到血液中是否存在病毒。而一些呼吸道疾病可以通過咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸檢測來判斷是否感染,以及推測是否具有傳染性。

季節性流感、禽流感、冠狀病毒感染等通過咽拭子檢測可以方便地判斷出上呼吸道是否存在病毒成份,從而判斷被檢測者是否屬於感染者。

新冠病毒的核酸檢測已經是比較成熟的檢測方法了,只要在咽喉部位擦拭幾秒鍾就可以採集到標本。通過分析判斷是否有新冠病毒的核酸成分,可以盡早發現感染者,甚至在感染者出現症狀前就可以檢測到陽性。

感染者經過隔離治療後咽拭子檢測陰性說明病毒已經清除,不具有傳染性了。目前兩次咽拭子核酸檢測陰性是確診病例和無症狀感染者解除隔離的標准之一。

❺ HIV核酸檢測的HIV核酸檢測方法及程序

1.1 方法和試劑
1.1.1 方法
(1)檢測方法為商品化試劑盒和實驗室自建方法,商品化試劑應嚴格按說明書操作。下面介紹的方法是實驗室自建方法,供參考。
(2)檢測血漿或血清樣品使用逆轉錄PCR(RT-PCR)方法,建議第一輪PCR擴增使用RT-PCR一步法;檢測血細胞或組織樣品使用PCR方法。一般使用擴增兩輪的套式PCR方法。
(3)設立陽性、陰性及空白對照。陽性對照為與待測樣品同質、含有目的基因的樣品;陰性對照為與待測樣品同質、不含有目的基因的樣品。陽性和陰性對照樣品應與待檢樣品處理程序一致。陰性對照的設置數量應根據實驗樣品的數量設置在不同的位置。
1.1.2 試劑
(1)PCR引物:一般使用擴增HIVgag和/或pol和/或env和/或LTR等引物。進行RNA逆轉錄時可使用下游特異性引物或隨機引物。引物設計可參考文獻或自行設計,應盡量涵蓋常見的HIV流行毒株,也可使用兼並性引物。
(2)主要試劑:包括核酸提取純化、逆轉錄、PCR所需的試劑。使用商品化核酸提取純化試劑、逆轉錄酶反應試劑和PCR擴增試劑。
(3)抗污染試劑:實驗室自建檢測方法可使用抗污染試劑,參考尿嘧啶DNA糖基化酶抗污染方法。
1.2 擴增目的基因片段
1.2.1 樣品的採集和處理
1.2.2 核酸提取
可使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設備並按說明書操作。提取RNA時應注意防止RNA降解。DNA應置於-20℃保存,RNA和需長期保存的DNA應置於-80℃保存。
1.2.3 逆轉錄合成cDNA
使用商品化試劑並按說明書操作。逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中,在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。建議使用商品化RT-PCR一步法試劑進行第一輪擴增反應。
1.2.4 PCR擴增反應
使用商品化試劑按說明書操作。PCR反應需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶(如Taq酶等)、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板(DNA或cDNA)。在擴增儀中,按照設定的程序進行擴增。一般使用二次擴增的套式PCR擴增方法。
1.3 擴增產物分析及結果報告
1.3.1 擴增產物分析
擴增產物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法,與分子量標准比較,判斷擴增片段是否在預期的分子量范圍內。其它擴增產物分析方法還有限制性內切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。自動化核酸擴增儀使用酶聯比色分析或熒光探針雜交等原理測定。
1.3.2 結果判定和報告
(1)實驗成立的條件:每一次檢測需同時做兩個陽性對照、兩個陰性對照,只有陽性對照擴增出預期的片段、陰性對照沒有擴增出任何片段、雙份平行樣品結果一致的情況下實驗才成立,可以作出核酸陽性或陰性反應結果的判定。
(2)HIV核酸檢測陽性:使用商品化檢測試劑,發現核酸陽性反應,應該重復採集樣品進行復測,復測結果呈核酸陽性反應則判定為核酸陽性,復測結果為核酸陰性反應則判為不確定結果,需進一步隨訪檢測。
(3)HIV核酸檢測陰性:只可報告本次實驗結果陰性。
(4)應在完成檢測後7個工作日內發出檢測報告。 2.1 方法
HIV核酸定量檢測主要基於靶核酸擴增RT-PCR和信號放大擴增兩種方法。國內常用的方法中,NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1採用國際單位(IU/ml),與NASBA的拷貝數關系基本為1:1;Amplicor Cobas 的拷貝數約為1.2~1.5國際單位;bDNA方法的拷貝數約為0.8~1.0國際單位。不同方法的關系與HIV的亞型有關。
2.2 試劑
必須使用經中國葯品生物製品監督管理局注冊批準的商品化試劑並嚴格按說明書操作。
2.2.1 靶核酸擴增試劑和性能
(1)RT-PCR擴增試劑
1)Amplicor HIV-1 Monitor v1.5(RT-PCR微孔板捕獲比色分析法),核酸手工提取(異丙醇沉澱),比色分析測定。擴增靶核酸位置是gag基因區,可擴增HIV-1M組的A-H基因亞型。標准法的檢測線性范圍是400~750,000;超敏法的線性范圍是50~100,000 RNA拷貝/毫升。
2)COBAS Amplicor HIV-1 Monitor v1.5, 核酸手工提取(異丙醇沉澱),儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區,可擴增HIV-1M組的A-H基因亞型。標准法的檢測線性范圍是400~750,000;超敏法的線性范圍是50~100,000 RNA拷貝/毫升。
3)COBAS AmpliPrep/COBAS Amplicor HIV-1 Monitor v1.5 (COBAS Amplicor 分析儀),儀器提取核酸,儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區,可擴增HIV-1M組的A-H基因亞型。標准方法的檢測線性范圍是400~1,000,000;超敏方法的線性范圍是50~100,000 RNA拷貝/毫升。
以上三種試劑均採用基於PCR擴增靶核酸檢測法,僅在設備的使用、自動化程度和樣品制備的方法有所不同。
4)COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Test(實時熒光探針RT-PCR分析法), 儀器提取核酸,實時熒光探針PCR擴增儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區,可擴增HIV-1M組的A-H基因亞型。檢測線性范圍是40~10,000,000 RNA拷貝/毫升,比上述三種方法的檢測線性范圍要寬,樣品可不經稀釋一次完成檢測。
以上四種試劑均使用一個內部定量標准品,1個陰性、1個弱陽性和1個強陽性外部外部質控品。均使用dUTP/UNG防污染試劑。
5)LCx HIV RNA Quantitative Assay(競爭性RT-PCR微顆粒酶免疫分析法),手工或儀器提取核酸(活化硅膠柱純化),儀器測定。擴增靶核酸位置是pol(整合酶)基因區,可擴增HIV-1基因M組的A-G亞型和0組病毒,尤其可檢測M組C基因亞型和一些重組病毒。檢測線性范圍是50~1,000,000 RNA 拷貝/毫升;使用一個內部定量標准品和六個外部定量標准品。
6)RealTime HIV-1 Assay(實時熒光探針RT-PCR分析法),使用獨特的雙鏈熒光探針。手工或儀器提取核酸(磁性顆粒純化),儀器測定。擴增靶核酸位置是pol(整合酶)基因區,擴增HIV-1基因亞型是M組的A-G亞型和0組以及N組病毒。檢測線性范圍是40~1,000,000 RNA 拷貝/毫升。使用一個內部定量標准品。檢測結果與LCx HIV RNA Quantitative Assay結果高度相關。
(2)基於核酸序列擴增試劑(NASBA擴增技術):以等溫方式直接擴增HIV-1 RNA。
NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1(實時熒光探針分析法), 使用熒游標記的分子信標探針技術檢測擴增子。手工或儀器提取核酸(硅膠純化,異丙醇沉澱),儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區,擴增HIV-1基因亞型是M組的A-G亞型。檢測線性范圍是50~3,000,000 RNA 國際單位/毫升;使用一個內部定量標准品,沒有陰陽性外部外部質控品。每次檢測8的整數倍樣品,直至48個。檢測結果與Versant HIV-1 RNA、和Amplicor HIV-1 Monitor v1.5 方法的結果有著高度的相關性。國際上已經推薦使用V2.0試劑盒。
2.2.2 信號放大擴增試劑和性能
Versant HIV-1 RNA 3.0.bDNA(分枝狀DNA探針雜交微孔板捕獲比色分析法), 利用分枝狀DNA多級信號放大原理。無需RNA純化和PCR擴增步驟。離心濃縮病毒子並用去垢劑和蛋白酶K消化病毒釋放病毒RNA,儀器測定。擴增靶核酸位置是pol基因區,擴增HIV-1基因亞型是M組的A-H亞型,檢測線性范圍是50~500,000 RNA 拷貝/毫升;使用六個外部定量標准品,1個陰性、1個弱陽性和1個強陽性外部外部質控品。每次可檢測12的整數倍樣品。
以上試劑均可使用EDTA和ACD作為樣品的抗凝劑,NucliSens HIV-1 QT和NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1以及Versant HIV-1 RNA 3.0.bDNA試劑還可以使用肝素作為抗凝劑。如果必須使用經肝素處理的血漿樣品進行RT-PCR擴增,則必須在樣品中直接加肝素酶消化肝素。
2.2.3 實時熒光定量PCR技術
實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,最後通過標准曲線對未知模板進行定量分析的方法。每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數Ct值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系。利用已知起始拷貝數的標准品可作出標准曲線,其中橫坐標代表起始拷貝數的對數,縱坐標代表Ct值)。因此,只要獲得未知樣品的Ct值,即可從標准曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。
實時熒光定量PCR擴增的實驗檢測過程可分為:(1)樣品制備,抽提和濃縮目標RNA分子,並除去可能存在的抑制因子。(2)Real-time PCR,檢測PCR的產物使用熒游標記的寡核苷酸探針。檢測的原理基於熒光信號增長曲線與循環數相關。(3)RT-PCR反應,病毒RNA利用逆轉錄酶將RNA逆轉錄為cDNA,然後通過DNA聚合酶對特定片段進行擴增。(4)擴增產物的檢測,基於檢測閾值的設定,當病毒載量高時,低循環數即能檢測到熒光信號,當病毒載量低時,高循環數時才能檢測到熒光。循環數與樣品載量成線性關系。利用標准品製作循環數與載量的標准曲線就能對樣品載量進行定量檢測。 使用集合核酸擴增檢測技術和方法,利用核酸檢測方法的高度敏感性,對高度懷疑感染人群且抗體陰性的樣品進行集合核酸檢測,可及時發現窗口期感染者。該方法較單份樣品的核酸檢測具有更高的成本效益。
3.1 樣品集合程序
3.1.1 根據預處理樣品量,計算預形成一級和二級集合數量,在登記表格上記錄一級和二級集合及對應的原始樣品編號。
3.1.2 吸取130mL樣品,移入標記二級集合的離心管中;10份樣品形成一個1300mL的二級集合樣品,充分渦旋震盪混勻。
3.1.3 從5個二級集合管中分別吸取210mL樣品,移入標記有一級集合的離心管中,形成由50份樣品1050mL體積組成的一級集合樣品,充分渦旋震盪混勻。
3.1.4 從每個一、二級集合管中吸取500mL集合樣品,分裝至另一相應標記的離心管,用超敏感核酸檢測試劑進行檢測。
3.1.5 制備陰性集合外部質控品:使用50份HIV抗體和核酸陰性樣品,按上述步驟,分別集合成5個陰性二級集合外部質控品和1個一級集合外部質控品。
3.1.6 制備陽性集合外部質控品:從9份HIV抗體和核酸陰性樣品和一份至少含有HIV RNA10c/ml陽性樣品中,分別移取130mL加入離心管中,形成一個1300mL的陽性二級集合外部質控品。再分別從4個已制備好的陰性二級集合外部質控品和上述陽性二級集合外部質控品中,移取210mL至標記為一級陽性集合外部質控品的離心管中,形成一級陽性集合外部質控品。
3.1.7 一級和二級陰、陽性集合外部質控品分別用於RT-PCR中每一輪一級和二級集合樣品的檢測。
3.2 集合樣品的檢測和分解路線
使用商品化核酸檢測試劑,應嚴格按照試劑說明書操作。按照各商品化核酸試劑集合PCR的方案進行檢測,集合樣品的數量根據各試劑方案操作。方法簡述如下:
3.2.1 用HIV RNA RT-PCR超敏檢測方法對一級集合樣品進行檢測,陽性反應的一級集合樣品進入下一檢測步驟。
3.2.2 用HIV RNA RT-PCR超敏檢測方法對所有組成陽性一級集合的二級集合樣品進行檢測,陽性反應的二級集合樣品進入下一檢測步驟。
3.2.3 用HIV RNA RT-PCR標准檢測方法檢測所有組成陽性二級集合樣品的的10份單個樣品,確定核酸陽性的單個樣品。 HIV感染產婦所生嬰幼兒在出生後18個月內可應用HIV核酸(DNA或RNA)檢測進行早期HIV感染診斷。盡管HIV RNA檢測敏感性在感染早期較高(出生後1個月內),但是HIV DNA檢測不受母親圍產期抗逆轉錄病毒治療和人乳汁中抗逆轉錄病毒葯物以及嬰幼兒預防性抗逆轉錄病毒治療的干擾而影響早期診斷。另外,考慮母親血液污染因素,不推薦使用臍帶血進行HIV核酸檢測。嬰幼兒的抗體檢測流程和結果判斷見第二章(HIV抗體檢測)。
4.1 適用范圍
未滿18個月的HIV感染產婦所生嬰幼兒;未滿18個月的嬰幼兒,其母親HIV感染狀態不詳,兒童出現HIV相關臨床表現,臨床懷疑HIV感染者。
4.2 檢測程序及結果報告
4.2.1 於嬰兒出生後6周(42天)採集第一份血樣本(血樣本可制備成DBS或EDTA抗凝全血),送檢。
4.2.2 若第一份血樣本檢測呈陽性反應,盡快再次採集第二份血樣本進行檢測。若兩份血樣本檢測均呈陽性反應,報告「嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陽性」,診斷兒童HIV感染。及時對HIV感染兒童進行追蹤和病情監測,將其轉介到兒童抗病毒治療醫療服務機構,並為其提供機會性感染預防等服務措施;若第二份血樣本檢測呈陰性反應,待嬰兒滿3個月再次採集血樣本進行檢測。若第一份血樣本檢測呈陰性反應,繼續提供兒童保健和隨訪服務,待嬰兒滿3個月再次採集血樣本進行檢測。
4.2.3 若嬰兒滿3個月再次檢測呈陰性反應,報告「嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陰性」,按照未感染兒童處理,繼續提供兒童保健隨訪服務;於兒童滿12個月時,按照「HIV感染產婦所生兒童HIV抗體檢測流程」(圖4),開始HIV抗體檢測,最終確定兒童感染狀態。若嬰兒滿3個月再次檢測呈陽性反應,盡快再次採集血樣本進行檢測。第三份血樣本檢測呈陽性反應,報告「嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陽性」;若第三份血樣本檢測呈陰性反應,報告「嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陰性」;分別按照前述流程提供相應服務。
4.2.4 不同時間「嬰兒HIV感染早期診斷」檢測均呈陰性反應的喂哺母乳的兒童,應在完全停止喂哺母乳後的6周和3個月(若6周時檢測結果為陽性可盡快)再次采血進行核酸定性檢測,進行早期診斷。兒童滿18個月後則可直接進行抗體檢測。
4.2.5 如果嬰兒第一次采血時已滿3個月,但未滿12個月,則應盡快在不同時間採集兩份血樣本;同時將兩份血樣本送檢,按照前述流程進行檢測。如果兒童第一次采血時已滿12個月,則應首先按照「艾滋病感染產婦所生兒童HIV抗體檢測流程」( 圖4)進行HIV抗體檢測。若兩種不同原理或廠家生產的HIV抗體檢測試劑檢測結果均為陰性,則排除兒童感染;若HIV抗體檢測試劑檢測結果呈陽性反應,不能通過抗體檢測確定兒童感染狀態,則可在不同時間採集兩份血樣本,按照前述流程進行「嬰兒HIV感染早期診斷」檢測。如果兒童第一次采血時已滿18個月,則應按照HIV抗體檢測流程(圖1)進行HIV抗體檢測,無需進行「嬰兒HIV感染早期診斷」檢測。

❻ 核酸檢測方法

對於新型冠狀病毒的核酸檢測,首先根據試劑盒說明書」樣本要求「部分進行樣本採集,常規的樣本類型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。

獲得患者樣本後,需盡快進行檢測,如無法立即檢測需要轉運的樣本,應按照說明書的要求進行低溫封裝,並送到專門的檢測機構進行檢測。檢測機構收到樣本後,對樣本進行核酸提取,核酸提取試劑應使用批准產品說明書中指定的核酸提取試劑盒。

病毒RNA需要首先逆轉錄為cDNA,再進行擴增檢測。PCR擴增和檢測應使用批准產品說明書中指定的熒光定量PCR儀,通過熒光定量PCR所得到的樣本Ct值的大小,可以判斷患者樣本中是否含有新型冠狀病毒。

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核酸檢測原理

所有生物除朊病毒外都含有核酸,核酸包括脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),新型冠狀病毒是一種僅含有RNA的病毒,病毒中特異性RNA序列是區分該病毒與其它病原體的標志物。新型冠狀病毒出現後,我國科學家在極短的時間里完成了對新型冠狀病毒全基因組序列的解析。

並通過與其它物種的基因組序列對比,發現了新型冠狀病毒中的特異核酸序列。臨床實驗檢測過程中,如果能在患者樣本中檢測到新型冠狀病毒的特異核酸序列,應提示該患者可能被新型冠狀病毒感染

❼ 現在核酸檢測都有什麼方法

通過呼吸道或口腔內的痰液做檢測

❽ 核酸檢測怎麼做

核酸檢測目前都是取咽拭子的方法(病毒感染口腔粘膜上皮後會寄宿於口腔粘膜上皮,通過采咽拭子達到取樣目的),1 小時內送到專門檢測室內進行。這個性質決定不可能每個患者想做就能立馬做,比如大半夜來的患者就做不了,只能等待第二天儀器開機。

取咽拭子是一個高危的操作。據目前臨床研究來看,新型冠狀病毒感染肺炎的傳播途徑有三種,直接傳播、氣溶膠傳播、接觸傳播。其中飛沫混合在空氣中,形成氣溶膠,吸入後導致感染。所以對於取樣的人員而言,有被感染的風險。

除了從武漢抵深者,其他市民如果有需要,也可以前往這些醫院檢測,核酸檢測單項服務的價格約為160元(不含診查費或診金)。

以香港大學深圳醫院為例,該院已開通核酸篩查門診,每天8∶00-20∶00開放,市民可直接在「香港大學深圳醫院」微信公眾號預約「核酸篩查門診」。

港大深圳醫院的專科門診診金為100元/人次,核酸篩查費用為160元/人次,共260元,可使用深圳市一檔醫保支付,一般24小時可出結果。

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