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常用細菌染色方法實驗報告

發布時間:2022-08-26 17:40:32

① 醫學微生物學格蘭染色實驗報告怎麼

革蘭染色法
【步驟】:製片、染色、鏡檢
1、製片
塗片 :取潔凈載玻片一張,用接種環取生理鹽水2環,置於玻片上,接種環滅菌後,取細菌培養物少許與鹽水混勻,並塗成均勻薄膜塗片。如用液體材料,如痰、尿液、膿汁等可直接塗片,不必加生理鹽水。
乾燥 :塗片最好在室溫下自然乾燥,必要時可將標本面向上,小心間斷地在弱火高處烘乾,但切勿緊靠火焰將塗膜烤枯。
固定:塗片乾燥後,將標本片在酒精燈上快速的來回通過三次,共約2s~3s,注意溫度不可太高,以塗片塗膜的反面觸及皮膚覺輕微燙覺即可。
固定目的:①殺死細菌;②使菌體與玻片粘附較牢,在染色時不致被染液和水沖掉;③菌體蛋白變性易著色。
2、染色
結晶紫初染 1 min → 盧戈氏碘液媒染 1 min → 95%酒精脫色 30sec~1 min → 稀釋石炭酸復紅復染 1 min,油鏡觀察
【原理】:
①革蘭陽性細菌細胞壁結構較緻密,肽聚糖層厚,脂質含量少,乙醇不易滲入;革蘭陰性菌細胞壁結構較疏鬆,肽聚糖層少,脂質含量多,乙醇易滲入。
②革蘭陽性菌的等電點低,革蘭陰性菌的等電點較高,在相同pH條件下,革蘭陽性菌所帶負電荷比革蘭陰性菌多,與帶正電荷的結晶紫染料結合較牢固不易脫色。
③革蘭陽性菌細胞內含有大量核糖核酸鎂鹽,可與結晶紫和碘牢固的結合成大分子復合物,不易被乙醇脫色;而革蘭陰性菌細胞內含極少量的核糖核酸鎂鹽,吸附染料量少,形成的復合物分子也較小,故易被乙醇脫色。
【結果觀察】:紫色為陽性,紅色為陰性
【影響因素】
①操作因素:塗片太薄或太厚,固定時菌體過分受熱,以及脫色時間長短,都會影響染色結果
②染液因素:所有染液應防止染液蒸發而改變濃度,特別是盧戈碘液久存或受光作用後易失去媒染作用;塗片積水過多會改變染液濃度,影響染色效果
【意義】:
①鑒定細菌:可將細菌分為革蘭陽性菌(紫色)和革蘭陰性菌(紅色),
②觀察致病性:大多數G+菌以外毒素為主要致病物質,而G- 菌以內毒素為主要致病物質。兩者的致病機制和臨床表現各不相同,
③參考選擇抗菌葯物:大多數G+菌對青黴素、頭孢菌素等敏感;大多數G- 菌對氨基苷類抗生素如鏈黴素、慶大黴素等敏感。
【用途】:一般細菌學檢查或鑒定

我這個比較簡單概括,你最好詳細化,比如染色步驟

② 給細菌染色的方法都有幾種,怎麼操作,都用復紅染色嗎麻煩一一講來,詳細點,本人初學者.

細菌染色分為活菌染色跟死菌染色兩種。其中死菌染色分為正染色跟負染色。正染色又包括普通染色與特殊染色兩種。普通染色有簡單染色法、革蘭氏染色法和抗酸染色法;特殊染色分為芽孢染色法、莢膜染色法和細胞壁染色法。一般都只用革蘭氏染色法跟抗酸染色法。

革蘭氏染色法(Gram's stain)是最常用的細菌染色法。細菌經結晶紫初染染成藍色。革蘭氏染色陽性菌(G+)細胞壁肽聚糖層數多,且肽聚糖為空間網狀結構,再經乙醇脫水,網狀結構更為緻密,染料復合物不易從細胞內漏出,仍為藍色。而革蘭氏染色陰性菌(G-)細胞壁脂類含量多,肽聚糖層數少,且肽聚糖為平面片層結構,易被乙醇溶解,使細胞壁通透性增高,結合的染料復合物容易泄漏,細菌被脫色為無色,再經石炭酸復紅稀釋液復染成紅色。
①將結晶紫染液加於塗膜上,染色(初染)1min。②水洗後加蘆戈氏碘液處理(媒染)1min。③水洗後用95%酒精脫色,脫色時頻頻搖動玻片,直至流下的液體無色為止(約需0.5min)。④水洗後加石炭酸復紅稀釋液染色(復染)0.5min。⑤水洗,用濾紙輕輕吸干,待標本充分乾燥後進行鏡檢。染色過程中,水洗要用自來水的細流徐徐沖洗,沖洗塗膜的背面,勿使強水流直接沖到塗膜上。

抗酸染色法(acid-fast stain)對分枝桿菌屬等一般染色法不易著色的抗酸性細菌染色。要注意:1)塗片要略厚;2)加溫染色或延長染色時間,加溫時隨時補加染色液;3)分枝桿菌呈紅色(+),其他細菌和背景為藍色。
①石碳酸復紅加溫染色8~10分鍾。②3%的鹽酸酒精脫色約1~2分鍾,脫色是輕搖玻片,直到塗片顏色脫去為止。③水洗後,用鹼性美藍復染1分鍾。④再次水洗,印干。

芽孢染色法是專門給細菌芽孢染色的。要注意:1)芽孢染色用的菌種應控制菌齡,使大部分芽孢仍保留在菌體上為宜;2)染色加熱過程要及時補充染液,切勿讓塗片乾涸。
①孔雀綠加熱染色5分鍾。②水洗。③番紅染色2~3分鍾。④水洗,乾燥。

莢膜染色法是專門給與染料親和性弱的細菌莢膜染色。由於莢膜很薄,且含水量高(90%以上),易變形,所以製片和染色時一般不用熱固定。這個包括黑素負染色法、Leifson染色法跟Tyler染色法。
黑素負染色法:
1.制菌液:在潔凈載破片一端加一滴蒸餾水,按無菌操作要求,用接種環取少量斜面試管培養物於蒸餾水中,輕輕混勻。
2.塗片(推片法):取另一塊邊緣光滑的載玻片,使之一端與菌液接觸,然後迅速均勻地將菌液推向玻片的另一端,使菌液塗成一薄層。置空氣中自然乾燥。注意:勿熱固定。
3.復紅染色:滴加石炭酸復紅染色液覆蓋塗布面,染色4~5分鍾後,除去多餘染液(勿用水洗)。乾燥時間不要太長,防莢膜脫水。
4.黑素染色:在玻片一端加一滴1%黑素液,再取一塊邊緣光滑的裁玻片,當邊緣與黑素液接觸後,迅速均勻地推向玻片另一端,使成一薄層。置空氣中自然乾燥。
5. 鏡檢(油鏡):菌體呈紅色,背景呈黑色,莢膜無色。
注意事項:滴黑色素要量少;取菌要適量。
Leifson染色法
1.制備塗片同前,自然乾燥。
2.滴加Leifson』s染色液覆蓋塗布面,染色10分鍾,傾去多餘染料(勿用水洗)。
3.滴加硼酸鈉美藍染色液,染色5分鍾,輕輕用水沖洗,置空氣中自然乾燥。
4.油鏡下鏡檢,菌體呈藍色,莢膜呈紅色。
Tyler染色法
1.制備塗片同前,自然乾燥。
2.滴加結晶紫冰醋酸染色液覆蓋塗布面,染色5~7分鍾。傾去多餘染料(勿用水洗)。
3.用20%CuS04水溶液輕輕沖去染料,用吸水紙印干後,置空氣中自然乾燥。
4.油鏡下檢查,菌體呈紫色,莢膜呈淺紫色或淺藍色。

細胞壁染色法是觀察細菌細胞壁時採用的染色法。細菌細胞壁很薄,它與染料結合的能力差,不易著色,在細菌的染色過程中,一般情況染料都是通過細胞壁的滲透、擴散等作用而進入細胞,細胞壁本身並未染色,因此,欲通過染色來觀察細胞壁,必須設法使細胞壁能著色,而細胞質則不易著色,常用的方法有單寧酸法和磷鉬酸法。單寧酸和磷鉬酸都是起媒染作用,它們使細胞壁形成可著色的復合物,而使細胞質不易被著色,經結晶紫或甲基綠染色後,便可在普通光學顯微鏡下觀察到細胞壁。
根據細菌細胞在高滲溶液中或用乙醚蒸氣處理後,會產生質壁分離這一現象,經染色後也可在普通光學顯微鏡下區分細胞壁和細胞質膜。
1.單寧酸法
(1)將培養16—18小時的巨大芽孢桿菌按常法製成塗片。
(2)用5%單寧酸染5分鍾後,水洗。
(3)用0.2%結晶紫染3—5分鍾,水洗,吹乾。用油鏡觀察,細胞壁呈紫色,細胞質呈淡紫色。
2.磷鉬酸法
(1)制備濃厚的塗片,在未乾時浸入1%磷鉬酸水溶液3—5分鍾。
(2)用1%甲基綠水溶液染3—5分鍾。
(3)水洗後,吹乾,用油鏡觀察。細胞壁為綠色,細胞質無色。
3.區分細胞壁與細胞質膜
(1)乙醚蒸氣法
(a)將巨大芽孢桿菌塗布於蓋玻片上,翻轉蓋玻片使其放在乙醚蒸氣瓶的瓶口上蒸3分鍾。
(b)取下蓋玻片置Bouin氏固定液中30分鍾後取出,水洗。
(c)用硫堇染色30秒鍾。
(d)水洗,水封,置油鏡下觀察。
(2)NaCl法
(a)取一滴25%NaCl溶液於潔凈的載玻片上。
(b)挑一小環培養6小時的枯草芽孢桿菌,在25%NaCl水滴中塗布均勻,待自然乾燥。
(c)滴加0.01%結晶紫於其上,使蓋滿有菌部分,30秒鍾後水洗,乾燥,用油鏡觀察結果。

③ 細菌的革蘭氏染色的實驗總結怎麼寫

芽孢染色法:芽孢呈綠色(孔雀綠)或紅色(鹼性品紅),菌體呈紅色(番紅)或黑色(黑色素溶液)——————據不同染色劑而呈不同顏色,據情況而定
革蘭氏染色:g+細菌為紫色,g-細菌為紅色

④ 實驗室常用的染色方法有哪幾種

印染行業的化驗室一般的都是浸染法,就是拿染液通過染色工藝把布浸染到上色,還有扎染,卷染,

⑤ 細菌學中最常用的染色方法

細菌形態學檢查方法:常用染色方法 1.美藍染色法 在已乾燥、固定好的抹片上,滴加適量的美藍染色液,經1一2分鍾,水洗,干後鏡檢,結果是細菌呈藍色。 2.稀釋石炭酸復紅染色法 染色方法同美藍染色法,結果是細菌呈紅色。 3.革蘭(Gram)氏染色法 (1)在已乾燥、固定好的抹片上,滴加草酸按結晶紫染色液,染色2一3分鍾,水洗。 (2)加革蘭氏碘液於抹片上媒染1一2分鍾,水洗。 (3)加95%酒精於抹片上脫色,約30秒至1分鍾,水洗。 (4)加稀釋石炭酸復紅(或沙黃水溶液)復染50一60秒鍾,水洗。干後鏡檢。結果是細菌染成藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌,染成紅色的稱為革蘭氏陰性細菌。

⑥ 給細菌染色的方法都有幾種,怎麼操作,都用復紅染色

給細菌染色的方法都有幾種,怎麼操作,都用復紅染色
簡單染色法:利用單一染料對細菌進行染色的一種方法.例如番紅.
1.塗片:用灼燒滅菌冷卻後的接種環挑取少量菌體與水滴充分混勻,塗成極薄的菌膜.
2.乾燥:可自然晾乾,或將塗片置於火焰高處微熱烘乾,但不能直接在火焰上烘烤.
3.固定:手執玻片一端,有菌膜的一面朝上,通過迅速通過火焰2-3次(用手指觸塗片反面,以不燙手為宜).
4.染色:加適量(以蓋滿菌膜為度)結晶紫染色液(或石炭酸復紅液),染l~2min.
5.水洗:用自來沖洗至流下的水中無染色液的顏色時為止.
6.乾燥
7.鏡檢
復染色:利用用兩種以上染料對細菌進行染色.例如革蘭氏染色法.
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟,需要鹼性染料(basic dye)初染液;媒染劑(mordant);脫色劑(decolorising agent)和復染液(counterstain).
鹼性染料初染液的象在細菌的單染色法基本原理中所述的那樣,而用於革蘭氏染色的初染液一般是結晶紫(crystal violet).媒染劑的作用是增加染料和細胞之間的親和性或附著力,即以某種方式幫助染料固定在細胞上,使不易脫落,碘(iodine )是常用的媒染劑.脫色劑是將被染色的細胞進行脫色,不同類型的細胞脫色反應不同,有的能被脫色,有的則不能,脫色劑常用95%的酒精(ethanol).復染液也是一種鹼性染料,其顏色不同於初染液,復染的目的是使被脫色的細胞染上不同於初染液的顏色,而未被脫色的細胞仍然保持初染的顏色,而且將細胞區分成G+和G-兩大類群,常用的復染液為番紅.
1.載玻片固定.在無菌操作條件下,用接種環挑取少量細菌於干凈的載玻片上塗布均勻,在火焰上加熱以殺死菌種並使其粘附固定.
2.草酸銨結晶紫染1分鍾.
3.自來水沖洗,去掉浮色.
4.用碘-碘化鉀溶液媒染1分鍾,傾去多餘溶液.
5.用中性脫色劑如乙醇(95%)或丙酮酸脫色30秒,革蘭氏陽性菌不被褪色而呈紫色,革蘭氏陰性菌被褪色而呈無色.
6.用番紅染液或者沙黃復染30秒,革蘭氏陽性菌仍呈紫色,革蘭氏陰性菌則呈現紅色.

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