⑴ 如何測量氨基酸的排列順序
測定肽或蛋白質中各氨基酸的排列順序
在分析氨基酸後下一步就是要測定肽鏈或蛋白質中氨基酸的結合順序，通常可由下列幾種方法配合使用分析推測出來：
（1）N-端氨基酸單元的分析：最常用的有下列兩種方法：
（a）桑格爾方法：
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這項方法首先是桑格爾（Sauger，F．）提出的，他利用氨基很容易和2，4-二硝基氟氯苯（DNP）發生芳香親核取代反應，如用一個肽和2,4-二硝基氟苯反應，顯然鍵的N-端游離氨基和它反應，然後把這個N-端帶有2,4-二硝基苯基的肽鏈徹底水解，在水解物中，只有一個氨基酸的α-氨基的氫被DNP取代，各種氨基酸的DNP標記化合物都是黃色的，並且都各有一個Rf值，因此很容易鑒別；所以通過這個方法，很容易辨認出肽中的N-端是哪一個氨基酸。
（b）艾德滿方法：
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另一種標記N-端的氨基方法叫作文德滿（Edman.P.）方法，用異硫氰酸苯酯和N-端的氨基反應，生成苯胺基硫代甲酸衍生物。該化合物在無水氯化氫作用下，發生一種關環作用，形成一個苯基乙內醯硫脲的衍生物，從肽鏈上斷裂下來，而肽鏈中的醯氨鍵不受影響。
一個肽鏈經上列的反應後，其結果是失去一個N-端的氨基酸，這個氨基酸可以作為取代苯基乙內酸硫脲進行鑒定。失去一個氨基酸的肽鍵還可以收回，再重復上面的反應，進行第二個N-端的標記。這種方法已經可以自動化。假若肽鍵不是太長的話，一般講這個方法是可靠的。
（2）c-端氨基酸單元的分析：
c-端的氨基酸單元可以通過羧肽酶催化水解，羧肽酶可以選擇性切斷游離羧基相鄰的肽鍵，在溶液中切斷下來的氨基酸是C-端位置的，已切斷了c-端氨基酸的肽鍵。再與羧肽酶作用，如此不斷進行，可以使整個多肽或蛋白質水解為氨基酸。根據氨基酸出現的時間，可以推斷C-端氨基酸的排列順序。實際上此法最多隻能鑒定3～4個氨基酸，因此對於長鏈用處不大，可用於小肽（二肽、三肽等）C-端氨基酸順序鑒定。
（3）用酶催化使肽鍵部分水解:
測定肽鍵氨基順序的一個關鍵是部分分解，將一個長的肽鍵分解為許多小肽，然後將這些小肽分離，再進行氨基酸分析，N-端基標記，這樣多次地重復下去，最終得到整個肽鏈氨基酸的順序。許多消化道內分泌出來的酶可以使肽鍵水解。有些酶的專一性並不很強，但是有些酶的水解是具有高度專一性的，不同的酶只能分解不同氨基酸的肽鍵。
⑵ 檢驗氨基酸用什麼方法
你若是問蛋白質，我可以直接告訴你又雙縮脲試劑（中學階段），但氨基酸的檢驗比蛋白質麻煩多了。 一、氨基酸的分離和檢測氨基酸的分離和檢測手段，以往用化學分析法、層析法、比色法、氣相色譜法、氨基酸自動分析儀。隨著高效液相色譜及填料的發展，HPLC在氨基酸檢測方面顯示了其特有的優越性。但大多數氨基酸無紫外吸收和熒光發射特性，為提高分析檢測靈敏度和分離選擇特性，通常將氨基酸衍生，衍生方式有柱前衍生法與柱後衍生法。HPLC與各種衍生相結合的氨基酸分析技術，構成了具有廣泛適用性的現代氨基酸分析技術。
二、鑒定是哪種氨基酸，不同的氨基酸要用不同的方法。1、茚三酮反應 （ninhydrin reaction） 茚三酮（弱酸環境加熱） 紫色（脯氨酸、羥脯氨酸為黃色） （檢驗α－氨基）
2、坂口反應 （Sakaguchi reaction） 丙氨酸
α-萘酚+鹼性次溴酸鈉 紅色 （檢驗胍基 精氨酸有此反應）
3、米隆反應（又稱米倫氏反應） HgNO3+HNO3+熱 紅色 （檢驗酚基 酪氨酸有此反應，未加熱則為白色）
4、Folin-Ciocalteau反應（酚試劑反應） 磷鎢酸-磷鉗酸 藍色 （檢驗酚基 酪氨酸有此反應）
5、黃蛋白反應 濃硝酸煮沸 黃色 （檢驗苯環 酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸有此反應）
6、Hopkin-Cole反應（乙醛酸反應） 加入乙醛酸混合後徐徐加入濃硫酸 乙醛與濃硫酸接觸面處產生紫紅色環 （檢驗吲哚基 色氨酸有此反應）
7、Ehrlich反應 P-二甲氨基苯甲醛+濃鹽酸 藍色 （檢驗吲哚基 色氨酸有此反應）
8、硝普鹽試驗 Na2(NO)Fe(CN)2*2H2O+稀氨水 紅色 （檢驗巰基 半胱氨酸有此反應）
9、Sulliwan反應 1，2萘醌、4磺酸鈉+Na2SO3 紅色 （檢驗巰基 半胱氨酸有此反應）
10、Folin反應 1，2萘醌、4磺酸鈉在鹼性溶液 深紅色 （檢驗α－氨基酸）
三、關於氨基酸態氮的測定：（定量分析）1.雙指示劑甲醛滴定法2.電位滴定法 另請參閱： http://www.docin.com/p-69133358.html
⑶ 請教：氨基酸序列的測定方法
有兩種方法，一是直接測序列法，常用Edman降解法，在弱鹼性條件下多肽連N端氨基酸（阿爾發）與PITC反應，標記為苯氨基硫代甲醯蛋白質。肽鏈中的第一個肽鍵變弱，在無水酸的存在下發發生降解，第一個氨基酸（AA1）經過分子重排成為PTH-AA1結合層析技術即可確定氨基酸的性質。C端氨基酸殘基分析，可用；羧基肽酶，肼解法；二是串聯質譜測定多肽鏈氨基酸測序。
氨基酸（amino
acid）：含有氨基和羧基的一類有機化合物的通稱。生物功能大分子蛋白質的基本組成單位，是構成動物營養所需蛋白質的基本物質。是含有鹼性氨基和酸性羧基的有機化合物。氨基連在α-碳上的為α-氨基酸。組成蛋白質的氨基酸均為α-氨基酸。
⑷ 測定氨基酸序列的氨肽酶法 羧肽酶法的原理是什麼
氨基酸測序分為N端測序和C端測序，原理是用氨肽酶（N端測序法）或羧肽酶（C端測序法）將肽鏈從一端依次切下，並在一段時間內檢測切下的氨基酸的種類（時間過長則會出現多種氨基酸），並且重復該過程。
1. 分光光度法氨基酸檢測：主要是利用氨基酸與衍生劑發生化學反應，產生藍紫色化合物，該化合物在某一波長處有最大吸收峰，根據吸收值大小得到氨基酸含量。常用的衍生劑為茚三酮。
2. 毛細管電泳法氨基酸檢測：根據分離原理的不同，可分為毛細管區帶電泳、毛細管凝膠電泳、毛細管等電電泳、毛細管等速電泳以及膠束電動力學毛細管電泳。其中，毛細管區帶電泳和膠束電動力學毛細管電泳可用於氨基酸檢測。
3. 近紅外光譜法氨基酸檢測：利用有機化合物的含氫基團在特定波長區域躍遷，產生光譜的變化，結合統計學方法間接地實現氨基酸的定量檢測。
4. 氣相色譜法氨基酸檢測：將氨基酸衍生化處理變為容易氣化的物質，根據氣態樣品中各組分在流動相和固定相中的分配系數的不同，實現對氨基酸的定量分析。
5. 高效液相色譜法氨基酸檢測：是最常用的一種氨基酸檢測方法。由於大多數氨基酸本身沒有紫外吸收和熒光反應，因此需要對樣品進行衍生化處理將其轉化為有紫外吸收和發射熒光的物質，衍生可分為柱前衍生和柱後衍生。
⑹ 親們 急需氨基酸序列的測序方法及原理 謝謝！
有兩種：
測末端氨基酸殘基，只能測十多個。
打斷通過質譜測MASS，然後通過與已知氨基酸比對得到序列。
⑺ 一個未知蛋白質,在不測全部氨基酸序列情況下,如何測出它的氨基酸序列
(1):蛋白質樣品預處理 用於序列測定的樣品必須純化並測定相對分子質量，再加入含巰基乙醇的高濃度尿素溶液，使蛋白質分子中的二硫鍵和非共價鍵斷開
(2):測定氨基酸的組成 通常將蛋白質樣品用6摩爾每升鹽酸在110攝氏度水解24小時，再用氨基酸自動分析儀測定。
(3):肽鏈末端氨基酸的測定
(4):專一性部分裂解 將長的肽鏈專一性裂解成若干小的肽片段，每種樣品至少用兩種方法裂解
(5):肽片段的分離純化 用電泳或高效液相層析將部分裂解的樣品分離純化，得到兩套或幾套肽片段
(6):各個肽段的氨基酸序列測定 目前主要用Edman 降解法或序列儀進行測定
(7):確定整個肽鏈的氨基酸序列
⑻ 測定氨基酸序列的氨肽酶法 羧肽酶法的原理是什麼
氨肽酶法：氨肽酶是一類肽鏈外切酶或叫外肽酶,能從多肽鏈的N端逐個地向里切.根據不同的反應時間測出酶水解釋放的氨基酸種類和數量,按反應時間和殘基釋放量作動力學曲線,就能知道該蛋白質的N端殘基序列.
羧肽酶法：是一類肽鏈外切酶,專一的從肽鏈的C―末端開始逐個降解,釋放出遊離的氨基酸.被釋放的氨基酸數目與種類隨反應時間的而變化.根據釋放的氨基酸量（摩爾數）與反應時間的關系,便可以知道該肽鏈的C―末端氨基酸序列.
⑼ 氨基酸檢測
你若是問蛋白質,我可以直接告訴你又雙縮脲試劑（中學階段）,但氨基酸的檢驗比蛋白質麻煩多了.一、氨基酸的分離和檢測氨基酸的分離和檢測手段,以往用化學分析法、層析法、比色法、氣相色譜法、氨基酸自動分析儀.隨著高效液相色譜及填料的發展,HPLC在氨基酸檢測方面顯示了其特有的優越性.但大多數氨基酸無紫外吸收和熒光發射特性,為提高分析檢測靈敏度和分離選擇特性,通常將氨基酸衍生,衍生方式有柱前衍生法與柱後衍生法.HPLC與各種衍生相結合的氨基酸分析技術,構成了具有廣泛適用性的現代氨基酸分析技術.\x0d二、鑒定是哪種氨基酸,不同的氨基酸要用不同的方法.1、茚三酮反應 （ninhydrin reaction） 茚三酮（弱酸環境加熱） 紫色（脯氨酸、羥脯氨酸為黃色） （檢驗α－氨基）\x0d2、坂口反應 （Sakaguchi reaction） 丙氨酸\x0dα-萘酚+鹼性次溴酸鈉 紅色 （檢驗胍基 精氨酸有此反應）\x0d3、米隆反應（又稱米倫氏反應） HgNO3+HNO3+熱 紅色 （檢驗酚基 酪氨酸有此反應,未加熱則為白色）\x0d4、Folin-Ciocalteau反應（酚試劑反應） 磷鎢酸-磷鉗酸 藍色 （檢驗酚基 酪氨酸有此反應）\x0d5、黃蛋白反應 濃硝酸煮沸 黃色 （檢驗苯環 酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸有此反應）\x0d6、Hopkin-Cole反應（乙醛酸反應） 加入乙醛酸混合後徐徐加入濃硫酸 乙醛與濃硫酸接觸面處產生紫紅色環 （檢驗吲哚基 色氨酸有此反應）\x0d7、Ehrlich反應 P-二甲氨基苯甲醛+濃鹽酸 藍色 （檢驗吲哚基 色氨酸有此反應）\x0d8、硝普鹽試驗 Na2(NO)Fe(CN)2*2H2O+稀氨水 紅色 （檢驗巰基 半胱氨酸有此反應）
⑽ 請教：氨基酸序列的測定方法
有兩種方法，一是直接測序列法，常用Edman降解法，在弱鹼性條件下多肽連N端氨基酸（阿爾發）與PITC反應，標記為苯氨基硫代甲醯蛋白質。肽鏈中的第一個肽鍵變弱，在無水酸的存在下發發生降解，第一個氨基酸（AA1）經過分子重排成為PTH-AA1結合層析技術即可確定氨基酸的性質。C端氨基酸殘基分析，可用；羧基肽酶，肼解法；二是串聯質譜測定多肽鏈氨基酸測序。
氨基酸（amino acid）：含有氨基和羧基的一類有機化合物的通稱。生物功能大分子蛋白質的基本組成單位，是構成動物營養所需蛋白質的基本物質。是含有鹼性氨基和酸性羧基的有機化合物。氨基連在α-碳上的為α-氨基酸。組成蛋白質的氨基酸均為α-氨基酸。