㈠ 血細胞怎麼做計數實驗
實驗
目的原理 了解血細胞計數的原理並掌握紅細胞、白細胞、血小板計數的方法，紅細胞計數結果結合血紅蛋白值還可以計算出紅細胞平均血紅蛋白量(MCH)可作為生理機能檢查和臨床診斷的指標。用相應的稀釋液將血液稀釋若干倍(另有抗凝、固定、著色作用)，置於計數室中，在顯微鏡下計數一定容積內的血細胞數。 稀釋血液有血細胞吸管法和試管法，本實驗採用後者。
實驗對象與用品 雞或家兔。血細胞計數板、專用蓋玻片、吸血管、顯微鏡、手撳計數機、血細胞稀釋液、拭鏡紙、毛筆。
方法步驟
(一)熟悉計數室
血細胞計數板系一長方形厚玻片，常用的改良牛氏(Improved-Neubauer) 計數板在中央橫溝的兩邊各有一計數室，兩計數室結構完全相同。計數室較兩邊的蓋玻片支柱低0.1毫米。因此，放上蓋玻片時，計數板與其間距即計數室空間的高為0.1毫米(圖8-1)。在低倍顯微鏡下可見計數室被雙線劃分成９個邊長為１毫米的大方格。四角的大方格又各分為１６個中方格，這是用來計數白細胞的。中央大方格被劃分為２５個中方格，每一中方格又劃分成１６個小方格(圖8－2稱２５×１６，也有的計數板為１６×２５的，小方格面積一致)。中央大方格的四角及中心５個中方格(１６×２５者則為四角上的中方格)為紅細胞或血小板計數范圍。
(二)紅細胞計數
先用試管稀釋法制備禽類血細胞懸液：將禽類紅細胞稀釋液Ⅰ、Ⅱ分別置水浴鍋中預熱到４１～４２℃，取Ⅰ液１mL於試管中，用吸血管加入新鮮雞血(或肝素抗凝血)２０霯，再加入Ⅱ液１mL混勻，置該水浴鍋中保溫５０s左右，置室溫，即為待檢的血細胞懸液。可用於充液計數。取干潔的計數板，置於水平的顯微鏡載物台上，蓋上蓋玻片，使兩側各空出少許。搖勻血細胞懸液，用滴管吸取，將滴管尖輕輕置於蓋玻片邊緣外，讓滴出的血細胞懸液憑毛細管作用吸入計數室內，剛好充滿計數室為宜(圖8－3)。靜置２min後計數，先用低倍鏡觀察，不均勻則拋棄。計數時用虹彩、集光器、反光鏡等調節入射光角度和強度，認清 計數室位置。採用「由上至下，由左至右，順序如弓」的順序，對壓邊線細胞採取「數上不數下，數左不數右」的原則(圖8～4)。依次計數並記錄５個中方格中分別有多少個紅細胞。
(三)血小板計數
採取血液並立即與抗凝劑混合(由於血小板具有趨向於凝集和粘附於異物表面的特性)。以血小板稀釋液(１０％EDTANa2 １０mL與０.８％NaCl９０mL組成)將血液稀釋２００倍，混勻後滴入血細胞計數室內，靜置１５min，待血小板下沉後。於高倍鏡下計數(同紅細胞 計數)。在高倍鏡下血小板呈橢圓形、圓形或不規則的折光小體分布於紅細胞間，注意與雜質相區別。也可用復方尿素稀釋液稀釋血液，應靜置２０min以上，待紅細胞充分溶解後再充液計數。
(四)計算
按計數室構造及血液稀釋倍數,將血細胞計數結果換算成每立方毫米中血細胞的個數。以每１００mL血液中的血紅蛋白量（g）乘以１０再除以紅細胞數（106/mm3）得紅細胞平均血紅蛋白量（MCN，單位μμg）。
(五)儀器洗滌
計數板、蓋玻片和測定管用清水沖洗，再用綢布或細布沾干。
要求與思考題
１.計算結果，報告中簡要說明計算過程。求出本組同學測定的均值並評價之。
２.了解各類稀釋液成分，分析各物質的作用。
注意事項
１.充液前應充分混勻血細胞懸液，充液要連續、適量，充液後應待血細胞下沉後再計
數。
２.計數板、蓋玻片、吸血管及測定管等用過後必須立即按要求洗滌干凈。
組織建議 將相同類型的計數板集中在一個組內，便於指導。本實驗屬於基本操作，各位朋友均應獨立操作得出結果。
附註：
1.本法可同時計數禽類白細胞數，計算方法也類似。
2.禽類血細胞稀釋液為：
Ⅰ液
中性紅 25.0mg
NaCl 0.9g
加蒸餾水至100.0mL
Ⅱ液
結晶紫 12.0mg
檸檬酸鈉 3.8g
福爾馬林 0.8mL
加蒸餾水至100.0mL
3.哺乳類紅細胞稀釋液可用生理鹽水或阿揚(Hayem)氏液(NaCl 1g，Na2SO4·10H2O 5g，HgCl2 0.5，加蒸餾水至200mL過濾)。白細胞稀釋液成分為冰醋酸0.1mL，1%龍膽紫1mL加蒸餾水至100mL，或直接用2%醋酸溶液。
4.血小板復方尿素稀釋液配方為：尿素10g，檸檬酸鈉0.5g，甲醛0.1mL，加蒸餾水到100mL，混合，待完全溶解後過濾。置冰箱內可保存1～2周。
㈡ 血細胞計數板計數法
血細胞計數板計數法，是過去經常應用的一種計數血細胞數量的計數方法，經常應用於白細胞、紅細胞等血細胞的計數。除了計數血細胞以外，還可用於酵母菌、細菌等病原微生物的技術，血細胞計數板是通過顯微鏡下，把計數板分成了很多網格狀的結構，然後進行適當的稀釋血液進行計數，最終計算出各種血細胞的數量。這是過去常用的一種方法，但是近年來，基本上都是用全自動血細胞分析儀來計數各種血細胞的數量，達到了快速准確的目的。現在很少再用血細胞計數板計數方法，因為通過血細胞全自動分析儀，就能夠准確的計數出各種血細胞的數量，包括紅細胞、白細胞、血小板等，從而為臨床提供有用的信息。