1. 乳酸桿菌的測定方法
乳酸菌是乳酸桿菌的簡稱.
2. 如何檢驗酸奶中的乳酸菌要具體的實驗步驟和方法及原理
太麻煩的，要有條件，把樣品稀釋後，例如估計含乳酸菌的量，稀釋到每毫升大約30-300個左右，再用特殊的平板培養基，添加了1%碳酸鈣的平板培養基，採用傾注法與呈液體狀態的40度含碳酸鈣的瓊脂營養培養基混合，倒制於90毫米在小平皿中，培養後，長出菌落，同時，菌落周圍有透明圈的，就是乳酸菌，還可以計數，再剩稀釋倍數，還可得含量。
3. 乳飲料中乳酸菌的檢驗步驟,用的是稀釋混合倒平板法, 用梯度法
1、准備無菌水、無菌空白平板、無菌移液管
2、培養乳酸菌培養,滅菌,冷卻至50度左右
3、無菌室滅菌30分鍾後,在無菌室內,把飲料用無菌水稀釋成適當的倍數（如10的負5、6、7次方）
4、分別吸取0.1ml或1ml三個不同稀釋度的菌懸液,放於空白平板中,平板中倒入50度左右的培養基15-20ml,平板平放於實驗桌上,輕輕搖動,使菌懸液與培養基充分混合
5、平板中培養基凝固後,做好標記
6、倒置於培養箱中,30度培養24-72小時左右
7、觀察菌落生長狀態,並進行計算
4. 乳酸菌的鑒定方法
1.形態和培養特徵觀察
採用牛肉膏蛋白腖培養基,將已純化後的甘油菌種活化後於37℃下培養20～24h ,並進行革蘭氏染色及菌體形態和菌落特徵的觀察。染色方法參照微生物鑒定實驗指導
2.生長條件試驗
(1)耐鹽性試驗(NaCl 濃度:0. 85 、1. 20 和1. 71) (mol/ L) ;
(2)耐酸鹼試驗(p H :4. 3 、5. 7 、6. 8 、8. 4 、8. 6 和8. 7) ;
(3)溫度梯度試驗(溫度: 10℃、30℃、40℃、50℃、55℃、60℃和65℃) 。
分別將參試菌接種於以上處理的液體培養基中培養48 h ,記錄生長狀況。
3.生理生化試驗
⑴過氧化氫酶測定
將實驗菌接種於PGY培養基斜面上,37℃培養20h—24h,取一環接種的培養物,塗於干凈的載玻片上,然後在其上滴加3%－—15%的過氧化氫,有氣泡則為陽性反應,無氣泡為陰性反應。
⑵葡萄糖產酸產氣實驗
在PY基礎培養基內加入30g葡萄糖和5%吐溫-80,1.6g/100mL的溴甲酚紫1.4mL作指示劑, 在培養基內放置一小倒管,分裝試管置37℃培養24h, 經培養後,指示劑變黃表示產酸,倒管內出現氣泡,表示產氣。
⑶澱粉水解實驗
接種新鮮的菌種於含有0.5g可溶性澱粉的PY基礎培養基中,取少許培養液於比色盤內,同時取未接種的培養液作對照,分別在其中加入盧哥氏碘液.不顯色表示澱粉水解,顯藍黑色或藍紫色時,表示澱粉未水解或水解不完全。
⑷明膠液化實驗
將實驗菌接種於明膠基礎培養基中,置37℃培養,以一支未接種的試管作為對照。將接種的和未接種的對照管置於冰箱或冷水中,等待對照管凝固後記錄實驗結果,反復觀察對比多次。如對照管凝固時,接種管液化為陽性反應,凝固為陰性反應
⑸甲基紅（M.R）試驗
接種實驗細菌於PYG培養基，於37℃培養2天後，於培養物中加入幾滴甲基紅酒精溶液，如呈紅色，表示陽性。
⑹乙醯甲基甲醇V-P實驗
接種新鮮的實驗菌種於培養基中, 37℃培養2天後,取培養液1mL在其中
加入1ml 10％的NaOH，混勻，再加入3－4滴2%氯化鐵溶液。數小時後，培養基表面的下層出現紅色者，為陽性
⑺檸檬酸鹽
取幼齡菌種接種於檸檬酸鹽斜面培養基上，適溫培養3－7天，培養基呈鹼性（藍色）者為陽性反應，不變者則為陰性
⑻酪素水解試驗
牛奶平板的制備：取5g脫脂奶粉加入50mL蒸餾水中（或用50mL脫脂牛奶），另稱1.5g瓊脂溶於50mL蒸餾水中，將兩液分開滅菌。待冷至45－50℃時，將兩液混勻倒平板，即成牛奶平板。將平板倒置過夜，使表面水分乾燥，然後將菌種點接在平板上，每皿可點接3－5株菌。適溫培養1、3、5天，記錄菌落周圍和下面酪素是否已被分解而呈透明。配製該培養基時，切勿將牛奶和瓊脂混合滅菌，以防牛奶凝固
⑼厭氧生長測定
將菌種接入營養肉湯平板後,用密封帶包好放入CO2培養箱37℃培養2天後,觀察生長情況,生長則為陽性
(10)厭氧硝酸鹽產氣
接種封油：以斜面菌種用接種環接種後，用凡士林油（凡士林和液體石蠟為1:1）封管，封油的高度約1厘米。必須同時接種不含有硝酸鉀的肉汁腖培養液作對照。
觀察結果：培養2－7d，觀察在含有硝酸鉀的培養基中有否生長和產生氣泡。如有氣泡產生，表示反硝化作用產生氮氣，為陽性反應。但如不含硝酸鉀的對照培養基也可產生氣泡，則只能按可疑或陰性處理。
(11)石蕊牛奶的反應
牛奶中主要含有乳糖和酪蛋白，在牛奶中加入石蕊是作為酸鹼指示劑和氧化還原指示劑。石蕊在中性時呈淡紫色，酸性時呈粉紅色，鹼性呈藍色，還原時則自上而下地褪色變白。觀察其產酸、產鹼、腖化、酸凝固、凝乳酶凝固、還原情況
(12)糖發酵實驗
將需要測定的糖或醇類等碳水化合物加入PY基礎培養基中,按表分裝含5mL培養基的試管.分別取0.2mL,被鑒定菌株接到滅菌後的碳水化合物培養基中37℃培養24h,振盪培養。檢測時取培養液少許置於比色盤內,同時取未加碳水化合物的PY培養液作為對照,滴加試劑比較顏色的變化,記錄產酸的強弱.
附一些培養基：
①PY培養基（100mL）：蛋白腖1.0g,酵母提取物1.0g,無機鹽溶液4.0mL[鹽溶液成分:無水CaCl2 0.2g,MgSO4 20.0g ,K2HPO4 1.0g, ,KH2PO4 1.0g,NaHCO3 10.0g,NaCl 2.0g](將CaCl2和MgSO4一起溶解於300mL蒸餾水中,再加500mL蒸餾水,一邊攪拌一邊緩慢加入其他鹽類.繼續攪拌直到全部溶解,加蒸餾水定容至1000mL,混合後貯備於4℃)
②PYG培養基:PY在基礎培養液內加入1.0g葡萄糖
③營養明膠 蛋白腖5g、牛肉膏3g、明膠120g、蒸餾水1000mL、pH6.8～7.0；加熱溶解、校正至pH7.4～7.6，分裝小管，121℃高壓滅菌10min，取出後迅速冷卻，使其凝固。復查最終pH應為6.8～7.0
④檸檬酸鹽斜面培養基：檸檬酸鈉 3g NH4H2PO4 1g MgSO4 0.2g
K2HPO4 1g NaCl 5g 瓊脂15—20g 水1000mL 加熱溶解後，調pH至7，再加入1.6%溴麝香草酚藍指示劑10mL,培養基呈綠色，分裝試管，每管5mL，121滅菌30min
⑤含硝酸鉀的營養肉湯 加入2g硝酸鉀入營養肉湯
4.16S rDNA 序列分析
這個LZ另外查好了，很多學問。
5.生長曲線
活菌計數方法：採用塗布法,進行菌落計數，每隔一段時間（2-4小時）測
5. 乳酸菌活菌數的測定中需要用到幾個培養基和試管
最簡單的用MRS培養基培養，要用到90mm的培養皿10多個，試管則要看你的稀釋倍數而定，稀釋1億倍的話，要10倍地稀釋一次的話，需要用到至少8個試管，也可以用250毫升的三角瓶來稀釋，一次稀釋100倍，只需要稀釋4下就可以，個人認為稀釋次數少一些，誤差小一些。
可以用培養皿塗布法來培養乳酸菌和計數，也可以用添加碳酸鈣的傾注法，培養後菌落周圍出現透明圈的方法來檢測乳酸菌，後者更為准確，因為只有乳酸菌才可能長透明圈，至少排除了雜菌被計數進去的可能。
6. 如何測定食品中的乳酸菌
菌種的分離 取lmL鹵汁以10倍遞增稀釋方法（一份酸奶，九份無菌水，再取一份第一隻管中溶液，加九份無菌水，依次類推），將其稀釋至1/10～10的-10次冪（我打不上去），然後從不同濃度稀 釋液中分別取lmL傾注在平皿中，再倒入培養基相混合，待培養基凝固後倒置於30~C恆溫下 培養48h。挑取長勢良好的單個茵落劃線分純，直至純化(茵落單個大小一致，革蘭氏染色鏡 檢，茵體一致)。結果分離得到3株不同菌株，分別編號為菌株1、菌株2、菌株3。再分別轉移 到試管斜面上進行保存。 分離用培養基：牛肉膏5g，蛋白腖10g，氯化鈉5g，蒸餾水1 000 mL，瓊脂20g，pH7．0—7．2 ；保存用斜面培養基：酵母膏1％ ，碳酸鈣2％ ，葡萄糖1％ ，瓊脂2％ ，pH 7．0。 培養條件 將分離出的菌株1、菌株2、菌株3分別接種在上述4種不同的培養基上， 在30。【=恆溫條件下培養48h後觀察並測定其培養結果。 測定方法 菌落總數採用逐級稀釋法來計數；pH值用pHS一2C酸度計測定；乳酸定性 及含量測定依據食品檢驗技術 1I．2．1乳酸菌的分離與篩選的試驗程序 自然發酵酸奶---稀釋---培養---挑起單菌落染色、鏡檢一挑 選革蘭氏陽性球菌單菌落一Ⅲ號培養基一挑選溶鈣圈大的球菌反復在Ⅲ號培養基上幾次純化篩選一單菌落優 良菌株一試管穿刺低溫保存。 1．2 1．2 乳酸菌的鑒定 用光學顯微鏡、放大鏡進行乳酸菌的形態特徵鑒定。生理生化特徵鑒定：產乳 酸定性試驗——乳酸紙層析法0- 、過氧化氫酶(接觸酶)反應�6�8、明膠水解反應 、硫化氫反應 、乳酸菌 發酵營養型試驗0 、耐鹽、酸、溫度試驗。 1．2．I．3 乳酸菌的保存�6�8 採用定期移植低溫保藏法。培養基配方：葡萄糖1％ 、蛋白腖0 2％ 、 l(}l2PQ|0．2％、瓊脂20％、pH值7 0，分裝試管，121。c滅菌30min。將使用對數生長期後期的細胞進行穿刺 培養，然後密封存於冰箱玲藏室內(5qc左右)，2個月移植1次。 1．2．2 分離乳酸菌的生理特點試驗 1 2 2．1 最適生長溫度的測定OD值以同溫下不接種培養基作對照，定期取出接種培養基在721分光光度 計上，用最大吸收光波長 =6001RIifl測定。 1．2．2．2 生長周期的測定oD值(方法同上)；pH值：PHB一4pH計；可滴定酸(以乳酸計)：吸取ImL菌液 加入9Ⅱ1L蒸餾水，加入1～2滴酚酞，用0．1NNaOH滴定。 1．2 2．3 最適pH值的測試、最適鹽濃度的測試。 供試樣品及培養基 分離用樣品：酸奶、酸奶及西紅柿均為市售 分離用培養基：①BCP培養基：酵母膏2 5g，蛋白腖5g，葡萄糖5g，溴甲酚紫0 04g，瓊脂15g， 蒸槽水lO00ml，pH7 0；②MRS培養基見文獻 。 菌種保藏用培養基：脫脂乳培養基：新鮮牛乳離心去掉上層乳脂，下層奶液分裝試管，105℃ 滅菌20mln。 菌利 鑒定用培養基見文獻 6。 1 2 方法 1 2 1 乳酸菌的分離純化 取泡菜汁、酸奶、西紅柿表面洗液進行梯度稀釋，分別用傾注法、塗布 法和劃線法在BCP和MRS培養基平板上進行菌種分離。挑取在BCP平板上有透明目的菌落，在 MRS平扳上有溶鈣圈的菌落，反復純化至純種，挑菌至脫脂牛奶試管中保存 1．2 2 乳酸菌復篩對初篩菌株進行革蘭氏染色，保留革蘭氏陽性菌株．並對其所產乳酸能力進 行定性、定量分析，篩選出產酸高的菌株保存，再把產酸高的菌株經蘿l、汁發酵 】，進一步選擇產 酸高、_l】味純正的菌株保存鑒定 1 2 3 乳酸定性測定果用紙層析法。溶劑系統為乙醇：濃氨水：水=80：5：15，顯色劑為0 04％ 的溴甲酚紫酒精溶液。層析時將乳酸、檸檬酸配成1％ 的標准溶液，兩種標准溶液 及乳酸發酵液 均點樣3 ．上行層析，顯色與標准樣比較 1．2 4 乳酸的定量測定採用氣相色譜法，利用苄酯化法制備乳酸衍生物，將待測乳酸菌株在產 酸培養基內37"C培養3d，離心。取上清液剃備衍生物，氣相色譜分析含量。氣相色譜工作條件為： EGS色譜柱，柱溫160'C，氣化溫度180'17．，檢測器溫度l70"C，載氣為N，。 1．2 5 菌種鑒定根據《簡明第八版伯傑細菌鑒定手冊》 和《一般細菌常用鑒定手冊》[6 對復篩 出的菌株的形態、生理生化、碳源利用等方面進行系統鑒定，並提取乳酸菌株DNA，採用熔鏈溫度 .
7. 如何測定乳酸菌的含量
菌種的分離 取lmL鹵汁以10倍遞增稀釋方法（一份酸奶，九份無菌水，再取一份第一隻管中溶液，加九份無菌水，依次類推），將其稀釋至1/10～10的-10次冪（我打不上去），然後從不同濃度稀
釋液中分別取lmL傾注在平皿中，再倒入培養基相混合，待培養基凝固後倒置於30~C恆溫下
培養48h。挑取長勢良好的單個茵落劃線分純，直至純化(茵落單個大小一致，革蘭氏染色鏡
檢，茵體一致)。結果分離得到3株不同菌株，分別編號為菌株1、菌株2、菌株3。再分別轉移
到試管斜面上進行保存。
分離用培養基：牛肉膏5g，蛋白腖10g，氯化鈉5g，蒸餾水1 000 mL，瓊脂20g，pH7．0—7．2
；保存用斜面培養基：酵母膏1％ ，碳酸鈣2％ ，葡萄糖1％ ，瓊脂2％ ，pH 7．0。
培養條件
將分離出的菌株1、菌株2、菌株3分別接種在上述4種不同的培養基上，
在30。【=恆溫條件下培養48h後觀察並測定其培養結果。
測定方法 菌落總數採用逐級稀釋法來計數；pH值用pHS一2C酸度計測定；乳酸定性
及含量測定依據食品檢驗技術
1I．2．1乳酸菌的分離與篩選的試驗程序 自然發酵酸奶---稀釋---培養---挑起單菌落染色、鏡檢一挑
選革蘭氏陽性球菌單菌落一Ⅲ號培養基一挑選溶鈣圈大的球菌反復在Ⅲ號培養基上幾次純化篩選一單菌落優
良菌株一試管穿刺低溫保存。
1．2 1．2 乳酸菌的鑒定 用光學顯微鏡、放大鏡進行乳酸菌的形態特徵鑒定。生理生化特徵鑒定：產乳
酸定性試驗——乳酸紙層析法0- 、過氧化氫酶(接觸酶)反應�6�8、明膠水解反應 、硫化氫反應 、乳酸菌
發酵營養型試驗0 、耐鹽、酸、溫度試驗。
1．2．I．3 乳酸菌的保存�6�8 採用定期移植低溫保藏法。培養基配方：葡萄糖1％ 、蛋白腖0 2％ 、
l(}l2PQ|0．2％、瓊脂20％、pH值7 0，分裝試管，121。c滅菌30min。將使用對數生長期後期的細胞進行穿刺
培養，然後密封存於冰箱玲藏室內(5qc左右)，2個月移植1次。
1．2．2 分離乳酸菌的生理特點試驗
1 2 2．1 最適生長溫度的測定OD值以同溫下不接種培養基作對照，定期取出接種培養基在721分光光度
計上，用最大吸收光波長 =6001RIifl測定。
1．2．2．2 生長周期的測定oD值(方法同上)；pH值：PHB一4pH計；可滴定酸(以乳酸計)：吸取ImL菌液
加入9Ⅱ1L蒸餾水，加入1～2滴酚酞，用0．1NNaOH滴定。
1．2 2．3 最適pH值的測試、最適鹽濃度的測試。
供試樣品及培養基
分離用樣品：酸奶、酸奶及西紅柿均為市售
分離用培養基：①BCP培養基：酵母膏2 5g，蛋白腖5g，葡萄糖5g，溴甲酚紫0 04g，瓊脂15g，
蒸槽水lO00ml，pH7 0；②MRS培養基見文獻 。
菌種保藏用培養基：脫脂乳培養基：新鮮牛乳離心去掉上層乳脂，下層奶液分裝試管，105℃
滅菌20mln。
菌利 鑒定用培養基見文獻 6。
1 2 方法
1 2 1 乳酸菌的分離純化 取泡菜汁、酸奶、西紅柿表面洗液進行梯度稀釋，分別用傾注法、塗布
法和劃線法在BCP和MRS培養基平板上進行菌種分離。挑取在BCP平板上有透明目的菌落，在
MRS平扳上有溶鈣圈的菌落，反復純化至純種，挑菌至脫脂牛奶試管中保存
1．2 2 乳酸菌復篩對初篩菌株進行革蘭氏染色，保留革蘭氏陽性菌株．並對其所產乳酸能力進
行定性、定量分析，篩選出產酸高的菌株保存，再把產酸高的菌株經蘿l、汁發酵 】，進一步選擇產
酸高、_l】味純正的菌株保存鑒定
1 2 3 乳酸定性測定果用紙層析法。溶劑系統為乙醇：濃氨水：水=80：5：15，顯色劑為0 04％
的溴甲酚紫酒精溶液。層析時將乳酸、檸檬酸配成1％ 的標准溶液，兩種標准溶液 及乳酸發酵液
均點樣3 ．上行層析，顯色與標准樣比較
1．2 4 乳酸的定量測定採用氣相色譜法，利用苄酯化法制備乳酸衍生物，將待測乳酸菌株在產
酸培養基內37"C培養3d，離心。取上清液剃備衍生物，氣相色譜分析含量。氣相色譜工作條件為：
EGS色譜柱，柱溫160'C，氣化溫度180'17．，檢測器溫度l70"C，載氣為N，。
1．2 5 菌種鑒定根據《簡明第八版伯傑細菌鑒定手冊》 和《一般細菌常用鑒定手冊》[6 對復篩
出的菌株的形態、生理生化、碳源利用等方面進行系統鑒定，並提取乳酸菌株DNA，採用熔鏈溫度 .
8. 大腸桿菌 乳酸菌如何做實驗檢測
大腸桿菌的檢測：大腸菌群測定的操作細則
大腸菌群系指一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。該菌主要來於人畜糞便,故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛生質量,推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。
食品中大腸菌群數系以100mL(g)檢樣內大腸菌群最可能數(MPN)表示。
1 設備和材料
1.1 溫箱：36±1℃。 1.2 冰箱:0～4℃。 1.3 恆溫水浴 :44.5±0.5℃。 1.4 天平。 1.5 顯微鏡。1.6 均質器或乳缽。 1.7 平皿:直徑為90mm。 1.8 試管。 1.9 吸管。 1.10 廣口瓶或三角燒瓶:容量為500mL。 1.11 玻璃珠:直徑約5mm。 1.12 載玻片。 1.13 酒精燈。 1.14 試管架。
2 培養基和試劑
2.1 乳糖膽鹽發酵管:按GB 4789.28中4.9規定。
2.2 伊紅美藍瓊脂平板:按GB 4789.28中4.25規定。
2.3 乳糖發酵管:按GB 4789.28中4.10規定。
2.4 EC 肉湯:按GB 4789.28中4.11規定。
2.5 磷酸鹽緩沖稀釋液:按GB 4789.28中3.22規定。
2.6 生理鹽水。
2.7 革蘭氏染色液:按GB 4789.28中2.2規定。
3.1 檢樣稀釋
3.1.1 以無菌操作將檢樣25mL(或g)放於有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內予置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質器,以8 000-10 000 r/min的速度處理1min,做成1:10的均勻稀釋液。
3.1.2 用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。
3.1.3 另取1mL滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1mL滅菌吸管。
3.1.4 根據食品衛生標准要求或對檢樣污染情況的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度,接種3管。
3.2 乳糖發酵試驗
將待檢樣品接種於乳糖 膽鹽發酵管內,接種量在1mL以上者,用雙料乳糖膽鹽發酵管,1mL及1mL以下者,用單料乳糖膽鹽發酵管。每一稀釋度接種3管,置36±1℃ 溫箱內,培養24±2h,如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣,則可報告為大腸菌群陰性,如有產氣者,則按下列程序進行。
3.3 分離培養
將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上,置36±1℃ 溫箱內,培養18-24h,然後取出,觀察菌落形態,並做革蘭氏染色和證實試驗。
3.4 證實試驗
在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1-2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發酵管,置 36±1℃溫箱內培養24±2h,觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌,即可報告為大腸菌群陽性。
3.5 報告
根據證實為大腸菌群陽性的管數,查MPN檢索表,報告每100mL(g)大腸菌群的MPN值。
4 糞大腸菌群(faecal coliform)
4.1 用接種環將所有產氣的乳糖膽鹽發酵管培養物(見3.2條)轉種於EC肉湯管內,置44.5±0.2℃水浴箱內(水浴箱內的水面應高於EC肉湯液面),培養24±2h,經培養後,如所有EC肉湯管均不產氣,則可報告為陰性;如有產氣者,則將所有產氣的EC肉湯管分別轉種於伊紅美藍瓊脂平板上,置 培養18-24h,凡平板上有典型菌落者,則證實為糞大腸菌群陽性。
4.2 結果報告
根據證實為糞大腸菌群的陽性管數,查MPN檢索表,報告每100mL(g)糞大腸菌群的MPN值
乳酸菌的檢測：
一 概述
乳酸菌是指一群能分解葡萄糖或乳糖產生乳酸，需氧和兼性厭氧，多數無動力，過氧化氫酶陰性，革蘭氏陽性的無芽胞桿菌和球菌。這類細菌在自然界分布廣泛，可棲居在人和各種動物的口腔、腸道等器官內，在土壤、食品、飼料、水及一些臨床標本中都有乳酸菌的存在。乳酸菌在工業、農業和醫葯等與人類生活密切相關的領域應用價值很高，相當多的乳酸菌對人、畜的健康起著有益的作用，但個別菌種能對人畜致病，乳酸菌主要包括23個屬的細菌。
二 樣本採集
檢樣主要為含乳酸菌活菌的飲料和微生態制劑，樣本應放入冰箱保存，心快檢驗。
三 檢驗方法（中華人民共和國國家標准 乳酸菌飲料中乳酸菌的微生物學檢驗GB／T 16347-1996）
乳酸菌菌總數的測定：乳酸菌菌落總數是指標樣在一定條件下培養後，所得1ml檢樣中所含乳酸菌菌落的總數。
（一）檢驗程序
乳酸菌菌落總數檢驗程序如下：
（二）培養基和試劑
改良TJA培養基（改良番茄汁瓊脂培養基）；改良MC培養基（modified Chalmers培養基）；0.1％亞甲藍牛乳培養基；6.5％氯化鈉肉湯參照；pH9.6葡萄糖肉湯；40％膽汁肉湯；澱粉水解培養基；精氨酸水解培養基；乳酸桿菌糖發酵管；七葉苷培養基；革蘭氏染色液；3％過氧化氫溶液；蛋白腖水、靛基質試劑；明膠培養基；硝酸鹽培養基、硝酸鹽試劑；生理鹽水：定量分裝於三角瓶和試管內滅菌。
（三）操作步驟
1．以無菌操作將經過充分搖勻的檢樣25ml（或25g）放入含有225ml滅菌生理鹽水的來菌廣口瓶內做成1：10的均勻稀釋液。
2．用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1m，沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水的試管內（注意吸管尖端不要觸及管內稀釋液）。
3．另取1ml滅菌吸管，按上述操作順序，作10倍增稀釋液，如此每遞增一次，即換用1支1ml滅菌吸管。
4．選擇2～3個以上適宜稀釋度，分別在作10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移1ml稀釋液於滅菌平皿內，每個稀釋度作兩個平皿。
5．稀釋液移入平皿後，應及時將冷至50℃的乳酸菌計數培養基（改良TJA或改良MC）注入平皿約15ml，並轉動平皿使混合均勻。同時將乳酸菌計數培養基傾入加有1ml稀釋液檢樣用的滅菌生理鹽水的滅菌平皿內作空白對照，以上整個操作自培養物加入培養皿開始至接種結束須在20min內完成。
6．待瓊脂凝固後，翻轉平板，置36℃±1℃溫箱內培養72h±3h取出，觀察乳酸菌菌特徵，選取菌落數在30～300之間的平板進行計數。計算後，隨機挑取5個菌落數進行革蘭氏染色，顯微鏡檢查並做過氧氫酶試驗。革蘭氏陽性，過氧化氫酶陰性，無芽胞的球菌或桿菌可定為乳酸菌。根據證實為乳酸菌菌落計算出皿內的乳酸菌數，然後乘其稀釋倍數即得每亳升樣品中乳酸菌數。例如，檢樣10－4的稀釋液在改良TJA瓊脂平板上，生成的可疑菌落為35個，取5個鑒定，證實的乳酸菌的4個，則1ml檢樣中乳酸菌數為：
35×4／5×104＝2.8×105
7．乳酸菌在改良TJA和改良MC培養基上菌落生長形態特徵。
（四）乳酸菌的鑒定
對上述分離到的乳酸菌需進行菌種鑒定時，則作以下試驗。
1．菌種制備 自平板上挑取菌落，接種於改良TJA或改良MC瓊脂斜面，於36℃±1℃，24～48h培養，刮取菌苔，分別進行下列試驗。
2．乳酸桿菌鑒定試驗 極少見還原硝酸鹽，不液化明膠，不產生靛基質和硫化氫。
3．常見乳桿菌屬內種的碳水化合物反應。
4．產酸乳的鏈球菌的鑒別試驗。
9. 乳酸的檢驗方法是什麼
您好3M微生物快速檢測片包括：細菌總數測試片，乳酸菌測試片，大腸菌群測試片，大腸桿菌(同時檢測大腸菌群)測試片，金黃色葡萄球菌測試片，黴菌酵母菌測試片，腸桿菌科測試片，環境李斯特測試片，快速大腸菌群測試片，高靈敏度大腸菌群測試片，沙門和李斯特試劑盒，3M快速塗抹棒，電子移液槍，ATP熒光檢測儀。3M微生物快速檢測片是一種檢測微生物的快速檢測方法，操作簡單，結果准確，只需要三步即可完成，接種，培養，判讀。不需要很熟練的化驗技巧。Petrifilm能減少測試時間。對於大腸菌群測試時間能從48小時以上減少到24小時，對於大腸菌群，測試時間能從120小時減少到24小時，而金黃色葡萄球菌的測試時間能從96小時以上減少到24小時。操作簡單，無須驗證實驗，結果准確。因此，使用Petrifilm，你將能得到更好的現金流，減少庫存和儲存的費用，更好的財務控制以及贏得更有利的市場時間。（三）全球化的認證，國際化的使用方法：目前3M微生物測試片已是中國的國家行業標准：細菌總數，SN/T1897-2007大腸菌群SN/T1896-2007，大腸桿菌SN/T1896-2007，金黃色葡萄球菌SN/T1895-2007山東省出入境檢驗檢疫局食品實驗室，青島市出入境檢驗檢疫局食品實驗室以及濰坊市商檢局，臨沂局，濟南局等也在應用該產品進行微生物含量的常規檢測。作為全球化的一種快速測試方法，3M測試片已得到國際上許多權威機構的認證。如：美國分析化學協會（AOAC），法國標准化協會（AFNOR），北歐國家認證(NordValValidation)，加拿大健康保護協會(HealthProtectionBranch)，紐西蘭食品安全認可方法(NewZealandFoodSafetyAuthority)，日本食品安全法規標准分析方法()，韓國聯邦法典(KoreaCodeofFederalRegulation)澳大利亞VictorianDiaryInstryAuthority。目前已是韓國國家的檢測方法，而且通過了日本的檢測機構-------農林水產省的認可。另外也是比利時，芬蘭，智力等國的國家官方推薦方法。（四）提高准確性，減少安全隱患：在生產車間，傳統檢測方法使用的試管，培養皿等玻璃器具一旦進入設備或是原料，半成品，帶來的風險是不可估量的。3M的產品全部使用塑料聚合物，避免了這一隱患，降低了傳統方法可能引入物理性污染的可能性。同時，對在生產車間的表面接觸實驗，空氣監控，3M方法簡便准確，有助於長期監控，得到穩定可比對的實驗結果。採用Petrifilm測試片，大大提高了實驗室的工作效率，這使得員工可以有時間去開展其他較為復雜病原菌實驗（如分析沙門氏菌和李斯特氏菌等），在工廠使用傳統的方法進行檢測的時候，這些工作常常會因為沒有足夠的時間而被忽略。另外，節省的時間和人力也能用於某些預防工作：環境保護，培訓和在工廠實施HACCP。想購買3M測試片找我，[email protected]
10. 乳酸菌的檢測方法和培訓資料！（越詳細越好）
摘要：
〔目的〕探索用細菌學方法檢測酵母浸出粉中維生素B族的存在。〔方法〕採用五種乳酸菌接種於含有被測的五種中外產的酵母粉培養基，用細菌學靈敏度、菌落計數和菌落直徑測定的方法進行比較。〔結果〕經統計學處理，生長波度、菌落計數和菌落直徑試驗結果說明五種酵母粉之間有顯著性差異，而靈敏度試驗則未見顯著性差異。〔結論〕酵母浸出粉中維生素B族生長因子的細菌學實驗方法估計，可以參考生長濃度、菌落計數和菌落直徑等綜合性實
指標。
關鍵詞：
乳酸菌；酵母浸出粉；維生素B族生長因子；生長濃度；菌數計數；菌落直徑
看到的
不知是不是想要的
還有另個
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFD2002-RPGY200201006.htm
乳酸菌飲料中乳酸菌的微生物學檢驗
1 主題內容與適用范圍
本標准規定了乳酸菌飲料中乳酸菌檢驗的技術要求。
本標准適用於以鮮乳、乳粉或輔以大豆等為原料，經乳酸菌發酵加工製成的具有相應風味的活性乳酸菌飲料。
2 引用標准
GB 4789.28 食品衛生微生物學檢驗 染色法、培養基和試劑
3 術語
乳酸菌：一群能分解葡萄糖或乳糖產生乳酸，需氧和兼性厭氧，多數無動力，過氧化氫酶陰性，革蘭氏陽性的無芽胞桿菌和球菌。
乳酸菌菌落總數：檢樣在一定條件下培養後，所得1mL檢樣中所含乳酸菌菌落的總數。
4 設備和材料
4.1 溫箱：36±1℃。
4.2 冰箱：0～4℃。
4.3 恆溫水浴：46±1℃。
4.4 電爐：可調式。
4.5 吸管：容量為1，10和25mL。
4.6 廣口瓶或三角瓶：容量為500mL。
4.7 平皿：直徑為9cm。
4.8 試管：18×180mm。
4.9 顯微鏡。
5 培養基和試劑
5.1 改良TJA培養基(改良番茄汁瓊脂培養基)。
5.2 改良MC培養基(Modified Chalmers培養基)。
5.3 0.1%美蘭牛乳培養基。
5.4 6.5%氯化鈉肉湯。
5.5 pH9.6葡萄糖肉湯。
5.6 40%膽汁肉湯。
5.7 澱粉水解培養基。
5.8 精氨酸水解培養基。
5.9 乳酸桿菌糖發酵管。
5.10 七葉苷培養基。
5.11 革蘭氏染色液：按GB 4789.28規定執行。
5.12 3%過氧化氫溶液：按GB 4789.28規定執行。
5.13 蛋白腖水、靛基質試劑：按GB 4789.28規定執行。
5.14 明膠培養基：按GB 4789.28規定執行。
5.15 硝酸鹽培養基、硝酸鹽試劑：按GB 4789.28規定執行。
5.16 生理鹽水：定量分裝於三角瓶和試劑管內滅菌。
6 乳酸菌菌落總數的測定
6.1 檢驗程序
乳酸菌菌落總數檢驗程序如下：
（略）
6.2 操作步驟
6.2.1 以無菌操作將經過充分搖勻的檢樣25mL(或25g)放入含有225mL滅菌生理鹽水的滅菌廣口瓶內作成1∶10的均勻稀釋液。
6.2.2 用1mL滅菌吸管吸取1∶10稀釋液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(注意吸管尖端不要觸及管內稀釋液)。
6.2.3 另取1mL滅菌吸管，按上述操作順序，作10倍遞增稀釋液，如此每遞增一次，即換用1支1mL滅菌吸管。
6.2.4 選擇2～3個以上適宜稀釋度，分別在作10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液於滅菌平皿內，每個稀釋度作兩個平皿。
6.2.5 稀釋液移入平皿後，應及時將冷至50℃的乳酸菌計數培養基(改良TJA或改良MC)注入平皿約15mL，並轉動平皿使混合均勻。同時將乳酸菌計數培養基傾入加有1mL稀釋液檢樣用的滅菌生理鹽水的滅菌平皿內作空白對照，以上整個操作自培養物加入培養皿開始至接種結束須在20min內完成。
6.2.6 待瓊脂凝固後，翻轉平板，置36±1℃溫箱內培養72±3h取出，觀察乳酸菌菌落特徵(見表1)，選取菌落數在30～300之間的平板進行計數。計算後，隨機挑取5個菌落數進行革蘭氏染色，顯微鏡檢查並做過氧化氫酶試驗。革蘭氏陽性，過氧化氫酶陰性，無芽胞的球菌或桿菌可定為乳酸菌。根據證實為乳酸菌菌落計算出該皿內的乳酸菌數，然後乘其稀釋倍數即得每毫升樣品中乳酸菌數。例如，檢樣10－4的稀釋液在改良TJA瓊脂平板上，生成的可疑菌落為35個，取5個鑒定，證實為乳酸菌的是4個，則1mL檢樣中乳酸菌數為：
6.3 乳酸菌在改良TJA和改良MC培養基上菌落生長形態特徵見表1。
表1 乳酸菌在不同培養基上菌落特徵
（表略）
7 乳酸菌的鑒定
對上述分離到的乳酸菌需進行菌種鑒定時，則作以下試驗。
7.1 菌種制備：自平板上挑取菌落，接種於改良TJA或改良MC瓊脂斜面，於36±1℃，24～48h培養，刮取菌苔，分別進行下列試驗。
7.2 乳酸桿菌鑒定試驗：極少見還原硝酸鹽，不液化明膠，不產生靛基質和硫化氫。
7.3 常見乳桿菌屬內種的碳水化合物反應，見表2。
7.4 產乳酸的鏈球菌的鑒別試驗，見表3。
表2 常見乳桿菌屬內種的碳水化合物反應
（表略）
表3 乳酸的鏈球菌的鑒別表
（表略）
參考資料：http://www.hopebiol.com/asphtml/refere85.htm