目前，檢測PCT的實驗室方法有很多，不僅可以定性，亦可以定量。常用的方法有如下幾種：
放射免疫學分析法
利用人工合成的多克隆抗體特異地識別和連接合成氨基酸降鈣素原。該方法能檢測正常人的血清PCT，可靠敏感度為4pm/mL，檢測的是游離PCT、結合型PCT和降鈣素基因相關肽前體的混合物，而不能區分上述三種物質。該法檢測耗時長(19～22h)，而且有放射性元素的污染使用受到限制。
2.雙抗夾心免疫化學發光法(ILMA)
運用雙單克隆抗體，其中一個抗體為降鈣素抗體，另一個為抗鈣素抗體，分別結合到PCT分子的降鈣素和抗鈣素部位，可排除交叉反應。其中一個抗體是游標記的，另一個未標記的抗體固定在試管的內壁，反應過程中兩個抗體與PCT分子結合而形成三明治復合體，發光部位於反應管的表面。該法操作簡便，特異性強，敏感性高，測定的低限值為0.1ng/mL，2h可以出結果。
3.膠體金比色法（B.R.A.H.M.SPCT-Q-半定量快速實驗）
採用膠體金技術，包括膠體金標記的抗抗鈣素的單克隆抗體和用作包被的抗降鈣素多克隆抗體，當標本(血清或血漿)加人標本孔，金標單克隆抗體與標本中的PCT結合，形成金標記的抗原抗體復合物。該復合物在反應膜上移動，與固定在膜上的抗降鈣素抗體結合形成更大的復合物。當PCT濃度超過0.5ng/mL，該復合物顯示紅色，紅色的深淺與PCT的濃度成正比，與標准比色板比較即可得出PCT的濃度范圍。結果分為四級:正常<0.5ng/mL；輕度升高>0.5ng/mL；明顯升高>2ng/mL；顯著升高>10ng/mL。該法具有快速簡便，易觀察的特點。
4.透射免疫濁度法
樣品中的PCT與試劑中的PCT單克隆抗體發生抗原-抗體反應，使反應液濁度增加，並在一定范圍內反應液濁度與所加人抗原的量呈線性關系，可使用生化分析儀或其它光學檢測儀器在6O0nm波長處測定反應液吸光度值，反應液吸光度值與所測PCT濃度成正比。該測定方法簡便、快速，可自動化，適合於批量檢測。2005年國內已有研製開發的PCT免疫比濁試劑盒供應，為PCT的廣泛應用提供了方便條件。雖然免疫透射比濁的方法學及臨床應用尚需做進一步的驗證，但其應用前景非常看好。
② 細胞因子檢測方法哪位了解，好一些的生物學科網有哪些
目前，細胞因子已廣泛應用於臨床的已有EPO、IFN-α、G-CSF、GM-CSF以及試用於臨床的白細胞介素等。為了研究細胞因子在生理系統的作用以及了解細胞因子產品用於臨床治療的效果，進行細胞因子的檢測就必不可少，而且用於臨床診斷的細胞因子分析方法必須適用於常規操作。細胞因子的檢測尚未在臨床診斷上廣泛開展，已知目前採用的細胞因子檢測方法均不完善，且不同的檢測方法所得的結果差異較大，給臨床治療帶來一定的困難。因此，有必要了解各種檢測方法的特性及影響細胞因子濃度的因素。 1 原理和方法細胞因子的發現依賴於其生物學活性，因此，建立了生物分析法用於細胞因子的檢測。隨後，用於檢測實驗溶液(如組織培養上清液)中細胞因子的免疫分析法被建立，並不斷用於實驗室研究。但准確地、可重復地測定細胞因子具有一定困難，主要原因是眾所周知的細胞因子的含量極低(大部分都是以pmol/L計)，同時存在著源於異嗜性抗體，類風濕因子以及特異的和非特異的細胞因子結合蛋白等的顯著干擾。在生物幫那裡可以詳細的了解一下，那裡有很多實驗領域的精品技術文件，並且圖文並茂，提供生物領域的學科知識、實驗技術方法與技巧等please click to connect www.bio1000.com/zt/cell/46213.html .that can help you細胞因子生物學活性檢測和濃度測定的分析方法主要有以下幾類。1.1 生物分析法 生物分析法方便，敏感性高，但所有細胞系有可能受幾種細胞因子的影響，特異性則較差。又由於可溶性細胞因子受體等抑制劑的存在，使生物分析法可能低估細胞因子的活性。常用的方法有2種:(1)依賴性細胞株增敏實驗。一些腫瘤細胞株依賴於細胞因子方能在體外增殖，如TF-1細胞株依賴於GM-CSF和IL-3，CTLL細胞株依賴於IL-2，TTD-1細胞株依賴於IL-6等 。可利用這些依賴株檢測相應的細胞因子。但是，並非所有細胞因子均有相應的依賴株，因此限制了此法的應用。(2)功能檢測實驗。利用一些細胞因子的功能特性而建立相應的活性測定方法。如IFN抗病毒實驗和TNF對L 929 細胞的殺傷作用等 。此外，生物分析法還有骨髓集落形成實驗，細胞毒或細胞抑制實驗，次級分子分泌的誘導，化學趨化和細胞因子分泌性的抑制實驗等。1.2 免疫分析法 利用抗原機體反應的原理，制備出抗細胞因子的單抗或多抗，可進行細胞因子的免疫檢測，它包括放免實驗(RIA)和酶聯免疫吸附實驗(ELISA)等。其優點是高特異性、高靈敏度、操作簡便。缺點是不能證明被測細胞因子是否為具有完整生物活性結構的蛋白質而非變性蛋白質。1.3 CKmRNA的測定 (1)分子雜交實驗:首先制備出細胞因子的基因探針，通過分子雜交檢測細胞內CKmRNA的表達。(2)逆轉錄PCR(RT-PCR)法技術:可快速、靈敏地檢測表達很低的CKmRNA，並可同時測定同一樣本中多種CKmRNA，操作過程包括細胞因子產生細胞的RNA提取，mRNA經逆轉錄合成cDNA，以cDNA為模板，在細胞因子引物的引導下，即可進行PCR擴增。根據定量CKmRNA方法和原理的不同，可分為半定量PCR法，競爭性定量PCR法，內參標定量PCR法，HPLC-PCR法和酶聯免疫定量PCR法。目前市售的商品試劑盒已能用於大多數細胞因子的檢測，但因其價格昂貴而阻礙了其廣泛使用。同時，人細胞因子的測定仍存在許多問題，檢測方法選擇不當可能得到不一致的結果，有時有必要選擇一個以上的檢測方法測定細胞因子。 2 靈敏度細胞因子具有很強的生物學活性，其生物分析法的靈敏度極高。然而，在測定血漿中細胞因子正常濃度時，難以確定免疫分析法令人滿意的靈敏度。不同細胞因子的參考值變化很大，難以定義其參考值范圍。如Damas等[7] 在研 究細胞因子與敗血症時，使用兩步免疫放射測定實驗(IRˉMA)測定IL-6(靈敏度:5ng/ml)一步IRMA法測定TNF-α(靈敏度:5ng/L)和IL-1β(靈敏度:4ng/L)，在正常血清中未測得上述細胞因子。而Riikonen等使用具有相似檢測限的RIA法，在20例健康兒童中，IL-1β的平均濃度為12.1ng/L，IL-6的平均濃度為83ng/L;在71例健康兒童中，TNF-α的平均濃度為40±2ng/L。由此可見，不同的免疫分析方法之間存在極大的差異，其靈敏度變化可能是由於其准確度和特異性的不同而引起。3 准確度和特異性影響細胞因子檢測准確度和特異性的因素有:(1)抗體:單抗的表位識別;(2)細胞因子:多種分子形式，結合蛋白復合物、抑制劑和可溶性受體復合物;(3)血漿基質:干擾抗體，異嗜性抗體和類風濕因子;(4)標准:重組參考物質可能不顯示與樣品平行的劑量———反應曲線。3.1 細胞因子結合蛋白 已知IL-1β、TNF-α和IL-6能結合從細胞進入血漿的可溶性受體或特異的拮抗劑。免疫分析法是否能識別這樣的結合形式幾乎是未知的，但是對TNF的研究得出了一些重要結論。20世紀80年代後期，《Lancet》上發表了大量關於癌症病人TNF-α測定缺乏可靠性和生物分析法與免疫分析法關系的文章。但使用競爭性免疫分析法時，癌症病人與敗血症病人的TNF-α是可被檢測的。而ELISA法由於不能測定TNF-α與P 55 TNF受體的結合物而無法測定癌症病人血漿中的TNF-α。3.2 血漿中包含幾種形式的IL-6分子，它們與一些抗血清的作用較弱，缺乏生物學活性並與其它血漿蛋白質以及IL-6的可溶性受體組成復合物。已知IL-6免疫分析法和生物分析測定其在正常血清中的濃度為0或在10～75ng/L范圍，敗血症病人的IL-6濃度升高到1～2μg/L，腦膜炎病人的IL-6濃度升到200μg/L。然而，May等說明大多數的檢測方法僅僅測定了低分子量的IL-6，他們採用能識別IL-6高分子量的單抗，測得在正常血清中IL-6的濃度為1～10μg/L，並且在1例骨髓移植後病人的血清樣品中，測得IL-6的濃度為5～10mg/L。3.3 多種分子的形式 一些細胞因子的多種分子形式已被充分認識，但是其對細胞因子測定影響的重要性並未得到徹底的研究。IL-6是一個最好的例子，它由一個位於第7染色體上，包含5個外顯子的單一多傑基因編碼。其氨基酸序列包括幾個潛在的O-糖基位點，2個N-糖基位點和幾個絲氨酸磷酸化位點。由細菌產生的重組IL-6的相對分子量為21Kd。人成纖維細胞至少分泌6種形式，相對分子量為23～30Kd的IL-6，它們均是糖蛋白，能在敗血症病人的血漿中被檢測。人內皮細胞分泌一種分子量為45Kd的IL-6，它似乎是血漿中的IL-6的主要存在形式。3.4 人血漿中的干擾物質 血漿中通常包含有與IgG反應的抗體。這些異嗜性的抗體可影響夾心免疫分析法，它們在俘獲抗體和被標記的抗體間形成橋梁，而錯誤地導致高分析值。研究表明，15%～40%的病人樣本中含有能夠干擾檢測的抗體。異嗜性抗體能與鼠、兔和牛血清免疫球蛋白發生反應，在大多數情況下，它們與牛IgG的結合最強。在檢測中，加入正常的非免疫動物血清吸附異嗜性抗體，常能夠消除這種形式的干擾。3.5 類風濕因子是IgM的自身抗體 Hamilton等的研究說明，IgM類風濕因子與鼠IgG的結合發生於1%的健康獻血者和31%的類風濕關節炎病人。然而，也有研究表明，在9.1%的正常獻血者中發生了這類結合。這些抗體可造成與異嗜性抗體完全相同的影響，並且他們在對細胞因子檢測具有特別意義的類風濕病患者中的濃度極高。