⑴ 細胞內DNA、RNA、蛋白質常用的分子生物學檢測方法shi
細胞內DNA用甲基綠檢測,而rna用吡羅紅檢測,蛋白質則用雙縮脲試劑檢測。
⑵ 高分子材料的檢測方法
各種方法,熱分析,核磁,紅外·······LZ這個太多了
⑶ 蛋白分子量檢測方法有哪些 除sds wb之外的技術
最小分子量法、滲透壓法、沉降法、層析法
⑷ 常用的分子生物學檢驗技術有哪些
分子診斷學的研究范疇包括:利用遺傳學、病理學、免疫學、生物化學、基因組學、蛋白質組學和分子生物學的理論和方法探討疾病發生和發展的分子機制。為整個疾病過程尋求特異的分子診斷指標,以及利用分子生物學技術為這些分子診斷指標建立臨床實用的檢測方法。
⑸ 實驗室測定蛋白質分子量的方法有哪些
測定蛋白質分子量的常用方法:
粘度法、凝膠過濾層析法、凝膠滲透色譜法、SDS-凝膠電泳、滲透壓法、質譜法包括電噴霧離子化質譜技術和基質輔助激光解吸電離質譜技術、光散射法(多角度激光散射)、沉降法(超速離心法)。
1、粘度法
一定溫度條件下,高聚物稀溶液的粘度與其分子量之間呈正相關性,隨著分子量的增大,聚合物溶液的粘度增大。通過測定高聚物稀溶液粘度隨濃度的變化,即可計算出其平均分子量(粘均分子量)。
如果高聚物分子的分子量愈大,則它與溶劑間的接觸表面也愈大,摩擦就大,表現出的特性粘度也大。特性粘度和分子量之間的經驗關系式為:
8、電噴霧離子化質譜技術
電噴霧離子化質譜技術(ESI-MS)是在毛細管的出口處施加一高電壓,所產生的高電場使從毛細管流出的液體霧化成細小的帶電液滴,隨著溶劑蒸發,液滴表面的電荷強度逐漸增大,最後液滴崩解為大量帶一個或多個電荷的離子,致使分析物以單電荷或多電荷離子的形式進入氣相的質譜技術。ESI-MS 測定蛋白質大分子是根據一簇多電荷的質譜峰群,通過解卷積的方式計算得到蛋白質的分子量,由於ESI-MS可以產生多電荷峰,因此使得測試的分子質量范圍大大擴大。
優缺點:(1)對樣品的消耗少,不會造成樣品的大量浪費;(2)對樣品分子質量測試靈敏度、分辨力和准確度都相當高;(3)能夠方便地與多種分離技術聯用,如毛細管電泳、高效液相色譜等,是解決非揮發性、熱不穩定性、極性強的復雜組分化合物的定性定量的高靈敏度檢測方法。
9、基質輔助激光解吸電離質譜技術
基質輔助激光解吸電離質譜技術(MALDI-MS)是將待測物懸浮或溶解在一個基體中,基體與待測物形成混晶,當基體吸收激光的能量後,均勻傳遞給待測物,使待測物瞬間氣化並離子化。基體的作用在於保護待測物不會因過強的激光能量導致化合物被破壞。MALDI的原理是用激光照射樣品與基質形成的共結晶薄膜,基質從激光中吸收能量傳遞給生物分子,而電離過程中將質子轉移到生物分子或從生物分子得到質子,而使生物分子電離的過程。TOF的原理是離子在電場作用下加速飛過飛行管道,根據到達檢測器的飛行時間不同而被檢測即測定離子的質荷比(M/Z)與離子的飛行時間成正比,檢測離子。
優缺點:(1)同ESI-MS 一樣對樣品的消耗很少;(2)隨著質量分析器的不斷改進、新的基質的不斷發現和應用以及延遲萃取技術的使用,使得MALDI-MS 的最高解析度不斷提高,甚至超過ESI-MS;(3)MALDI-MS 單電荷峰佔主要部分,碎片峰少,非常有利於對復雜混合物的分析,且能忍受較高濃度的鹽、緩沖劑和其他難揮發成分,降低了對樣品預處理的要求;(4)MALDI-TOF 質譜對生物大分子分子量的測定范圍是所有測試技術中最廣的。
⑹ 1.寫出基因工程第四個步驟中,要從分子水平上檢測的內容及採用的檢測方法
從分子水平上檢測有DNA分子雜交技術,分子雜交技術和抗原-抗體雜交技術。
1.DNA分子雜交技術檢測的是轉基因生物的DNA是否插入了目的基因。將轉基因生物的基因組DNA提取出來,在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作標記,以此作為探針,使探針與基因組DNA雜交,如果顯出雜交帶,就表明目的基因已插入染色體DNA中。
2.分子雜交技術檢測目的基因是否轉入出了mRNA。從轉基因生物中提取出mRNA,用標記的目的基因作為探針,與mRNA雜交,如果顯出雜交帶,則表明目的基因轉入出了mRNA。
3.抗原-抗體雜交檢測目的基因是否翻譯成蛋白質。從轉基因生物中提取蛋白質,用相應的抗體進行抗原-抗體雜交,若有雜交帶出現,表明目的基因已形成蛋白質產物。
⑺ 與其他分子生物學方法相比,用熒光探針RT-PCR法檢測諾如病毒有什麼優勢
方法包括等溫核酸擴增(NASBA)、逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)、熒光染料RT-PCR、熒光探針RT-PCR、多重RT-PCR等,是目前檢測諾如病毒應用最廣泛的方法,被稱為檢測諾如病毒的「金標准」。
NASBA直接擴增RNA來進行檢測,儀器相對簡便,通過瓊脂糖凝膠電泳、印跡雜交或者熒光檢測來鑒定結果,靈敏度低於RT-PCR;RT-PCR通過逆轉錄RNA模板、PCR擴增特異性產物,使用瓊脂糖凝膠電泳來鑒定結果;熒光染料RT-PCR通過向RT-PCR反應體系中添加非特異性的熒光染料,可以在反應過程中監測擴增產物的生成量,但需要做熔解曲線分析來確定反應的特異性;熒光探針RT-PCR通過特異性的熒光探針與引物,可實時監控反應過程中特異性產物的變化,並且可以實現同一管中多個基因的檢測(多重),特異性較好,假陽性率低,檢測靈敏度可達10-100拷貝/反應,可用於取代普通RT-PCR。
⑻ 分子病理檢測包括哪些
分子病理檢測主要包括費氏檢測以及熒光定量PCR檢測、一代基因測序、二代基因測序檢測。病理檢測由原先的形態學為基礎的檢測,現在逐步進入到細胞和分子水平,即分子病理檢測。分子病理檢測主要包括費氏檢測以及熒光定量PCR檢測、一代基因測序、二代基因測序檢測。熒光定量PCR檢測主要為AM式方法,主要用於肺癌的EGFR和KRAS檢測,用於指導肺癌病人的靶向治療。
⑼ 分子互作檢測方法有哪些
生物分子的相互作用可通過多種檢測手段進行檢測,如熒光能量共振轉移(FRET),熒光偏振(FP),時間分辨熒光(TRF)均相時間分辨熒光(HTRF),Western-Blot等, 而這些檢測技術均可在酶標儀中實現。
⑽ 細菌分子鑒定的方法有哪些
一般從DNA、RNA和蛋白質這三個方面鑒定。將三種物質分別提取出來,各自進行鑒定。鑒定的方法可以用你提到的這些。
1.核酸雜交:簡單的說,就是將需檢測的核酸與標記的分子結合使得未知核酸可以被檢測到。
2.脈沖場凝膠電泳:利用電場讓不同大小的帶電DNA分子以不同的速度移動,從而將不同大小的分子分開。可分離10kb--10mb的DNA分子。
3.16S rRNA :16S rRNA所對應的 16S rDNA基因在微生物基因組中具有高度保守性;對16S rDNA而言,如果出現3個鹼基以上的差異就可以斷定細菌不屬於同一種屬。它具有高度的靈敏性,而且不需要培養,檢測指標也很單一。可以快速檢測未知微生物或致病微生物。
4.RAPD:對整個未知序列的基因組進行多態性分析的分子技術。先進行PCR擴增,然後電泳分離染色,在紫外透視儀上檢測多態性。
5.質粒質譜分析法:我只了解過蛋白質的質譜分析技術,質粒的沒有了解過。
蛋白質:將蛋白質酶解成小肽段並混合基質,用激光將呈離子化氣體狀態的待測物噴射,經電場到達檢測器,根據到達的時間分析肽段的分子質量。