卵磷脂檢測的方法

1. 簡述卵磷脂提取和鑒定的方法和原理

卵磷脂的提取與鑒定
實驗目的:
1、學習和掌握卵磷脂的提取和鑒定方法；
2、了解卵磷脂生物學功能。
實驗原理:
卵磷脂是甘油磷脂的一種。是細胞膜磷脂雙分子層的重要成分。卵磷脂又稱磷脂醯膽鹼，在動植物體內均有、分布，在動物的腦、精液、肝、腎上腺和紅細胞中含量較多，蛋黃中含量可達 8-10％。
卵磷脂是兩性分子，可溶於含少量水的非極性溶劑中(但不易溶於水和無水丙酮)，可用含少量的水的非極性溶（熱95％乙醇）進行提取。新提取的卵磷脂為白色臘狀物，與空氣接觸後，其不飽和脂肪酸鏈被氧化而呈黃褐色；卵磷脂中的膽鹼，在鹼性溶液中可分解為三甲胺，

2. 測雞蛋裡面卵磷脂用什麼方法

高效液相色譜法

目的：建立雞蛋中腦磷脂和卵磷脂的高效液相色譜測定方法。 方法：取凍干雞蛋粉30mg，加入5mL甲醇，超聲波震盪20min後離心取上清液進樣檢測。色譜條件為：色譜柱Zorbax SIL硅膠柱（4．6mm×250mm），流動相為甲醇：1％磷酸（50：1，V／V），流速0．5mL／min，柱溫20℃，紫外檢測器波長為205nm，進樣量5μL。 結果：腦磷脂在529．2～5292ng／μL濃度范圍內呈線性關系（R^2=0．9999），卵磷脂在4455～44550ng／μL濃度范圍內呈線性關系（R^2=0．9997），腦磷脂和卵磷脂的平均回收率分別為97．54％和96．42％。 結論：應用本方法能快速准確同時測定雞蛋中腦磷脂和卵磷脂的含量，樣品前處理簡單易行。

3. 蛋黃卵磷脂的含量測定

【含量測定】 氮 取本品約0.1g，依法測定（附錄Ⅶ D第二法）。含氮（N）應為1.75%～1.95%。
磷 對照品溶液的制備 取105(C乾燥至恆重的磷酸二氫鉀約0.13g，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解並稀釋至刻度，精密量取10ml置100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，每1ml中含磷（P)約為30ug。
供試品溶液的制備 取本品約0.1g，精密稱定，至坩堝中，加氯仿2ml溶解，加氧化鋅2g，蒸去氯仿，緩緩熾灼使樣品炭化，然後在600(C熾灼1小時，放冷，加鹽酸溶液（1(2）10ml，煮沸5分鍾使殘渣溶解，轉移到100ml量瓶中，加水稀釋至刻度。
標准曲線的制備 精密量取對照品0、2、4、6、10ml，分別置25ml量瓶中，依次分別加水10ml，鉬酸銨硫酸溶液（取鉬酸銨5g，加0.5 mol/L硫酸溶液100ml）1ml，對苯二酚硫酸溶液（取對苯二酚0.5g，加0.25 mol/L硫酸溶液100ml，臨用前配製）1ml和50%醋酸鈉溶液3ml，並用水稀釋至刻度，搖勻，放置5分鍾。照分光光度法（附錄Ⅶ B），以第一瓶為空白，在720nm的波長處測定吸收度，以測得吸收度與其對應的濃度計算回歸方程。
測定法 精密量取供試品溶液4ml，置25ml量瓶中，照標准曲線制備項下自「依次分別加水10ml」起同法操作，測得吸收度，由回歸方程計算含磷（P）量。含磷（P）應為3.5%～4.1%。
磷脂醯膽鹼和磷脂醯乙醇胺 照高效液相色譜法（中國葯典2005年版二部附錄ⅤD）測定。
色譜條件與系統適應性試驗 用硅膠為填充劑（色譜柱Alltima Sillica，250mm×4.6mm×5μm），柱溫為40℃；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（85:15:0.45:0.05，v/v）為流動相A，以正己烷-異丙醇-流動相A（20:48:32，v/v）為流動相B；流速為每分鍾1ml，按下表進行梯度洗脫；檢測器為蒸發光散射檢測器（參考條件：漂移管溫度為72℃；載氣流量為每分鍾2.0ml）。
取磷脂醯乙醇胺、磷脂醯肌醇、溶血磷脂醯乙醇胺、磷脂醯膽鹼、鞘磷脂、溶血磷脂醯膽鹼對照品各適量，用三氯甲烷-甲醇（2:1）溶解製成每1ml含上述對照品分別為50μg、100μg、100μg、200μg、200μg、200μg的混合溶液，取上述溶液20μl注入液相色譜儀，各成分按上述順序依次洗脫，各成分分離度應符合規定，理論板數按磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺峰計算應不低於1500。
標准曲線的制備 稱取磷脂醯乙醇胺和磷脂醯膽鹼對照品適量，精密稱定，用三氯甲烷-甲醇（2:1）溶解，稀釋製成每1ml含磷脂醯膽鹼50、100、150、200、300、400μg，含磷脂醯乙醇胺5、10、15、20、30、40μg 的溶液作為對照溶液。精密量取上述對照溶液各20μl注入液相色譜儀中，以濃度的對數值為橫坐標，峰面積的對數值為縱坐標計算回歸方程。
供試品溶液的制備 取本品約15mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加三氯甲烷-甲醇（2:1）溶解並稀釋至刻度。
測定方法 取供試溶液20μl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，由回歸方程計算磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺的含量。含磷脂醯膽鹼應大於72.0%，含磷脂醯乙醇胺應不得過10.0%。
【類別】葯用輔料，乳化劑、增溶劑。
【貯藏】密封、避光，低溫（-15℃以下）保存。

4. 卵磷脂檢測方法有哪些

卵磷脂檢測方法多樣，不同用途的卵磷脂，有不同的檢測方法和標准。

方法一，用高效液相色譜法對水化油腳提取物中所得的卵磷脂(PC)進行了定性和定量分析，採用Lichorosorb si-60色譜柱，氯仿-甲醇-水為流動相，蒸發光散射檢測器檢測.在15min內可將卵磷脂與其它組分完全分離，用外標法進行定量，線性關系良好。卵磷脂的平均回收率為97.69%～99.23%，相對標准偏差為0.82%～0.94%。

方法二，准確吸取磷標准使用液（第一步中的試劑）0 0.1 0.15
0.2 0.25 0.30（ml) 全部加水至0.3ml，分別加消化劑0.4ml，依次加4ml
顯色劑搖勻，70度水浴10分鍾後，在分光光度計700nm處測吸光值，以測定的吸光度對磷酸含量繪制標准曲線。

方法三，取以115℃乾燥至恆重的無水磷酸氫二鈉對照品適量，精密稱取（精密記錄自己稱取的量），加水溶解，定量稀釋製成每1ml含0.04mg磷的溶液即得。（用於做標准曲線）
供試品的制備：取磷脂0.03g(加少量無水乙醇溶解），精密稱量，加25ml氯仿甲醇（5：1）萃取。

方法四，取兩支試管，一支准確吸取樣品測定溶液0.25ml，另一支加同量的氯仿甲醇溶液，分別加消化劑0.4ml，電爐上消化至無色（消化時間大約在40分鍾左右，溶液會先變清再變渾濁最後變清），冷卻後都加水0.3ml,顯色劑4ml，搖勻，70度水浴10分鍾，在分光光度計700nm處測定OD值，以測出的OD值在標准曲線上查得未知液中的磷含量。

5. 卵磷脂的提取與鑒定

卵磷脂的提取：稱取約10g蛋黃於小燒杯中，加入溫熱的95%乙醇30mL，邊加邊攪拌均勻，冷卻後過濾。如濾液仍然混濁，可重新過濾直至完全透明。將濾液置於蒸發皿內，水浴鍋中蒸干，所得干物即為卵磷脂。(二)卵磷脂的溶解性：取乾燥試管，加入少許卵磷脂，再加入5mL乙醚，用玻棒攪動使卵磷脂溶解，逐滴加入丙酮3～5mL，觀察實驗現象。

卵磷脂的鑒定：
1、三甲胺的檢驗：取乾燥試管一支，加入少量提取的卵磷脂以及2～5mL氫氧化鈉溶液，放入水浴中加熱15min，在管口放一片紅色石蕊試紙，觀察顏色有無變化，並嗅其氣味。將加熱過的溶液過濾，濾液供下面檢驗。
2、不飽和性檢驗：取干凈試管一支，加入10滴上述濾液，再加入1～2滴3%溴的四氯化碳溶液，振搖試管，觀察有何現象產生。
3、磷酸的檢驗：取干凈試管一支，加入10滴上述濾液和5～10滴95%乙醇溶液，然後再加入5~10滴鉬酸銨試劑，觀察現象；最後將試管放入熱水浴中加熱5～10min，觀察有何變化。

4、甘油的檢驗：取干凈試管一支，加入少許卵磷脂和0.2g硫酸氫鉀，用試管夾夾住並先在小火上略微加熱，使卵磷脂和硫酸氫鉀混熔，然後再集中加熱，待有水蒸氣放出時，嗅有何氣味產生。

6. 有什麼簡單的方法可以鑒別卵磷脂

面對市場上眾多品牌的卵磷脂保健品，很多消費者會感到難以選擇，如何才能買到高品質的產品成為他們十分關心的問題。

首先，要看產品的外包裝是否正規。符合標準的產品標簽必須標有保健食品標志和衛生部保健食品批准文號（即衛食健字〔××××〕第×號或衛進食健字〔××××〕第×號的字樣），否則就不是正規的保健食品。進口保健品產品標簽的說明書部分，必須有中文說明，而且要符合衛生部的規定，尤其是對產品的功效成分含量、保健作用、適宜人群和服用方法及服用量都必須有詳細說明。同時還要注意產品的有效期，尤其是在夏季，由於卵磷脂不耐熱，超過有效期或產品密封不良，其功效成分含量會大大降低，不能達到預期的保健效果。

其次，要選擇售後服務好的品牌。由於保健食品不是普通食品，其功效成分的含量較高，雖然沒有任何副作用，但是服用後的反應因人而異。如果沒有優良的售後服務，不能提供專業健康咨詢，很可能造成消費者在服用過程中錯將許多正常現象當成「病態」。

第三，看產品本身。高品質的大豆磷脂膠囊類保健品應該是棕色、澄清、透明、無任何沉澱或雜質，膠囊光滑，如果顆粒與顆粒之間有輕微粘連，略微搖晃即可分開，屬於正常現象。如果打開包裝後發現瓶內有液體滲出，或膠囊顆粒粘連在一起，不能完整地分開或有拉絲現象，那麼這種卵磷脂產品屬於劣質產品。

2. 魚油類：近年來，隨著生活水平的提高，以OMEGA-3不飽和脂肪酸為主要成分的深海魚油、深海三文魚油、海豹油等保健食品在國內藉助媒體和廣告的宣傳，逐漸為消費者所接受。但其品牌很多，價格相差也很大，質量也不同，消費者在購買和使用時，應該從下面幾點注意鑒別，避免受騙。

防止廣告宣傳誤導 幾乎所有的品牌都在宣傳其從高血壓到美容的治療作用，其實作為保健食品的OMEGA-3不飽和脂肪酸並未經臨床驗證對疾病的治療效果，也不允許對此進行宣傳。錯誤使用其作為治療葯物，會影響對疾病的及時治療。

是否在國內衛生部注冊 在國內注冊的保健食品，可以在外包裝上找到衛生部保健食品的綠色小帽子樣的標志，沒有該標志的產品，是不允許銷售的。

國家為加強保健品的管理，衛生部對保健品有嚴格的審批程序，凡是具有衛生部健字批號的卵磷脂產品才是經過國家衛生部批准，經過毒理和衛生學檢驗的保健品，在產品的包裝上有衛生部的批文號和標志。這種健字型大小卵磷脂產品與一般食字型大小產品在成分、卵磷脂產品功效成分含量上有很大的不同，一般的食字型大小產品只能起到日常補充卵磷脂營養素的作用，而只有健字型大小的卵磷脂產品才具有明確的預防和輔助治療功效，希望消費者在購買時予以注意和識別。另外，在選購卵磷脂產品時，消費者應注意觀察產品的配方，諸如產品中添加不飽和脂肪酸等輔助成分可極大地提高卵磷脂的保健功效。

標示有效成分含量是否清晰 正確的標示應該標出每粒軟膠囊的OMEGA-3不飽和脂肪酸含量，而許多的品牌卻採用了以下兩種方法：

（1）只標示每粒膠囊重1 000MG，不標示OMEGA-3不飽和脂肪酸含量，使人誤認為含OMEGA-3不飽和脂肪酸1 000MG；

（2）標示每2 000MG內含有多少OMEGA-3不飽和脂肪酸，而每個膠囊重 1000MG。使消費者誤認為每粒膠囊含那麼多的OMEGA-3不飽和脂肪酸。

這種故意誤導消費者的作法，是不符合有關規定的，是一種欺騙行為。這樣的產品質量如何，令人起疑。

消費者不妨學一點外觀鑒定的方法：

外形：好的產品為橢圓形壓丸，無漏油，膠囊結合處精細，硬度適中；

顏色：好的產品為金黃色，色度適中；

純度：好的產品對光應無雜質；

冰凍：好的產品在冰箱內冰凍1天應不會結冰。