腹瀉的病原體檢測方法

A. 兒童腹瀉需要做哪些檢查

實驗室檢查

1、大便常規檢查

大便顯微鏡檢查，注意有無膿細胞、白細胞、紅細胞與吞噬細胞，還應注意有無蟲卵、寄生蟲、真菌孢子和菌絲。有時需反復幾次才有意義，有助於腹瀉病的病因和病原學診斷。

2、大便培養對確定腹瀉病原有重要意義。1次糞便培養陽性率較低，需多做幾次，新鮮標本立即培養可提高陽性檢出率。

3、大便乳膠凝集試驗

對某些病毒性腸炎有診斷價值，如輪狀病毒、腸道腺病毒等。有較好敏感性和特異性。對空腸彎麴菌腸炎可幫助。

4、酶聯免疫吸附試驗

對輪狀病毒有高度敏感性、特異性。有助於輪狀病毒腸炎和其他病毒性腸炎診斷。

5、聚丙烯醯凝膠（PAGE）電泳試驗

此法可檢測出輪狀病毒亞群及不同電泳型，有助於輪狀病毒分類和研究。

6、糞便還原糖檢查

雙糖消化吸收不良時，糞便還原糖呈陽性，pH<6.0。還原糖檢查可用改良班氏試劑或Clinitest試紙比色。繼發性雙糖酶缺乏遠較原發性多見，原發性者以蔗糖-異麥芽糖酶缺乏最常見。

7、大便電鏡檢查

對某些病毒性腸炎有診斷價值。如輪狀病毒性腸炎，諾沃克病毒性腸炎等。

8、血白細胞計數和分類

病毒性腸炎白細胞總數一般不增高。細菌性腸炎白細胞總數可增高或不增高，半數以上的患兒有桿狀核增高，桿狀核大於10%，有助於細菌感染的診斷。

9、血培養

對細菌性痢疾、大腸桿菌和沙門菌等細菌性腸炎有診斷意義，血液細菌培養陽性者有助於診斷。

10。血生化檢查對腹瀉較重的患兒，應及時檢查血pH、二氧化碳結合力、碳酸氫根、血鈉、血鉀、血氯、二氧化碳結合力、血滲透壓，對於診斷及治療均有重要意義。

11。其他對遷延性和慢性腹瀉者，必要時作乳糖、蔗糖或萄葡糖耐量試驗，呼氣氫試驗（一種定量非侵入性測定碳水化合物吸收不良的方法，有條件可以應用），也可作纖維結腸鏡檢查。

B. 食品中致病菌的檢測方法

痢疾桿菌其致病作用主要是侵襲力和毒素。病菌黏附於腸粘膜的上皮細胞內，繼而生長繁殖並引起炎症，在內毒素的作用下使腸壁組織壞死，腸功能紊亂，以致出現毒血症。有些痢疾桿菌能產生腸毒素，導致腸炎。
致病性大腸桿菌的污染源是帶菌動物（牛、羊、豬、雞等）和病人及隱形帶菌者。主要通過攝入污染該菌的動物性食品導致發病，或者嚴重污染飲水和其他食品污染及食物鏈的交叉污染也可導致發病。
傷寒和副傷寒病人和健康帶菌者是沙門氏菌的傳染源。病菌隨糞尿排出體外，通過污染的食物、飲水、手、食具或經蠅、蟑螂等媒介污染食物，經口感染。食物或水源污染可導致暴發流行。
霍亂弧菌的傳染源是病人或健康帶菌者，隱性感染者和症狀較輕的患者呈間歇排菌，危害性比重症患者更大。病菌隨糞便及嘔吐物排出，污染飲用水、食物和環境，並通過水、手、污染的食物、食具、蠅、蟑螂等媒介而經口感染。感染人體後，能吸附於腸粘膜表面，並大量繁殖，其內毒素損害腸粘膜，外毒素引起腸液分泌過度增加，發生腹瀉，大量丟失腸液，產生嚴重脫水、酸中毒及電解質紊亂。
炭疽桿菌其致病原因是炭疽桿菌產生的毒素（致死毒素和水腫毒素），人的皮膚傷口通過直接接觸病畜的血液、分泌物、排泄物以及被污染的皮、毛、骨粉等，可引起皮膚炭疽；經口攝入病畜肉類以及被細菌污染的食物和水等，可引起腸型炭疽；吸入帶有炭疽芽孢的塵埃，可引起肺炭疽。

C. 病原微生物中細菌常見檢測方法有哪些

1、快速測試片技術法

快速測試片是指以紙片、紙膜、膠片等作為培養基載體，將特定的培養基和顯色物質附著在上面，通過微生物在上面的生長、顯色來測定食品中微生物的方法。

細菌總數檢測紙片的研製始於 20 世紀 80 年代，其主要優點是簡便、實用、經濟、操作性強。近年來以濾紙和美國某公司的 Petrifilm 為載體的測試片已開始被廣泛應用。

2、生物電化學方法

生物電化學方法是指通過電極測定微生物產生或消耗的電荷，從而提供分析信號的方法。微生物在滋生代謝過程中，培養基的電化學性質如電流、電位、電阻和電導等會發生變化，所以可以通過檢測分析這些電化學參量的變化來實現對微生物的快速測定。

常見的有：阻抗分析法、電位分析法、電流分析法等。生物電化學方法具有測量快速、直觀、操作簡單、測量設備成本低和信號的可控性等特點。

3、微菌落技術

微菌落是指細菌生長繁殖早期在固相載體上所形成的只能藉助於顯微鏡觀察的微小菌落。微菌落技術具有快速、經濟、實用的特點，其研究始於 20 世紀50年代，定量測定技術從 20 世紀 70 年代開始，國外已有報道將該法應用於水、食品中細菌總數的快速檢測。

4、氣相色譜法

氣相色譜應用到微生物的檢測中，主要是依據不同微生物的化學組成或其產生的代謝產物各異，利用上述色譜檢測可直接分析各種體液中的細菌代謝產物、細胞中的脂肪酸、蛋白質、氨基酸、多肽、多糖等，以確定病原微生物的特異性化學標志成分，協助病原診斷和檢測。

5、高效液相色譜法

利用高效液相色譜檢測可分析各種體液中的細菌代謝產物、病原微生物等，以確定病原微生物的特異性化學標志成分，協助病原診斷和檢測。

D. 腸道致病菌的分類及常用檢測方法

根據可培養細菌的數量分類在腸道菌群中，可以培養到的細菌有400餘種，依據其數量多少可以分為主要(優勢)菌群(predominant microflora)和次要菌群(sub—dominant microflora)。

①主要(優勢)菌群：指腸道菌群中數量大或種群密集度大的細菌，一般在10～10cfu/g以上，包括類桿菌屬、優桿菌屬、雙歧桿菌屬、瘤胃球菌屬和梭菌屬等專性厭氧菌，通常屬於原籍菌群。優勢菌群是對宿主發揮生理功能的菌群，在很大程度上影響著整個菌群的功能，決定著菌群對宿主的生理病理意義。

②次要菌群：數量在10～10cfu/g以下，主要為需氧菌或兼性厭氧菌，如大腸桿菌和鏈球菌等，流動性大，有潛在致病性，大部分屬於外籍菌群或過路菌群。

檢測方法：

1、采樣及稀釋

（1）按無菌操作法將檢樣25g（或25mL）放於含有225mL無菌水的三角瓶中（瓶內預置適當數量的玻璃珠）或滅菌乳缽內，經充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用無菌均質器，以8000～10000r/min的速度離心1min，做成1：10的稀釋液。

（2）用1mL滅菌吸管吸取1：10稀釋液1Ml，注入含有9mL無菌水的試管內，振搖混勻，做成1：100的稀釋液，換用1支lmL滅菌吸管，按上述操作依次作l0倍系列稀釋液。

（3）根據食品的衛生要求或對檢驗樣品污染情況的估計，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種3管。也可直接用樣品接種。

2、乳糖初發酵試驗

即通常所說的假定試驗。其目的在於檢查樣品中有無發酵乳糖產生氣體的細菌。將待檢樣品接種於乳糖膽鹽發酵管內，接種量在1mL以上者，用雙倍乳糖膽鹽發酵管。

lmL及1mL以下者，用單倍乳糖膽鹽發酵管。每一個稀釋度接種3管，置36±1℃溫箱內，培養24±2h，如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣，則可報告為大腸菌群陰性，如有產氣者，則按下列程序進行。

3、分離培養

將產氣的發酵管分別劃線接種於伊紅美藍瓊脂平板，置36±1℃溫箱內培養18～24h，然後觀察菌落形態並作革蘭氏染色、鏡檢並作復發酵試驗。

4、乳糖復發酵試驗

即通常所說的證實試驗，其目的在於證明經乳糖初發酵試驗呈陽性反應的試管內分離到的革蘭陰性無芽胞桿菌，確能發酵乳糖產生氣體。

在上述選擇性EMB培養基上，挑取可疑的大腸菌群菌落1～2個進行革蘭染色，同時接種乳糖發酵管，置36±l℃溫箱內培養24±2小時，觀察產氣情況。

凡乳搪發酵管產氣，革蘭染色為陰性反應的無芽胞桿菌，即報告為大腸菌群陽性；凡乳糖發酵管不產氣或革蘭染色為陽性，則報告為大腸菌群陰性。

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有益菌菌群的生理功能：

如果腸內有益菌菌群占優，腸內黏膜呈現粉紅色，表示腸內環境相當良好。

1、吸收水分，糞便較軟，較易排泄

在胃部分解消化的食物，經由小腸吸收營養後，成為粘稠狀物體送至大腸。然後再經過18小時將水分及礦物質吸收，就變成容易排泄的糞便。腸道內環境良好時，糞便的軟硬適中，排便會較為順利。

2、緩和的蠕動，能順利將糞便排出

藉由腸的蠕動，將糞便緩慢的推送至肛門。如果蠕動過快或太慢，都將影響糞便的構成，導致便秘或者腹瀉。而如果腸內干凈，則蠕動的速度就相當的有規律，糞便可順利排出。

3、有助維他命的合成

比菲德氏菌等好菌能維護肌膚的健康，並具有合成有助熱量產生的維他命B1、B2及B6等，以及與止血、骨骼形成有關的維他命K等之功用。健康的腸道，好菌會不斷繁殖，維他命的合成也可順利進行。

4、迅速排出有害物質

健康的腸道並非完全沒有壞菌的存在，有害物質多少會產生。當然還包括，吃進體內的食品化學添加物或是無法成為營養成分的物質。只要腸內環境良好，這些物質在開始危害身體前就被排出體外。

5、避免病原菌的侵害

比菲德氏菌等好菌可以刺激並提高身體的免疫機能，而且易引起食物中毒等病原菌因具怕酸特質，所以像是含有好菌的乳酸飲料或健康食品等，都可抑制病原菌在腸內繁殖。

腸道有益菌菌群除了以上功能之外，對人體還有營養作用，如糖尿病、高血壓、高血脂等。B族維生素和非必需氨基酸對人類的毛發具有重要的作用，當缺少這些營養元素，會導致頭發脫落或毛發發黃、發叉，容易折斷等現象。