鐵蛋白質檢測儀使用方法

⑴ 常用的蛋白質含量測定方法有哪些

①凱氏定氮法
原理：蛋白質平均含氮量為16%。當樣品與濃硫酸共熱，蛋白氮轉化為銨鹽，在強鹼性條件下將氨蒸出，用加有指示劑的硼酸吸收，最後用標准酸滴定硼酸，通過標准酸的用量即可求出蛋白質中的含氮量和蛋白質含量。
②雙縮脲法
原理：尿素在180℃下脫氨生成雙縮脲，在鹼性溶液中雙縮脲可與Cu2+形成穩定的紫紅色絡合物。蛋白質中的肽鍵實際上就是醯胺鍵，故多肽、蛋白質等都有雙縮脲（biuret）反應，產生藍色或紫色復合物。比色定蛋白質含量。
缺點：靈敏度低，樣品必須可溶，在大量糖類共存和含有脯氨酸的肽中顯色不好。其 精確度 較差 (數mg)，且會受樣品中 硫酸銨 及 Tris 的干擾，但 准確度 較高，不受蛋白質的種類影響。
③Folin酚法(Lowry)
Folin酚法是biuret 法的延伸，所用試劑由試劑甲和乙兩部分組成。試劑甲相當於雙縮脲試劑（鹼性銅試劑），試劑乙中含有磷鉬酸和磷鎢酸。
在鹼性條件下，蛋白質中的巰基和酚基等可將Cu2+還原成Cu+， Cu+能定量地與Folin－酚試劑反應生成藍色物質，600nm比色測定蛋白質含量。
靈敏度較高(約 0.1 mg)，但較麻煩，也會受 硫酸銨 及 硫醇化合物 的干擾。 步驟中各項試劑的混合，要特別注意均勻澈底，否則會有大誤差。
④紫外法
280nm光吸收法：利用Tyr在280nm在吸收進行測定。
280nm-260nm的吸收差法：若樣品液中有少量核酸共存按下式計算：
蛋白質濃度(mg/ml)=1.24E280-0.74E260 （280 260為角標）
⑤色素結合法（Bradford 法）
直接測定法：利用蛋白質與色素分子（Coomassie Brilliant Blue G-250）結合物的光吸收用分光光度法進行測定。
考馬斯亮蘭（CBG）染色法測定蛋白質含量。CBG 有點像指示劑，會在不同的酸鹼度下變色；在酸性下是茶色，在中性下為藍色。當 CBG接到蛋白質上去的時候，因為蛋白質會提供 CBG一個較為中性的環境，因此會變成藍色。當樣本中的蛋白質越多，吸到蛋白質上的CBG也多，藍色也會增強。因此，藍色的呈色強度，是與樣本中的蛋白質量成正比。
間接測定法：蛋白質與某些酸性或鹼性色素分子結合形成不溶性的鹽沉澱。用分光光度計測定未結合的色素，以每克樣品結合色素的量來表示蛋白質含量的多少。
⑥BCA法
BCA（Bicinchoninc acid procere，4,4』-二羧-2,2』-二喹啉）法與Lowry法相似，主要差別在鹼性溶液中，蛋白質使Cu2+轉變Cu+後，進一步以BCA 取代Folin試劑與Cu+結合產生深紫色，在波長562 nm有強的吸收。
它的優點在於鹼性溶液中BCA 比Folin試劑穩定，因此BCA與鹼性銅離子溶液結合的呈色反應只需一步驟即完成。靈敏度Lowry法相似。
本方法對於陰離子、非離子性及二性離子的清潔劑和尿素較具容忍度，較不受干擾，但會受還原糖 及EDTA的干擾。
⑦膠體金測定法
膠體金(colloidal gold)是氯金酸(chloroauric acid)的水溶膠，呈洋紅色，具有高電子密度，並能與多種生物大分子結合。
膠體金是一種帶負電荷的疏水膠體遇蛋白質轉變為藍色，顏色的改變與蛋白質有定量關系，可用於蛋白質的定量測定。
⑧其他方法
有些蛋白質含有特殊的 非蛋白質基團，如 過氧化物酶含有 亞鐵血紅素基團，可測 403 nm 波長的吸光來定量之。 含特殊金屬的酶 (如鎘)，則可追蹤該金屬。

⑵ 請專家幫我解答

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食物以清淡高蛋白為主。
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⑶ 科學小實驗――蛋白質檢測怎麼做

檢測蛋白質可以用最簡單的辦法就是雙縮脲試劑。具體的說就是需要用0.1克每毫升的氫氧化鈉和0.01克每毫升的硫酸銅溶液。在使用的時候需要先加氫氧化鈉1ml。然後再滴入三到四滴硫酸銅溶液。最後在不加熱的情況下會觀察到蛋白質顯現出紫顏色，由此可以證明蛋白質的存在。

⑷ 檢測鐵蛋白的方法有哪些

檢測血清FER的方法有放射免疫測定法、酶免疫測定法、免疫比濁法、化學發光免疫分析法等。
目前臨床主要採用免疫透射比濁法通過全自動生化儀檢測和化學發光免疫分析儀進行檢測。前者的檢測原理是將兔抗人鐵蛋白抗體交聯於膠乳顆粒上，與待測樣品中鐵蛋白在液相中相遇，立即形成抗原抗體復合物，並形成一定濁度，與通過同樣處理的校準品比較，即可計算出樣品中FER的含量。該方法測定范圍寬，精密度、准確度高，特異性好，是一種簡單、快速、准確的自動化分析方法。
化學發光免疫分析法（以貝克曼公司ACESS全自動化學發光免疫分析儀為例）原理是採用雙抗體夾心法檢測待測樣品中的鐵蛋白，包被介質為磁性微粒子，以增大與抗原的接觸面積，提高敏感性，標記的酶為ALP，底物為貝克曼研製的AMPPD，經ALP水解後可以長時間持續、穩定發光，除了有免疫透射比濁法的特異性高、精密度高、測定范圍寬以外，敏感性也大大提高。

⑸ 乳鐵蛋白的檢測方法

原理：混有乳鐵蛋白(LF) 抗原的瓊脂糖傾入平板，凝凍後打一些小孔，接入LF樣品。隨著抗原呈放射形擴散， 在以小孔為中心的環狀區域形成抗原�抗體反應沉澱帶， 沉澱帶在RID染色液的作用下被染色，環的直徑與抗體(LF)的濃度成正比。通過標准曲線，可以測出樣品中的(LF) 濃度。
操作步驟：將預塗過的玻璃板置於水平桌面上，在瓊脂糖緩沖液中 加入150ml(抗血清，仔細混合後將溶液倒在玻璃板中心。表面張力可以阻止溶液溢出，必要時用試管上緣幫助溶液分散以確保溶液均勻分散到玻璃板的各邊。 將凝膠在室溫下固化15min，然 後置於恆濕器中在冰箱中保存1h 。將打孔器與抽真空設備連接，並利用帶模板的隔板架在凝膠上 打16個小孔。用注射器小心地將12.5ml樣品注入玻璃板中，將凝膠置於恆濕器中，室溫下在水平桌面上放置48h後清洗凝膠。選擇正確角度，2次精確測量環的直徑，以此來測定LF濃度。
結果計算：每毫升LF的濃度(×10-6 ) =
式中：A為LF標准溶液(mg/mL) ；
W為質量(mg) 。

⑹ 常用生化檢測項目分析方法舉例及參數設置

常用生化檢測項目分析方法舉例及參數設置

常用生化檢測項目有哪些你知道嗎?你對常用生化檢測項目了解嗎?下面是我為大家帶來的關於常用生化檢測項目分析方法舉例及參數設置的知識，歡迎閱讀。

一、常用生化檢測項目

1.終點法檢測常用的有總膽紅素(氧化法或重氮法)、結合膽紅素(氧化法或重氮法)、血清總蛋白(雙縮脲法)、血清白蛋白(溴甲酚氯法)、總膽汁酸(酶法)、葡萄糖(葡萄糖氧化酶法)、尿酸(尿酸酶法)、總膽固醇(膽固醇氧化酶法)、甘油三酯(磷酸甘油氧化酶酶法)、高密度脂蛋白膽固醇(直接測定法)、鈣(偶氮砷Ⅲ法)、磷(紫外法)、鎂(二甲苯胺藍法)等。以上項目中，除鈣、磷和鎂基本上還使用單試劑方式分析因而採用一點終點法外，其它測定項目都可使用雙試劑故能選用兩點終點法，包括總蛋白、白蛋白測定均已有雙試劑可用。

2.固定時間法苦味酸法測定肌酐採用此法。

3.連續監測法對於酶活性測定一般應選用連續監測法，如丙氨酸氨基轉移酶、天冬氨酸氨基轉移酶、乳酸脫氫酶、鹼性磷酸酶、γ谷氨氨醯基轉移酶、澱粉酶和肌酸激酶等。一些代謝物酶法測定的項目如己糖激酶法測定葡萄糖、脲酶偶聯法測定尿素等，也可用連續監測法。

4.透射比濁法透射比濁法可用於測定產生濁度反應的項目，多數屬免疫比濁法，載脂蛋白、免疫球蛋白、補體、抗"O"、類風濕因子，以及血清中的其他蛋白質如前白蛋白、結合珠蛋白、轉鐵蛋白等均可用此法。

二、分析參數設置

分析儀的一些通用操作步驟如取樣、沖洗、吸光度檢測、數據處理等，其程序均已經固化在存儲器里，用戶不能修改。各種測定項目的分析參數(analysisparamete)大部分也已設計好，存於磁碟中，供用戶使用;目前大多數生化分析儀為開放式，用戶可以更改這些參數。生化分析儀一般另外留一些檢測項目的空白通道，由用戶自己設定分析參數。因此必須理解各參數的確切意義。

一、分析參數介紹

(一)必選分析參數

這類參數是分析儀檢測的前提條件，沒有這些參數無法進行檢測。

1.試驗名稱 試驗名稱(test code)是指測定項目的標示符，常以項目的英文縮寫來表示。

2.方法類型(也稱反應模式) 方法類型(assay)有終點法、兩點法、連續監測法等，根據被檢物質的檢測方法原理選擇其中一種反應類型。

3.反應溫度 一般有30℃、37℃可供選擇，通常固定為37℃。

4.主波長 主波長(primary wavelength)是指定一個與被測物質反應產物的光吸收有關的波長。

5.次波長 次波長(secondary wavelength)是在使用雙波長時，要指定一個與主波長、干擾物質光吸收有關的波長。

6.反應方向 反應方向(response direction)有正向反應和負向反應兩種，吸光度增加為正向反應，吸光度下降為負向反應。

7.樣品量 樣品量(sampling volum)一般是2μl～35μl，以0.1μl步進，個別分析儀最少能達到1.6μl。可設置常量、減量和增量。

8. 第一試劑量 第一試劑量(first regengt volum)一般是20～300μl，以1μl步進。

9. 第二試劑量 第二試劑量(second regengt volum)一般也是20～300μl，以1μl步進。

10.總反應容量 總反應容量(total reacting volum)在不同的分析儀有一個不同的規定范圍，一般是180～350μl，個別儀器能減少至120μl。總反應容量太少無法進行吸光度測定。

11.孵育時間 孵育時間(incubate time)在終點法是樣品與試劑混勻開始至反應終點為止的時間，在兩點法是第一個吸光度選擇點開始至第二個吸光度選擇點為止的時間。

12.延遲時間 延遲時間(delay time)在連續監測法中樣品與反應試劑(第二試劑)混勻開始至連續監測期第一個吸光度選擇點之間的時間。

13.連續監測時間 連續監測時間(continuous monitoring time)在延遲時間之後即開始，一般為60～120s，不少於4個吸光度檢測點(3個吸光度變化值)。

14.校準液個數及濃度 校準曲線線性好並通過坐標零點的，可採用一個校準液(calibrator);線性好但不通過坐標零點，應使用兩個校準液;對於校準曲線呈非線性者，必須使用兩個以上校準液。每一個校準液都要有一個合適的濃度。

15.校準K值或理論K值 通過校準得到的K值為校準K值(calibrate coefficient)或由計算得出的K值為理論K值。

16.線性范圍 即方法的線性范圍(linearity range)，超過此范圍應增加樣品量或減少樣品量重測。與試劑/樣品比值有關。

17.小數點位數 檢測結果的小數點位數(decimal point digit)。

(二)備選分析參數

這類分析參數與檢測結果的准確性有關，一般來說不設置這類分析參數，分析儀也能檢測出結果，但若樣品中待測物濃度太高等，檢測結果可能不準確。

1.樣品預稀釋 設置樣品量、稀釋劑量和稀釋後樣品量三個數值，便可在分析前自動對樣品進行高倍稀釋。

2.底物耗盡值 底物耗盡值(substrate exhaust limit)在負反應的酶活性測定中，可設置此參數，以規定一個吸光度下降限。若低於此限時底物已太少，不足以維持零級反應而導致檢測結果不準確。

3.前區檢查 免疫比濁法中應用，以判斷是否有抗原過剩。將終點法最後兩個吸光度值的差別(ΔA)設置一個限值，如果後一點的吸光度比前一點低，表示已有抗原過剩，應稀釋樣品後重測。

4.試劑空白吸光度范圍 超過此設定范圍表示試劑已變質，應更換合格試劑。

5.試劑空白速率 連續監測法中使用，是試劑本身在監測過程中沒有化學反應時的變化速率。

6.方法學補償系數 用於校準不同分析方法間測定結果的一致性，有斜率和截距兩個參數。

7.參考值范圍 對超過此范圍的測定結果，儀器會列印出提示。

(三)某些參數的特殊意義

1.最小樣品量 最小樣品量是指分析儀進樣針能在規定的誤差范圍內吸取的最小樣品量。一般分析儀的最小樣品量是2μl，目前也有小至1.6μl的。在樣品含高濃度代謝產物或高活性酶濃度的情況下往往需採用分析儀的最小樣品量作為減量參數，從而使分析儀檢測范圍(與線性范圍不同)的上限得以擴大。

2.最大試劑量 方法靈敏度很高而線性上限低的檢測項目，如血清白蛋白的溴甲酚氯法測定，以往手工法操作時樣品量10μl，試劑量4ml，這樣試劑量/樣品量比例(R/S)為200，線性上限則為60g/L。此法移植到分析儀上後，R/S卻很難達到200，致使線性上限變低。因此對這類檢測項目最大試劑量非常重要。

3.彈性速率 在酶活性測定中，當酶活性太高，在連續監測期中已不呈線性反應時，有些儀器具有彈性速率(flexrate)功能，能自動選擇反應曲線上連續監測期中仍呈線性的吸光度數據計算結果，使酶活性測定的線性范圍得以擴大。如AST可從1000U/L擴展至4000U/L，從而減少稀釋及重測次數、降低成本。

4.試劑空白速率 當樣品中存在膽紅素時，膽紅素對鹼性苦味酸速率法或兩點法測定肌酐有負干擾。因為膽紅素在肌酐檢測的波長505nm有較高光吸收，而且膽紅素在鹼性環境中可被氧化轉變，因而在肌酐反應過程中膽紅素的光吸收呈下降趨勢。若在加入第一試劑後一段時間內設置試劑空白速率，因為此段中苦味酸尚未與肌酐反應，而膽紅素在第一試劑的鹼性環境中已同樣被氧化轉變，因而以第二試劑加入後的速率變化，減去試劑空白速率變化，便可消除膽紅素的負干擾，見圖7-8。

二、單波長和雙波長方式

(一)概念

採用一個波長檢測物質的光吸收強度的`方式稱為單波長(mono-wavelength)方式。當反應液中含有一種組分，或在混合反應液中待測組分的吸收峰與其它共存物質的吸收波長無重疊時，可以選用。在吸光度檢測中，使用一個主波長和一個次波長的稱雙波長方式。當反應液中存在干擾物的較大吸收、從而影響測定結果的准確性時，採用雙波長方式更好。

(二)雙波長的作用

雙波長(di-wavelength)測定優點是①消除噪音干擾;②減少雜散光影響;③減少樣品本身光吸收的干擾。從光源，到比色杯、單色器、檢測器的整個光路系統中，均存在著隨時間發生變化的不穩定的檢測信號，即噪音，而雙波長檢測是同時進行的，兩種波長檢測產生的噪音基本上相同，因而能消除噪音干擾。當樣品中存在非化學反應的干擾物如甘油三酯、血紅蛋白、膽紅素等時，會產生非特異性的光吸收，而干擾測定結果的准確性。採用雙波長方式測定可以部分消除這類干擾，提高檢測的准確性。

(三)次波長的確定方法

當被測物的主波長確定之後，再選擇次波長。如根據甘油三酯等干擾物吸收光譜特徵，選擇次波長，使干擾物在主、次波長處有盡可能相同的光吸收值，而被測物在主、次波長處的光吸收值應有較大的差異。一般來說，次波長應大於主波長100nm。以主波長與次波長吸光度差來計算結果。

(四)雙波長的具體應用

對於某些反應速度快且無法設置為兩點終點法的分析項目，尤其是單試劑分析中，可以利用雙波長的方式來部分消除樣品本身的光吸收干擾。目前用單試劑法測定的項目應用雙波長的為血清總蛋白(雙縮脲法)主波長500nm，次波長576nm;血清白蛋白(溴甲酚氯法)主、次波長分別為600和700nm;鈣(偶氮砷Ⅲ法)主、次波長分別為 660、770nm;磷(紫外比色法)主、次波長為340、405nm，鎂(二甲苯胺藍法)主、次波長為505和 600nm。

三、單試劑和雙試劑方式

反應過程中只加一次試劑稱單試劑方式，加兩次試劑便為雙試劑方式。目前的生化分析儀大多可用雙試劑方式分析，其優點是：①可提高試劑的穩定性，多數雙試劑混合成單一工作試劑時，其穩定時間縮短;②能設置兩點終點法，來消除來自樣品本身的光吸收干擾;③在某些項目檢測時能消除非特異性化學反應的干擾。如血清ALT測定，血清中的內源性丙酮酸及其它酮酸也可與試劑中的指示酶(乳酸脫氫酶)起反應，使結果偏高。若先加入缺乏α-酮戊二酸的第一試劑，使其它酮酸與指示酶反應之後再加入含有α-酮戊二酸的第二試劑，啟動真正的ALT酶促反應生成丙酮酸，而丙酮酸與乳酸脫氫酶的反應消耗的NAD+能真正反映ALT的活性，從而消除以上副反應的影響。

四、測定過程的自動監測

各種自動生化分析儀或多或少都具有對測定過程進行各種監測的功能，以便在沒有人"監督"化學反應的情況下提高檢測的准確性。高檔分析儀的監測功能更強。

1.試劑空白監測 每種試劑都有一定的空白吸光度范圍，試劑空白吸光度的改變往往提示著該試劑的變質：如利用Trinder反應為原理的檢測試劑會因酚被氧化為醌而變為紅色;鹼性磷酸酶、γ-谷氨醯轉移酶、澱粉酶等檢測試劑會因基質分解出硝基酚或硝基苯胺而變黃;有些試劑久置後變渾濁。這些情況均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基轉移酶、天冬氨酸氨基轉移酶等負反應檢測項目，其試劑在放置過程中空白吸光度會因NADH自行氧化為NAD+而下降等。

試劑空白的測定方法有兩種：①每瓶試劑在使用前通過對試劑空白校準來確定試劑空白吸光度，這種方式適用於先取樣品後加試劑的分析儀。②每個樣品測定前均檢測試劑空白吸光度，適用於先加試劑後取樣品的分析儀。

2.試劑空白變化速率監測 一些酶試劑在反應溫度下不穩定，其空白吸光度可隨著時間逐漸發生變化，這種變化的主要原因與工具酶或輔酶的純度有關，且因試劑的組成和生產廠家的不同而不同。這種變化會影響測定結果的准確性，一般使結果偏高。如果設置此項監測，分析儀在結果計算時會自動減去試劑空白變化速率。在以監測NAD(P)H減少為指示反應的酶活性測定中，空白速率可監測並消除由NADH自身氧化所造成的吸光度下降;在色素原為底物的酶活性測定中，空白速率可監測並消除底物自身分解造成的吸光度升高。有關空白速率監測在膽紅素對鹼性苦味酸速率法測定肌酐負干擾消除中的作用，已如前述。

3.樣品信息監測 由於樣品的溶血、脂濁、黃疸會對測定結果產生非化學反應的干擾。根據溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性，用雙波長或多波長檢測其性質和程度，一般是測定樣品在600nm/570nm、700nm/660nm和505nm/480nm吸光度比值的大小來分別判斷樣品溶血、脂濁和黃疸程度。然後在結果計算時自動減去這部分干擾，這將有利於提高分析結果的可靠性。

4.結果可靠性監測

(1)終點監測：終點法測定要判斷所選的測光點是否到達終點或平衡點。一些分析儀在所選終點後再選一個測光點，比較這兩點吸光度的差異來判斷反應是否到達終點。

(2)線性期監測：連續監測法選擇時間-吸光度反應曲線上的線性期來計算酶活性或被測物濃度，因此儀器要確定此連續監測期是否呈線性。其監測方法為①將連續監測到的各吸光度值進行線性回歸，計算出各點的方差，根據方差值的大小來判斷是否呈線性;②取連續監測期開始若干點的變化速率與連續監測期最後若干點的變化速率進行比較，來判斷是否為線性期。

5.底物消耗的監測 在連續監測法測定酶活性時，如果在監測期內吸光度上升或下降超過其底物耗盡值，則說明該樣品酶活性非常高，底物將被耗盡，監測期的吸光度將偏離線性，使測定結果不可靠。此時不列印結果或列印結果同時也列印出底物耗盡提示，該樣品應稀釋一定的倍數重新測定。此監測對於採用負反應分析酶活性的方法甚為重要。見圖7-9

6.方法線性范圍監測 每種待測物分析都有一個可測定的濃度或活性范圍，樣品結果若超過此范圍，分析儀將顯示測定結果超過線性范圍的提示，多數分析儀會自動將樣品減量或增量重新測定。

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⑺ 國家標准檢測蛋白質含量測定方法

蛋白質含量測定方法就是檢測N元素的含量，像三聚氰胺的問題，就是通過增加N的含量使「蛋白質」含量提高的。

國家標准檢測蛋白質含量的方法叫做凱氏定氮法，食物中的蛋白質在催化加熱條件下分解，導致氨和硫酸結合產生硫酸銨。 鹼蒸餾採用無硫，硼酸吸收，用硫酸或鹽酸標准滴定溶液滴定，根據酸耗計算氮含量，再乘以轉化系數，即蛋白質含量。

具體操作步驟如下：

1.樣品處理

精確稱量0.2-2.0g固體樣品或2-5g半固體樣品或吸收10-20ml液體樣品（約30-40mg氮當量）。將其轉移至乾燥的100毫升或500毫升氮氣固定瓶中，加入0.2克硫酸銅，6克硫酸鉀和20毫升硫酸，輕輕搖動，在瓶口放置一個小漏斗，將瓶子傾斜石棉網上有45度角，有小孔。

加熱小火後，內容物碳化，泡沫完全停止，加強火力，保持瓶內液體稍微沸騰，直至液體呈藍綠色澄清透明，然後繼續加熱0.5小時。取出並冷卻，小心加入20毫升水，冷卻，移入100毫升容量瓶中，用少量水洗凈氮氣瓶，洗凈液放入容量瓶中，然後用水沖洗至刻度，混勻備用。

取相同量的硫酸銅，硫酸鉀和濃硫酸作為試劑進行空白試驗。然而，這種方法很危險，很難在實驗室中證明。大多數實驗室都有一個消化器，可以一次處理16個以上的樣品和一個可以自行設定溫度的呼吸機。它更安全，更可操作。

(7)鐵蛋白質檢測儀使用方法擴展閱讀

除了凱氏定氮法以外，標準的測量方法還有：

• 分光光度法

食品中的蛋白質在催化加熱條件下被分解，分解產生的氨與硫酸結合生成硫酸銨，在pH4.8的乙酸鈉-乙酸緩沖溶液中與乙醯丙酮和甲醛反應生成黃色的3,5-二乙醯-2,6-二甲基-1,4-二氫化吡啶化合物。在波長400nm 下測定吸光度值，與標准系列比較定量,結果乘以換算系數，即為蛋白質含量。

• 燃燒法

樣品在900~1200℃下燃燒。在燃燒過程中，產生混合氣體。 諸如碳，硫和鹽的干擾氣體被吸收管吸收，氮氧化物被還原成氮。 形成的氮氣流由熱導檢測器（TCD）檢測。

⑻ 鐵的測定方法有哪些

1）亞鐵嗪比色法原理：血清鐵和運鐵蛋白結合成復合物，在酸性介質中鐵從復合物中解離出來，再被還原劑還原成二價鐵，並與亞鐵嗪生成紫紅色化合物，在波長562nm處有一吸收峰，與同樣處理的標准液比較，即可求得血清鐵的含量。

2）雙聯吡啶比色法：在酸性條件下使鐵從與蛋白質結合狀態中游離出來。用鹽酸羥胺作還原劑使血清中三價鐵還原成二價鐵，後者與雙聯吡啶顯色劑反應生成紅色螫合物，在520nm處比色定量。本法簡便快速，但靈敏度差，干擾因素較多，尤以鐵質污染最為嚴重。溶血也會影響結果。

3）菲洛嗪比色法：三氯醋酸-鹽酸混合液使血清中的鐵從運鐵蛋白中釋放並使蛋白沉澱醫學教|育網|收集整理。釋放出來的三價鐵可用硫代乙醇酸還原成二價鐵，後者和菲洛嗪結合成紫紅色化合物，吸收峰為562nm。

4）血清總鐵結合力（TIBC）：在血清樣品中加足量的鐵標准液使運鐵鐵蛋白被鐵飽和。過量的鐵用MgCO3除出，離心取上清液，按測血清鐵的方法求出鐵的含量，即為TIBC.

⑼ 血紅蛋白儀怎麼用

血紅蛋白的測定
[實驗目的]
掌握用直接測定法和比色法測定動物的血紅蛋白的含量。
[實驗原理]
血紅蛋白的顏色常與氧的結合量多少有關。但當用一定的氧化劑將其氧化時，可使其轉變為穩定、棕色的高鐵血紅蛋白，而且顏色與血紅蛋白（或高鐵血紅蛋白）的濃度成正比。可與標准色進行對比，求出血紅蛋白的濃度，即每升血液中含血紅蛋白克數（g·L-1）。
血紅蛋白被高鐵氰化鉀氧化為高鐵血紅蛋白，後者再與氰離子結合形成穩定的氰化高鐵血紅蛋白（hemoglobin cyanide,HiCN）。HiCN在波長540 nm和液層厚度1cm的條件下具有一定毫摩爾消光系數。可用經校準的高精度分光光度計進行直接定量測定；或用HiCN標准液進行比色法測定，根據標本的吸光度即可求出血紅蛋白濃度。
[實驗對象]
動物種類不限。
[實驗葯品]
HiCN轉化液（Van Kampen-Zijlstra液，文齊氏液※，標准商品）或1%HCl、HiCN標准液（200 g·L-1，標准商品）、蒸鎦水、95%酒精、乙醚、75%酒精.
[儀器與器械]
血紅蛋白計（或分光光度計）或沙里氏血紅蛋白計、小試管、刺血針或注射器，微量采血管，干棉球。
[實驗方法與步驟]
1.使用血紅蛋白計直接定量測定
（1）XK-2血紅蛋白儀板面結構如圖 (6.2-1)：

（2）儀器的標定
①板面後的電源開關置於斷。儀器的底部的支撐架打開。
②打開電源開關，選擇鍵處於測試擋。
③按一下進樣鍵，將蒸溜水吸入，預熱30 min
④預熱後將文齊試劑吸入，仔細調「調零旋鈕」使顯示屏上的數字顯示為零。
⑤校正：吸入標准液(儀器配帶有)後，緩緩旋轉校正旋鈕使顯示屏上數字顯示為已知的標准液的數值。定標即結束。以後調零和校正旋鈕均不能動。
（3）在小試管中事先加入HiCN轉化液(文齊氏液)5 ml。
（4）取血：可吸取從動物的指（尾）端流出的第二滴血，也可取靜脈血和心臟血。用拇指和食指輕輕捏扁采血管的乳膠頭，將采血管的一端水平接觸血滴（若是抗凝血，須注意搖勻後再吸取），輕輕緩慢地松開拇指，利用虹吸現象使血液進入微量采血管至20 μl（第2個刻度）。用棉球擦去微量采血管尖端外周的血液。
（5）血紅蛋白轉化為氰化高鐵血紅蛋白：將微量采血管插入小試管HiCN轉化液中，置血液於管底，再吸上清液2～3次，洗盡采血管內的殘存的血液。用玻棒輕輕攪動管內血液，使之與HiCN轉化液混勻。試管須靜止5 min。
(6)將混合後的血液吸入血紅蛋白儀，顯示屏上的數字即為測定值，需穩定後方可讀數(g·L-1)。
2.使用HiCN標准液比色法測定
（1）標准曲線繪制和K值計算：將標准HiCN液按梯度50 g·L-1、100 g·L-1、150 g·L-1、200 g·L-1進行稀釋後（以此代表標準的血紅蛋白濃度梯度），在波長540 nm、光徑1.0cm條件下，分別測定各稀釋液的吸光度(例如分別測得0.13、0.27、0.405、0.54)，以標准品血紅蛋白含量為橫坐標、吸光度為縱坐標，繪制標准曲線。或求出換算常數K。

（2）以上述同樣的方法取血，並使血紅蛋白轉化為氰化高鐵血紅蛋白。然後以轉化液作空白，測定標本吸光度A。
（3）通過標准曲線查出待測樣本的血紅蛋白濃度或用K值來計算血紅蛋白濃度，即
Hb（g·L-1）=K×A (6.2-2)
3.使用沙里氏血紅蛋白計測定
沙里氏比色法是用HCl使血紅蛋白酸化形成棕色的高鐵血紅蛋白，然後和標准比色板進行比色。
（1）沙里血紅蛋白計 主要具有標准褐色玻璃比色箱和1隻方形刻度測定管組成。比色管兩側通常有兩行刻度；一側為血紅蛋白量的絕對值，以g·dl-1(每100 ml血液中所含血紅蛋白的克數)表示，從2～22 g；另一側為血紅蛋白相對值，以%（即相當於正常平均值的百分數）來表示，從10%～160%。為避免所使用的平均值不一致，因此一般採用絕對值來表示。
（2）具體測定方法如下：
①用滴管加5～6滴，0.1mol·L-1 HCl到刻度管內,(約加到管下方刻度」2」或多或10%處)。
②用微量采血管吸血至20 μl(方法同上述)，仔細揩去吸管外的血液。
③將吸血管中的血液輕輕吹到比色管的底部，再吸上清液洗吸管3次。操作時勿產生氣泡,以免影響比色。用細玻棒輕輕攪動，使血液與鹽酸充分混合，靜置10 min，使管內的鹽酸和血紅蛋白完全作用，形成棕色的高鐵血紅蛋白。
④把比色管插入標准比色箱兩色柱中央的空格中。
⑤使無刻度的兩面位於空格的前後方向，便於透光和比色。用滴管向比色管內逐滴加入蒸餾水，並不斷攪勻，邊滴，邊觀察、邊對著自然光進行比色，直到溶液的顏色與標准比色板的顏色一致為止。
⑥讀出管內液體面所在的克數，即是每100 ml血中所含的血紅蛋白的克數。比色前，應將玻棒抽出來，其上面的液體應瀝干凈，讀數應以溶液凹面最低處相一致的刻度為准。換算成每升血液中含血紅蛋白克數（g·L-1）。
[注意事項]
1.取血前要做好充分的消毒。
2.血液要准確吸取20 μl，若有氣泡或血液被吸入采血管的乳膠頭中都應將吸管洗滌干凈，重新吸血。洗滌方法是：先用清水將血跡洗去，然後再依次吸取蒸餾水、95%酒精、乙醚洗滌采血管1～2次，使采血管內干凈、乾燥。作為學生練習，微量采血管可反復使用。
3.使用血紅蛋白儀測定時，吸樣管應插入試管底部，避免吸入氣泡，否則會影響測試結果。儀器連續使用時，每隔4小時要觀察一次零點，即吸入文齊試劑，用「調零旋鈕」使儀器恢復到零點。儀器用完後，關機前要用清洗液清洗。否則會影響零點的調整。
[實驗結果]
報告該實驗動物的血紅蛋白濃度。並將全班的結果加以統計,用平均值±標准差表示。
[思考題]
血紅蛋白的含量與年齡的關系？
影響血紅蛋白含量的主要因素？
[附]：
※1.HiCN轉化液：即文齊氏液，有標准商品出售。也可配製： 高鐵氰化鉀(K3Fe（CN）6)200 mg，氰化鉀（KCN）50 mg，無水磷酸二氫鉀（KH2PO4）140 mg，Triton X-100 1.0 ml，蒸餾水加至1000 ml。過濾後為淡黃色透明液體，pH 7.0～7.4，置有色瓶中加蓋、冷暗處保存。如發現試劑變綠、變渾濁則不能使用。
2.用分光光度計直接測定血紅蛋白
（1）取血、血紅蛋白轉化和比色同前述1、2的方法，得到標本的吸光度A。
（2）根據標本吸光度A直接計算出血紅蛋白濃度：

式中 A：為波長540nm處標本吸光度。
44：為HiCN在波長540nm，光徑1.0cm條件下的毫摩爾消光系數（L· mmol-1· cm-1）。
64485（mg）：為Hb的毫克分子量，即1 mmol·L-1 Hb溶液中的Hb毫克數。
1000：為將mg轉變為g。
251：為血液稀釋倍數。
因是通過分光光度計比色直接計算出血紅蛋白濃度，因此分光光度計的波長和光程必須准確、靈敏度要高、線性好、無雜光，否則會影響結果的准確性。故儀器的校正在測定中十分重要。
上述介紹的幾種方法中，以分光光度計直接測定和比色法測定血紅蛋白較為精確，但對分光光度計的精密程度要求較高，分光光度計校正起來較為麻煩。沙里氏血紅蛋白計測定操作簡便適於基層單位，但准確性稍差。血紅蛋白計操作較為簡便，因有標準的商品試劑出售，因此也比較精確，目前普遍被醫療單位使用。

⑽ 測定蛋白質分子量的常用方法

蛋白定量的測試方法有很多種，其中較為常見的有五種，分別是Bradford法、Bradford斑點試驗、Coomassie 斑點試驗、紫外分光度檢測法及BCA法這五種。

在生化實驗中，對樣品中的蛋白質進行准確可靠的定量分析，是經常進行的一項非常重要的工作。蛋白質是一種十分重要的生物大分子，它的種類很多，結構不均一，分子量又相差很大，功能各異，這樣就給建立一個理想而又通用的蛋白質定量分析的方法帶來了許多具體的因難。

(10)鐵蛋白質檢測儀使用方法擴展閱讀

蛋白定量分析也就涉及到生產科研的多個領域及行業，也是生物學科、食品檢驗及摻假摻偽、臨床檢驗、診斷疾病和質量檢驗中最常見的方法。

蛋白定量是生物學實驗不可缺少的一部分。為驗證細胞裂解是否成功，或為了將多個樣品進行平行實驗比較或標准化保存，需對細胞裂解液進行蛋白定量。

為了判定蛋白的產量，需對純化好的蛋白進行定量。為了將純化好的蛋白用生物素或者報告酶進行標記，同樣需首先對蛋白樣品進行定量，以保證標記反應在適當的化學濃度下進行。