㈠ 蛋白質及氨基酸的測定有哪些方法求大神幫助
樓主你好： 測定蛋白質最基本的方法是定氮法，即先測定樣品中的總氮量，再由總氮量計算出樣品中蛋白質的含量。蛋白質含量測定最常用的方法是凱氏定氮法，它是測定總有機氮的最准確和操作較簡便的方法之一，在國內外應用普遍。此外，雙縮脈法、染料結合法、酚試劑法等也常用於蛋白質含量測定，由於方法簡便快速，故多用於生產單位質量控制分析。 蛋白質及氨基酸的測定 蛋白質是生命的物質基礎，是構成生物體細胞組織的重要成分，一切有生命的活體都含有不同類型的蛋白質。人體內的酸鹼平衡、水平衡的維持；遺傳信息的傳遞；物質的代謝及轉運都與蛋白質有關。人及動物只能從食品得到蛋白質及其分解產物，來構成自身的蛋白質，故蛋白質是人體重要的營養物質，也是食品中重要的營養指標。 蛋白質是復雜的含氮有機化合物，分子量很大，它們由20種氨基酸通過醯胺鍵以一定的方式結合起來，並具有一定的空間結構。不同的蛋白質其氨基酸構成比例及方式不同，故各種不同的蛋白質其含氮量也不同。蛋白質可以被酶、酸或鹼水解，最終產物為氨基酸。氨基酸是構成蛋白質的最基本物質，在構成蛋白質的氨基酸中，亮氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、色氨酸和纈氨酸等8種氨基酸在人體中不能合成，必須依靠食品供給，故被稱為必需氨基酸，它們對人體有著極其重要的生理功能，常會因其在體內缺乏而導致患病，或通過補充而增強了新陳代謝作用。所以食品及其原料中蛋白質和氨基酸的分離、鑒定和定量具有極其重要的意義。 蛋白質的測定 測定蛋白質最基本的方法是定氮法，即先測定樣品中的總氮量，再由總氮量計算出樣品中蛋白質的含量。蛋白質含量測定最常用的方法是凱氏定氮法，它是測定總有機氮的最准確和操作較簡便的方法之一，在國內外應用普遍。此外，雙縮脈法、染料結合法、酚試劑法等也常用於蛋白質含量測定，由於方法簡便快速，故多用於生產單位質量控制分析。 微量凱氏定氮法 本法適用於各類食品中蛋白質的測定。 1．原理 食品與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，分解的氨與硫酸結合生成硫酸胺。然後鹼化蒸餾使氨游離，用過量硼酸吸收後再以硫酸或鹽酸標准溶液滴定，根據酸的消耗量乘以換算系數，即為蛋白質含量。反應過程分為三個階段，用反應式表示如下。 ①消化 2NH2(CH2)2COOH 4-13H2S04一(NH。)2S04+6C02+12S0=+16H20 (NH4)2S04+2Na()H一2NH3十+2H20+。Na2S04 2NH3+4H3803—，(NH4)2 B207+5H20 ③滴定 (NH4)2 B2 07+2HCl+5H20—NH4C1+4H3803 2．儀器 ①消化爐。 ②凱氏定氮蒸餾裝置。 3．試劑 所用試劑均用不含氨的蒸餾水配製。試劑均為分析純。 ①CuS04。 ②K2SO。 ③濃H2SO。 ④2％H。BO。溶液。 ⑤混合指示劑：1份O．1％甲基紅乙醇溶液與5份O．1％溴甲酚綠乙醇溶液臨用時混合。也可用2份O．1％甲基紅乙醇溶液與1份0．1％次甲基藍乙醇溶液臨用時混合。 ⑥飽和氫氧化鈉：500 g氫氧化鈉加入500 mL水中，攪拌溶解，冷卻後放置數日，澄清後使用。 ⑦0．01 toolI．一』或0．05 toolL叫HCl標准溶液(需用無水碳酸鈉標定後使用)。 4．操作步驟 ①樣品消化：精密稱取O．2～2．0 g固體樣品或2～5 g半固體樣品或吸取液體樣品5～20mI。，放人500 mI。乾燥凱氏燒瓶中，加人O．2 g硫酸銅、3 g硫酸鉀及20 mL濃HzSOa，於凱氏瓶口放一小漏斗，並將其以45。角斜支於有小孔的石棉網上。（更多詳細咨詢請參考國家標准物質網 www.rmhot.com ）用電爐以小火加熱，待內容物全部碳化，泡沫停止產生後，加大火力，保持瓶內液體微沸，至液體變藍綠色透明後再繼續加熱微沸30 min。冷卻，小心加入20 mL水，再放冷至室溫，移人100 mL容量瓶中，並用少量水洗燒瓶洗液並人容量瓶，在加水至刻度，混勻備用。除不加樣品外，取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸，按同一方法做試劑空白消化。 ②水蒸氣發生瓶內裝水至約2／3處，加甲基紅指示液數滴及數毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入數粒玻璃珠以防暴沸，加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水。 ③向接收瓶內加入10 mL 2％硼酸溶液及混合指示液l滴，並使冷凝管的下端插入液面下，吸取lO mI。樣品消化稀釋液由小玻璃杯流人反應室，並以10 mL水洗滌小燒杯使之流人反應室內，塞緊小玻璃杯的棒狀玻璃塞。將3～10 mL飽和氫氧化鈉溶液倒人小玻璃杯中，提起玻璃塞使其緩緩流入反應室，立即將玻璃塞蓋緊，並加水於小玻璃杯中以防漏氣。加緊螺旋夾，開始蒸餾。蒸汽通人反應室使氨通過冷凝管而進入接收瓶內，蒸餾2～5 min，移動接收瓶，使冷凝管下端離開液面，然後用少量中性水沖洗冷疑管下端外部，再蒸餾1 min取下接收瓶，以0．01 molI．叫或O．05 molL1HCl標准溶液滴定至灰色或藍紫色為終點。同時吸取10 mI_，試劑空白消化液按③操作。 5．計算 6。說明 ①干樣用稱量紙稱重連紙一同消化，空白管同樣放稱量紙消化。 ②含糖量高和油脂高的樣品消化時容易溢出，加熱要緩慢。 ③氨是否蒸餾完全，可用pH試紙測試餾出液是否為鹼性來判斷。 ④實驗前必須仔細檢查蒸餾裝置的各個連接處，保證不漏氣。所用橡皮管、塞子須浸在氫氧化鈉(10％)中，煮沸10 min，然後水洗、水煮，再用水洗。 ⑤小心加樣，切勿使樣品沾污凱氏燒瓶口部和頸部。
㈡ 蛋白質的測定都有哪些方法它們的原理、方法、 操作特點、優缺點、適用范圍各是什麼
蛋白質的測定都有哪些方法？它們的原理、方法、 操作特點、優缺點、適用范圍各是什麼？
①凱氏定氮法 原理：蛋白質平均含氮量為16%。當樣品與濃硫酸共熱，蛋白氮轉化為銨鹽，在強鹼性條件下將氨蒸出，用加有指示劑的硼酸吸收，最後用標准酸滴定硼酸，通過標准酸的用量即可求出蛋白質中的含氮量和蛋白質含量。
㈢ 蛋白質的定性測定方法
蛋白質定性方法茚三酮反應
1.范圍
本方法採用茚三酮試劑與蛋白質中a-氨基酸反應生成藍紫色化合物最大吸收值的波長為570nm
本方法適用於各類蛋白質測定范圍0.5 g 50 g 蛋白質
2.原理
茚三酮是使氨基酸和多肽顯色的重要試劑當茚三酮在弱酸性條件下和-氨基酸反應時氨基酸被氧化分解生成醛放出NH3 和C02 水合茚三酮則變成還原型茚三酮然後還原型茚三酮與NH3 及另一分子茚三酮進一步縮合生成藍紫色化合物最大吸收值的波長為570nm此反應為一切a-氨基酸所共有反應靈敏因而本法是氨基酸定量測定應用最廣泛的方法之一脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應生成黃色化合物最大吸收值的波長在44Onm 多肽和蛋白質雖然具有茚三酮反應但肽鏈越大靈敏度也越來越差故不宜作定量測定之用在多肽合成中常用來檢驗有無自由氨基的肽類存在
3 .試劑
茚三酮無水乙醇95%乙醇甘氨酸
4.試樣制備
4.1 蛋白質溶液箱保存備用
4.2 1mg mL-1的茚三酮乙醇溶液,0.1g 茚三酮溶於100mL 95%乙醇新鮮配置
4.3 5mg mL-1的甘氨酸溶液
5.參考文獻
1.陳曾燮劉兢羅丹 編.生物化學實驗.合肥中國科學技術大學出版社1994.1-6
2.李建武等 合編.生物化學實驗原理和方法.北京北京大學出版社1994.150-174
3.寧正祥 編.食品成分分析手冊.北京中國輕工業出版社1998.62-80
㈣ 蛋白質的結構的測定方法都有什麼
蛋白質三級結構測定主要有X射線衍射法、核磁共振技術、三維電鏡重構技術三種方法。
X線晶體衍射是最經典的測定生物大分子結構的方法。蛋白質晶體衍射中最大的難點就在於蛋白質的結晶，也在一定程度上限制了它的發展。NMR技術後起之秀，相對於X-RAY較為簡單，近年來技術越發成熟，可測定蛋白質的分子量也在攀升，而且其解析度也很高，
三維電鏡重構技術也是結構生物學研究中的一種較新的技術。技術難點在於演算法。
㈤ 過量水方法測定蛋白質持水力為什麼要將樣液的ph值調至7
對於蛋白質人們應該是非常的熟悉，在很多的食物中它都有出現，且對於人體來說蛋白質是非常非常的重要。既然要用到蛋白質，肯定是需要詳細的了解下蛋白質的作用，讓自己能夠對蛋白質有更多更為詳細的了解。
蛋白質對於平衡女性荷爾蒙有非常重要的作用，它能夠維持荷爾蒙正常的水平，讓女性的月經周期不容易發生混亂，讓身體線條更加的標准;身體的皮膚、肌肉、指甲等等都是需要蛋白質，有了蛋白質成分組成才能夠讓它們起到充盈的作用，讓皮膚不會過干，充滿水分，頭發變得烏黑亮麗等等。
蛋白質還能夠讓大腦變得聰明，它也是大腦重要的營養素，在大腦的蛋白質攝入不夠的時候人容易變得非常疲憊，記憶力也會下降，精神會出現不集中的情況。蛋白質的作用如此多，建議人們要能保證每天有足夠的蛋白質攝入，但是要記得將植物蛋白跟動物蛋白攝入比例分開，植物蛋白攝入量要比動物蛋白多。
㈥ 測定蛋白質的定量的方法有哪些及其原理各是什麼
在酸性條件下，考馬斯亮蘭G-250染料與蛋白質疏水區結合，導致最大吸收峰由465
nm
變為595
nm，同時顏色也由棕色變為藍色,該藍色化合物顏色的深淺與蛋白質濃度的高低成正比關系。將蛋白質樣品或稀釋的BSA
與Bradford試劑混合
㈦ 通常蛋白質含量測定的方法有哪些，比較優缺點。
定氮法，雙縮尿法（Biuret法）、Folin－酚試劑法（Lowry法）和紫外吸收法。考馬斯亮藍法（Bradford法）。
凱氏定氮 靈敏度低，適用於0.2~ 1.0mg氮，誤差為 ±2％ 費時
8～10小時 將蛋白氮轉化為氨，用酸吸收後滴定 非蛋白氮（可用三氯乙酸沉澱蛋白質而分離） 用於標准蛋白質含量的准確測定；干擾少；費時太長
雙縮脲法（Biuret法） 靈敏度低 1～20mg 中速 20~30分鍾 多肽鍵＋鹼性Cu2＋®紫色絡合物 硫酸銨；Tris緩沖液；某些氨基酸 用於快速測定，但不太靈敏；不同蛋白質顯色相似
紫外吸收法 較為靈敏 50～100mg 快速 5～10分鍾 蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處的光吸收 各種嘌吟和嘧啶；
Folin－酚試劑法（Lowry法） 靈敏度高 ～5mg 慢速 40～60分鍾 雙縮脲反應；磷鉬酸－磷鎢酸試劑被Tyr和Phe還原 硫酸銨；Tris緩沖液；甘氨酸；
各種硫醇 耗費時間長；操作要嚴格計時；顏色深淺隨不同蛋白質變化
考馬斯亮藍法(Bradford法) 靈敏度最高 1～5mg 快速5～15分鍾 考馬斯亮藍染料與蛋白質結合時，其lmax由465nm變為595nm 強鹼性緩沖液；
SDS 最好的方法；干擾物質少；顏色穩定； 顏色深淺隨不同蛋白質變化
㈧ 蛋白質持水力的測定偏大的原因
首先，建議你去了解下蛋白質持水力概念（http://ke..com/link?url=0DhqZqr7_5PeZhSVzNg-tORo_--Q4JwDF）和蛋白質持水力的測試方法（http://wenku..com/link?url=EWCI5iWXX__Qj5XuWQ-_-QSbSq52kI33IK）。
在此基礎上，分析每個測試步驟，推測哪些步驟會導致測定偏大。
㈨ 常用的蛋白質含量測定方法有哪些
①凱氏定氮法
原理：蛋白質平均含氮量為16%。當樣品與濃硫酸共熱，蛋白氮轉化為銨鹽，在強鹼性條件下將氨蒸出，用加有指示劑的硼酸吸收，最後用標准酸滴定硼酸，通過標准酸的用量即可求出蛋白質中的含氮量和蛋白質含量。
②雙縮脲法
原理：尿素在180℃下脫氨生成雙縮脲，在鹼性溶液中雙縮脲可與Cu2+形成穩定的紫紅色絡合物。蛋白質中的肽鍵實際上就是醯胺鍵，故多肽、蛋白質等都有雙縮脲（biuret）反應，產生藍色或紫色復合物。比色定蛋白質含量。
缺點：靈敏度低，樣品必須可溶，在大量糖類共存和含有脯氨酸的肽中顯色不好。其 精確度 較差 (數mg)，且會受樣品中 硫酸銨 及 Tris 的干擾，但 准確度 較高，不受蛋白質的種類影響。
③Folin酚法(Lowry)
Folin酚法是biuret 法的延伸，所用試劑由試劑甲和乙兩部分組成。試劑甲相當於雙縮脲試劑（鹼性銅試劑），試劑乙中含有磷鉬酸和磷鎢酸。
在鹼性條件下，蛋白質中的巰基和酚基等可將Cu2+還原成Cu+， Cu+能定量地與Folin－酚試劑反應生成藍色物質，600nm比色測定蛋白質含量。
靈敏度較高(約 0.1 mg)，但較麻煩，也會受 硫酸銨 及 硫醇化合物 的干擾。 步驟中各項試劑的混合，要特別注意均勻澈底，否則會有大誤差。
④紫外法
280nm光吸收法：利用Tyr在280nm在吸收進行測定。
280nm-260nm的吸收差法：若樣品液中有少量核酸共存按下式計算：
蛋白質濃度(mg/ml)=1.24E280-0.74E260 （280 260為角標）
⑤色素結合法（Bradford 法）
直接測定法：利用蛋白質與色素分子（Coomassie Brilliant Blue G-250）結合物的光吸收用分光光度法進行測定。
考馬斯亮蘭（CBG）染色法測定蛋白質含量。CBG 有點像指示劑，會在不同的酸鹼度下變色；在酸性下是茶色，在中性下為藍色。當 CBG接到蛋白質上去的時候，因為蛋白質會提供 CBG一個較為中性的環境，因此會變成藍色。當樣本中的蛋白質越多，吸到蛋白質上的CBG也多，藍色也會增強。因此，藍色的呈色強度，是與樣本中的蛋白質量成正比。
間接測定法：蛋白質與某些酸性或鹼性色素分子結合形成不溶性的鹽沉澱。用分光光度計測定未結合的色素，以每克樣品結合色素的量來表示蛋白質含量的多少。
⑥BCA法
BCA（Bicinchoninc acid procere，4,4』-二羧-2,2』-二喹啉）法與Lowry法相似，主要差別在鹼性溶液中，蛋白質使Cu2+轉變Cu+後，進一步以BCA 取代Folin試劑與Cu+結合產生深紫色，在波長562 nm有強的吸收。
它的優點在於鹼性溶液中BCA 比Folin試劑穩定，因此BCA與鹼性銅離子溶液結合的呈色反應只需一步驟即完成。靈敏度Lowry法相似。
本方法對於陰離子、非離子性及二性離子的清潔劑和尿素較具容忍度，較不受干擾，但會受還原糖 及EDTA的干擾。
⑦膠體金測定法
膠體金(colloidal gold)是氯金酸(chloroauric acid)的水溶膠，呈洋紅色，具有高電子密度，並能與多種生物大分子結合。
膠體金是一種帶負電荷的疏水膠體遇蛋白質轉變為藍色，顏色的改變與蛋白質有定量關系，可用於蛋白質的定量測定。
⑧其他方法
有些蛋白質含有特殊的 非蛋白質基團，如 過氧化物酶含有 亞鐵血紅素基團，可測 403 nm 波長的吸光來定量之。 含特殊金屬的酶 (如鎘)，則可追蹤該金屬。
㈩ 蛋白質含量測定的基本方法有哪些
pro的測定方法分為兩大類：一類是利用pro的共性，即含氮量，肽鏈和折射率測定pro含量，另一類是利用蛋白質中特定氨基酸殘基、酸、鹼性基團和芳香基團測定pro含量。但是食品種類很多，食品中pro含量又不同，特別是其他成分，如碳水化合物，脂肪和維生素的干擾成分很多，因此pro的測定通常利用經典的剴氏定氮法是由樣品消化成銨鹽蒸餾，用標准酸液吸收，用標准酸或鹼液滴定，由樣品中含氮量計算出pro的含量。由於食品中pro含量不同又分為凱氏定氮常量法、半微量法和微量法，但它們的基本原理都是一樣的。