『壹』 細胞傳代後不貼壁了，成團浮在培養基里，怎麼辦
看下培養液顏色，是不是要更換培養液了，做下活性檢測，看是不是有污染，細胞是不是死了。細胞和人一樣，環境不舒服的時候就會表現出來的，養細胞是個細心活，慢慢來
『貳』 細胞復甦後貼壁細胞較少怎麼辦
1、你凍存的時候是不是消化的時間過長，這是一般人所注意不到的，即使書上也不講這個問題，但我因為這個問題就兩種肺癌細胞和一種肝癌細胞專門做過試驗，這個絕對是絕大部分人細胞復不活的一個原因。太長的消化時間會讓細胞復甦時失去貼壁能力，表現為先貼後死，原因是在你復甦的時候細胞已進入凋亡程序，不可逆轉的死亡。
2、你的凍存液好不好，是什麼，甘油還是DMSO，質量非常重要，否則也會死亡。
3、你的凍存液的量加的是不是太多，ATCC推薦是不超過7%，大於5%，太多也不好。
4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻，這個有一些影響，但不算太大。
5、你的凍存是否按部就班，就是所溫度梯度是不是把握嚴格，很多人容易忘卻這個事情，因為這個東西流程長。
生物幫上面有詳細的介紹方法。幹細胞信號通路 http://doc.bio1000.com/show-3137.html
『叄』 細胞貼壁狀體啊不理想
解決方案如下：
1.如果你手上這支細胞已經傳代次數很多的話，建議復甦一支新的細胞，這是最直接的方法
2.檢查培養基、胰酶、pbs中是否有污染
3.如果只有手頭上的細胞，那麼檢測一下是否有支原體或者病毒感染，黑膠蟲實際是一種細胞殘留的膠質成分並不是一種污染源但是視野中會有黑色點狀物好像懸浮細胞但略小，注意區別
4.貼壁不佳可以在傳代或復甦前選用包被液包被培養瓶，增加細胞貼壁性，一般用多聚賴氨酸包被，效果很好，可以一試
5.有時候細胞分裂是貼壁-懸浮-分裂-再貼壁的一個過程，懸浮細胞不一定都是死細胞，可能是正在分裂的細胞，一般來說貼壁好的細胞換液一次總會有大概5-15%再次懸浮，少量的話不必過分擔心
補充你的問題：觀察消化時間是以你的細胞在加入胰酶後變圓開始到細胞間連接消失細胞脫落為消化完成，消化時間過短鏡下觀察可能會有貼壁殘留，消化過久會損傷細胞導致狀態不佳，建議兩步法消化，效率比較高，吹打以吹散細胞為目的不必太過用力，其實吹打對細胞的損傷相比胰酶是很小的，稍加註意即可
『肆』 細胞實驗中培養細胞不貼壁有哪些原因
答：
支原體污染.
培養瓶瓶底不幹凈.
培養液pH
值過鹼（NaHCO3
分解）.
消化液或培養液配製錯誤、過期儲存、儲存不當.
細胞老化（如傳代前細胞已匯合導致失去貼附性）.
接種細胞起始濃度太低或太高.
建議解決方法：
縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度.
分離培養物,檢測支原體.清潔支架和培養箱.如發
現支原體污染,丟棄培養物.
注意刷洗,或換用一次性塑料培養瓶.
使用無菌醋酸溶液調整pH
值或充入無菌CO2（將培
養液敞口放入培養箱也可）.
重新配置消化液或培養液.
啟用新的保種細胞.
調節最佳接種細胞濃度.
南昌中洪博元技術部
『伍』 培養細胞不貼壁可能是什麼原因應怎樣處理 詳細
②支原體污染。 ③培養瓶瓶底不幹凈。 ④培養液pH 值過鹼（NaHCO3 分解）。 ⑤消化液或培養液配製錯誤、過期儲存、儲存不當。 ⑥細胞老化（如傳代前細胞已匯合導致失去貼附性）。 ⑦接種細胞起始濃度太低或太高。 建議解決方法： ①縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度。 ②分離培養物，檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發 現支原體污染，丟棄培養物。 ③注意刷洗，或換用一次性塑料培養瓶。 ④使用無菌醋酸溶液調整pH 值或充入無菌CO2（將培 養液敞口放入培養箱也可）。 ⑤重新配置消化液或培養液。 ⑥啟用新的保種細胞。 ⑦調節最佳接種細胞濃度。
『陸』 培養細胞不貼壁可能是什麼原因應怎樣處理
培養細胞不貼壁的原因可能如下：
1.支原體污染.
2.培養瓶瓶底不幹凈.
3.培養液pH 值過鹼（NaHCO3 分解）.
4.消化液或培養液配製錯誤、過期儲存、儲存不當.
5.細胞老化（如傳代前細胞已匯合導致失去貼附性）.
6.接種細胞起始濃度太低或太高.
建議解決方法：
1.縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度.
2.分離培養物,檢測支原體.清潔支架和培養箱.如發現支原體污染,丟棄培養物.
3.注意刷洗,或換用一次性塑料培養瓶.
4.使用無菌醋酸溶液調整pH 值或充入無菌CO2（將培養液敞口放入培養箱也可）.
5.重新配置消化液或培養液.
6.啟用新的保種細胞.
7.調節最佳接種細胞濃度.
『柒』 如何使原代細胞更好的貼壁
大多數原代貼壁細胞貼壁時間是6h到12h，細胞不貼壁有好多種原因的：
1、如果你用玻璃培養瓶培養的話，有可能你的瓶子沒處理好；建議你用一次性培養瓶，進口的都可以。
2、一般做原代細胞貼壁培養用胰酶消化，消化的程度要掌握好，如果消化時間不到、分散不均勻不貼壁。一般消化有熱消化，就是放在37度里消化，時間比較短不好控制，傳代培養常用。還有就是冷消化放在4度里，一般在幾個小時以上，胰酶濃度也有要求的，一般都用0.125－0.25％之間。ph在7.6左右。
3、還有就是天然培養基的選擇，就是血清種類，血清能夠使細胞貼壁，並且提供細胞生長的重要營養成分。
『捌』 培養細胞不貼壁可能是什麼原因應怎樣處理
②支原體污染.
③培養瓶瓶底不幹凈.
④培養液pH 值過鹼（NaHCO3 分解）.
⑤消化液或培養液配製錯誤、過期儲存、儲存不當.
⑥細胞老化（如傳代前細胞已匯合導致失去貼附性）.
⑦接種細胞起始濃度太低或太高.
建議解決方法：
①縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度.
②分離培養物,檢測支原體.清潔支架和培養箱.如發
現支原體污染,丟棄培養物.
③注意刷洗,或換用一次性塑料培養瓶.
④使用無菌醋酸溶液調整pH 值或充入無菌CO2（將培
養液敞口放入培養箱也可）.
⑤重新配置消化液或培養液.
⑥啟用新的保種細胞.
⑦調節最佳接種細胞濃度.