⑴ gus染色原理
這是由其初始產物經氧化二聚作用形成的靛藍染料,它使具Gus活性的部位或位點呈現藍色,用肉眼或在顯微鏡下可看到,且在一定程度下根據染色深淺可反映出Gus活性。
因此利用該方法可觀察到外源基因在特定器官、組織,甚至單個細胞內的表達情況。
根據gus基因檢測所用的底物不同,可以選擇三種檢測方法:組織化學法、分光光度法和熒光法(靈感度為分光光度檢測法最高)。其中最為常用的是組織化學法。
(1)可用於葡萄糖苷化學檢測的方法是擴展閱讀
gus基因存在於E.coli等一些細菌基因組內,編碼β-葡萄糖苷酸酶。β-葡萄糖苷酸酶是一個水解酶,以β-葡萄糖苷酸酯類物質為底物,其反應產物可用多種方法檢測出來。
由於絕大多數植物沒有檢測到葡萄糖苷酸酶的背景活性,因此這個基因被廣泛應用於基因調控的研究中。其中組織化學法檢測以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸(X-Gluc)作為反應底物,將被檢材料用含有底物的緩沖液浸泡。若組織細胞發生了gus基因的轉化,並表達出Gus,在適宜的條件下,該酶就可將X-Gluc水解生成藍色產物。
⑵ 如何鑒別葡萄糖、果糖、甲基葡萄糖苷
一、沸點不同
1、葡萄糖:沸點為527.1 ℃。
2、果糖:沸點為551.7 ℃。
3、甲基葡萄糖苷:沸點為200 ºC (0.2 MMHG)。
二、 熔點不同
1、葡萄糖:熔點為146ºC。
2、果糖:熔點為103 至 105 ℃(分解)。
3、甲基葡萄糖苷:熔點為169-171 º;C。
三、特點不同
1、葡萄糖:葡萄糖在生物學領域具有重要地位,是活細胞的能量來源和新陳代謝中間產物,即生物的主要供能物質。植物可通過光合作用產生葡萄糖,在糖果製造業和醫葯領域有著廣泛應用。
2、果糖:以游離狀態大量存在於水果的漿汁和蜂蜜中,果糖還能與葡萄糖結合生成蔗糖。
3、甲基葡萄糖苷:是一種高效的增稠劑且它性質溫和、對眼睛無刺激,在與其他表面活性劑(如月桂醇硫酸鈉等) 配伍時,可以明顯降低對眼睛的刺激性;它與其他原料有良好的協同性。
⑶ 用化學方法鑒別 半乳糖 果糖 葡萄糖甲苷 最簡單的方法是
三種物質中分別加入硝酸銀的氨水溶液,不反應的是葡萄糖甲苷,而半乳糖和果糖會產生金屬銀沉積於玻璃反應器皿壁上。
在剩餘兩種物質中分別加入溴水溶液,因半乳糖含有醛基,能使溴水褪色,與溴水反應生成相應的糖酸。而果糖是酮糖,在酸性條件下不能被溴水氧化,所以不能使溴水褪色。
(3)可用於葡萄糖苷化學檢測的方法是擴展閱讀
會使溴水褪色的的物質有:
1、烯烴、炔烴、二烯烴等不飽和烴類及其不飽和烴的衍生物反應,使溴水褪色。如:CH₂=CH₂+Br₂→CH₂Br-CH₂Br。
2、與苯酚反應生成白色沉澱。
3、與醛類等有醛基的物質反應,使溴水褪色。
4、因萃取作用使溴水褪色,有機溶劑溶解溴呈橙色(或棕紅色)。
(1)密度大於1的溶劑(四氯化碳、氯仿、溴苯、二硫化碳等);
(2)密度小於1的溶劑(液態的飽和烴、直餾汽油、苯及其同系物、液態環烷烴、液態飽和酯)。
5、與鹼性溶液(如NaOH溶液、Na₂CO₃溶液等)反應,使溴水褪色。
6、與較強的無機還原劑(如H₂S、SO₂、KI和FeSO₄等)發生反應,使溴水褪色。
⑷ 用化學方法鑒別 半乳糖 果糖 葡萄糖甲苷 最簡單的方法是
三種物質中分別加入硝酸銀的氨水溶液,不反應的是葡萄糖甲苷,而半乳糖和果糖會產生金屬銀沉積於玻璃反應器皿壁上。
在剩餘兩種物質中分別加入溴水溶液,因半乳糖含有醛基,能使溴水褪色,與溴水反應生成相應的糖酸。而果糖是酮糖,在酸性條件下不能被溴水氧化,所以不能使溴水褪色。
(4)可用於葡萄糖苷化學檢測的方法是擴展閱讀
會使溴水褪色的的物質有:
1、烯烴、炔烴、二烯烴等不飽和烴類及其不飽和烴的衍生物反應,使溴水褪色。如:CH₂=CH₂+Br₂→CH₂Br-CH₂Br。
2、與苯酚反應生成白色沉澱。
3、與醛類等有醛基的物質反應,使溴水褪色。
4、因萃取作用使溴水褪色,有機溶劑溶解溴呈橙色(或棕紅色)。
(1)密度大於1的溶劑(四氯化碳、氯仿、溴苯、二硫化碳等);
(2)密度小於1的溶劑(液態的飽和烴、直餾汽油、苯及其同系物、液態環烷烴、液態飽和酯)。
5、與鹼性溶液(如NaOH溶液、Na₂CO₃溶液等)反應,使溴水褪色。
6、與較強的無機還原劑(如H₂S、SO₂、KI和FeSO₄等)發生反應,使溴水褪色。
⑸ 用化學方法如何鑒別葡萄糖和蔗糖
葡萄糖是醛糖,可被溴水氧化。蔗糖中不含醛基,含的是酮基,不能使銀氨溶液或新制的氫氧化銅產生銀鏡或磚紅色沉澱。
葡萄糖的銀鏡反應:先制備銀氨溶液,再滴入一滴管的葡萄糖溶液,振盪後把試管放在熱水中溫熱。不久可以看到,試管被加熱區內壁上附著一層光亮如鏡的金屬銀。
銀鏡反應是銀(Ag)化合物的溶液被還原為金屬銀的化學反應,由於生成的金屬銀附著在容器內壁上,光亮如鏡,故稱為銀鏡反應。
(5)可用於葡萄糖苷化學檢測的方法是擴展閱讀:
常見的銀鏡反應是銀氨絡合物(氨銀配合物,又稱托倫試劑)被醛類化合物還原為銀,而醛被氧化為相應的羧酸根離子的反應,不過除此之外,某些銀化合物(如硝酸銀)亦可被還原劑(如肼)還原,產生銀鏡。
銀鏡反應是用來檢驗醛及還原性糖的一個定性實驗,主要用來檢測醛基(即-CHO)的存在。此實驗操作簡單,現象明顯,易於觀察。實驗室中用這個反應來鑒定含有醛基的化合物。
工業上則用這個反應來對玻璃塗銀制鏡和制保溫瓶膽。本實驗主要用於制鏡工業,同時用於在工業實驗室中的有機物原料的濃度鑒別,熱水瓶內膽鍍銀有效防止熱輻射從而保溫。
網路-銀鏡反應
⑹ 什麼是葡萄糖測定(干化學法)
用銀氨溶液可以檢驗葡萄糖。
⑺ 大家幫忙啊!!!!β-葡萄糖苷酶活性測定的方法,越詳細越好.
以京尼平苷為底物氨基酸為顯色劑測定β-葡萄糖苷酶活力的方法。β-葡萄糖苷酶水解京尼平苷的溫度為50℃,pH為5.0,京尼平苷濃度為0.625mmol/L,水解10min後,立即加入1ml1mol/LNa2CO3終止反應,混勻,再加入體積比為1:1的0.2mg/ml的精氨酸溶液,沸水浴顯色10min,冷卻後於590nm處測光吸收度值。該方法的檢測線性范圍為0.05~1U/ml,相關系數為0.9998,檢測限為0.02U/ml,精密度為1.5%(n=5),回收率為99.5%~101.1%,該方法准確度高,結果穩定。
⑻ 用化學方法咋鑒別甘露糖,甲基α-β-吡喃葡萄糖苷
加銀氨溶液,甘露糖有醛基,可發生銀鏡反應,甲基葡萄糖苷沒有醛基,無反應。
⑼ 化學鑒別 葡萄糖,葡萄糖酸和α-甲基葡萄糖苷
葡萄糖是醛糖~~果糖是酮糖~~加入溴水~~葡萄糖可以與之反應~~而果糖不能~~甲基葡萄糖苷中的醛基已經形成縮醛結構~~也不反應~~~ 剩下果糖和甲基葡萄糖苷~~可以加入苯肼~~果糖可以反應生成糖脎~~甲基葡萄糖苷不可以~~~~ 這樣就ok咯~~~~
⑽ 用簡單的化學方法鑒別甲基-D-吡喃葡萄糖苷和D-葡萄糖
兩個名稱是一樣的,有時候將甲基放在前面稱為甲基葡萄糖苷,有時候將甲基放在後面稱為葡萄糖甲苷。這有點像甘油羧酸酯又可以稱為羧酸甘油酯一樣。
澱粉用碘水鑒別;葡萄糖用銀鏡反應;果糖和蔗糖先水解,後會發生銀鏡反應的是蔗糖,不會的是果糖。
哈沃斯式通常把含氧的六元環單糖看成雜環吡喃的衍生物,稱為吡喃糖。葡萄糖通常以吡喃糖的形式存在。因此,兩種環狀結構的葡萄糖分別稱為α-D-(+)-吡喃葡萄糖和β-D-(+)-吡喃葡萄糖。
(10)可用於葡萄糖苷化學檢測的方法是擴展閱讀:
吡喃糖以吡喃為主體結構,葡萄糖、甘露糖、半乳糖等己糖大都以吡喃糖的形式存在,吡喃環上的羥基朝向因己糖的結構而變。葡萄糖醛酸、甘露糖醛酸、氨基葡萄糖也以吡喃糖的形式存在,木糖、核糖、阿拉伯糖等戊糖也能形成吡喃糖的衍生物。
游離的吡喃糖與呋喃糖在一定比例下處於平衡中。澱粉、纖維素、甲殼素等多糖都是由吡喃糖連接而成的多糖。自然界的戊糖、己糖等都有兩種不同的結構,一種是多羥基醛的開鏈形式;另一種羰基與羥基反應成環反應生成的產物——半縮醛。