Ⅰ 我想檢查身體中的乳酸含量，請問怎麼檢查
正常情況下人體內的乳酸含量是十分微量的,只有在進行比較強的體力勞動或者運動的時候才會產生的有所增加,比如長跑以後會肌肉酸疼有一方面原因就是因為肌肉無氧呼吸產生了乳酸.但即使這樣產生的乳酸量也是很少的,並且這些乳酸在體內是很快就會被代謝掉了(轉化成了其它人體可以利用的物質),所以人體內一般不會有乳酸的積累.一般認為在乳酸耐受能力訓練時以血乳酸在15mmol/L左右為宜. 但是如果是因為疾病使身體代謝失常的話就有可能產生較多量乳酸,這對人體是十分有害的.
Ⅱ 乳酸冬天是否結晶
純凈物乳酸不會結晶，除非與其他物質發生化學反應後會隨濃度及溫度結晶，但會結冰。詳見下述：
基本信息
CAS NO.50-21-5
中文別名 DL-乳酸
英文名稱 DL-Lactic acid
英文別名 2-Hydroxypropanoic acid; 2-Hydroxypropionic acid; Lactic acid; Lactic acid, dl-; Propanoic acid, 2-hydroxy-; (RS)-2-Hydroxypropionsaeure; 1-Hydroxyethanecarboxylic acid; AI3-03130; Acim lacticum; BRN 5238667; CCRIS 2951; Lactovagan; Tonsillosan; alpha-Hydroxypropionic acid
EINECS 200-018-0;209-954-4
分子式 C3H6O3
分子量 90.08
2安全術語
S26In case of contact with eyes, rinse immediately with plenty of water and seek medical advice.
不慎與眼睛接觸後，請立即用大量清水沖洗並徵求醫生意見。
S36/37/39Wear suitable protective clothing, gloves and eye/face protection.
穿戴適當的防護服、手套和護目鏡或面具。
S45In case of accident or if you feel unwell, seek medical advice immediately (show the label whenever possible.)
若發生事故或感不適，立即就醫(可能的話，出示其標簽)。
3風險術語
R34 Causes burns.
引起灼傷。
R38 Irritating to skin.
刺激皮膚。
R41Risk of serious damage to the eyes.
對眼睛有嚴重傷害。
4概述
在發酵過程中乳酸脫氫酶將丙酮酸轉換為左旋乳酸。在一般的
乳酸
新陳代謝和運動中乳酸不斷被產生，但是其濃度一般不會上升。只有在乳酸產生過程加快，乳酸無法被及時運走時其濃度才會提高。乳酸運輸速度由一系列因素影響，其中包括單羧基轉運體、乳酸脫氫酶的濃度和異構體形式、組織的氧化能力。一般來說血液中的乳酸濃度在不運動時為1-2mmol/L，在強烈運動時可以上升到20mmol/L。
一般來說當組織的能量無法通過有氧呼吸得以滿足，組織無法獲得足夠的氧或者無法足夠快地處理氧的情況下乳酸的濃度會上升。在這種情況下丙酮酸脫氫酶無法及時將丙酮酸轉換為乙醯輔酶A，丙酮酸開始堆積。在這種情況下假如乳酸脫氫酶不將丙酮酸還原為乳酸的話糖酵解過程和三磷酸腺苷的合成會受到抑制。產生乳酸的過程為：丙酮酸+NADP+H+→乳酸+NAD
這個過程的意義在於重建糖酵解所需要的煙醯胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）來保持三磷酸腺苷的合成。在氧氣充足的肌肉細胞中乳酸可以被氧化為丙酮酸，然後直接用來作為三羧酸循環的燃料。它也可以在肝臟內糖異生的過程中通過科裡布斯循環轉化為葡萄糖。乳桿菌屬的細菌也可以進行乳酸發酵。這些細菌可以生活在口內，它們產生的乳酸是導致齲齒的原因。在醫學里乳酸常被用在乳酸林格氏液中。這是一種與人的血液等張的氯化鈉、氯化鉀和乳酸在蒸餾水中的溶液。在損傷、手術或燒傷失血後常使用乳酸林格氏液來補充失血。
5基本信息
名稱：乳酸
英文名：Lactic acid；2-Hydroxy propionic acid
其它名稱：2-羥基丙酸；α-羥基丙酸；丙醇酸
CAS號：50-21-5
分子式：C3H6O3
結構簡式：CH3CH(OH)COOH
縮寫式：HL（其中L表示乳酸根）
分子量：90.08
相對密度：1.200
熔點 18℃
密度 1.209
沸點 122℃ (15 mmHg)[1]
解離常數：pKa=4.14(22.5℃)
閃點：大於110℃
燃燒熱：15.13kj/kg
等滲量：2.3%（W/V）溶液與血漿等滲
溶解度：與乙醇（95%）、乙醚、水混溶，不溶於氯仿
比熱：2.11 KJ/g[2]
6葯物分析
方法名稱： 乳酸的測定—中和滴定法
應用范圍： 本方法採用滴定法測定乳酸(C3H6O3)的含量。
本方法適用於乳酸。
方法原理： 供試品加水溶解後，再精密加入氫氧化鈉滴定液（1mol/L）25mL，煮沸5分鍾，加酚酞指示液2滴，趁熱用硫酸滴定液（0.5mol/L）滴定，並將滴定的結果用空白試驗校正，酚酞指示液變紅時停止滴定，讀出硫酸滴定液使用量，計算乳酸含量。
試劑： 1. 水（新沸放置至室溫）
2. 氫氧化鈉滴定液（1mol/L）
3. 硫酸滴定液（0.5mol/L）
4.酚酞指示液
5.甲基紅-溴甲酚綠混合指示液
6.乙醇
7.基準鄰苯二甲酸氫鉀
8.基準無水碳酸鈉
儀器設備：
試樣制備： 1. 氫氧化鈉滴定液（1mol/L）
配製：取澄清的氫氧化鈉飽和溶液56mL，加新沸過的冷水使成1000mL。
標定：取在105℃乾燥至恆重的基準鄰苯二甲酸氫鉀約6g，精密稱定，加新沸過的冷水50mL，振搖，使其盡量溶解；加酚酞指示液2滴，用本液滴定，在接近終點時，應使鄰苯二甲酸氫鉀完全溶解，滴定至溶液顯粉紅色。每1mL氫氧化鈉滴定液（1mol/L）相當於204.2mg的鄰苯二甲酸氫鉀。根據本液的消耗量與鄰苯二甲酸氫鉀的取用量，算出本液的濃度。
貯藏：置聚乙烯塑料瓶中，密封保存；塞中有2孔，孔內各插入玻璃管1支，1管與鈉石灰管相連，1管供吸出本液使用。
2.酸滴定液（0.5mol/L）
配製：取硫酸30mL，緩緩注入適量的水中，冷卻至室溫，加水稀釋至1000mL，搖勻。
標定：取在270-300℃乾燥恆重的基準無水碳酸鈉約1.5g，精密稱定，加水50mL使溶解，加甲基紅-溴甲酚綠混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由綠色變為紫紅色時，煮沸2分鍾，冷卻至室溫，繼續滴定至溶液顏色有綠色變為暗紫色。每1mL硫酸滴定液（0.5mol/L）相當於53.00mg的無水碳酸鈉。根據本液消耗量與無水碳酸鈉的取用量，算出本液的濃度，即得。
3. 酚酞指示液
取酚酞1g，加乙醇100mL使溶解。
4. 溴甲酚綠混合指示液
取0.1% 甲基紅的乙醇溶液20mL，加0.2%溴甲酚綠的乙醇溶液30mL，搖勻，即得。
操作步驟： 精密稱取供試品1g，精密加水50mL，再精密加入NaOH氫氧化鈉滴定液（1mol/L）25ml，煮沸5min，加酚酞指示液2滴，趁熱用硫酸滴定液（0.5mol/L）滴定，至溶液顯粉紅色，並將滴定的結果用空白試驗校正，記錄消耗硫酸滴定液的體積數（mL），每1mL氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當於90.08mg乳酸（C3H6O3）。
注1：「精密稱取」系指稱取重量應准確至所稱取重量的千分之一，「精密量取」系指量取體積的准確度應符合國家標准中對該體積移液管的精度要求。[3]
7理化性質
純品為無色液體，工業品為無色到淺黃色液體。無氣味，具有
吸濕性。相對密度1.2060(25/4℃)。熔點18℃。沸點122℃（2kPa)。折射率nD(20℃)1.4392。能與水、乙醇、甘油混溶，水溶液呈酸性，PKa=3.85。不溶於氯仿、二硫化碳和石油醚。在常壓下加熱分解，濃縮至50%時，部分變成乳酸酐，因此產品中常含有10%～15%的乳酸酐。由於具有羥基和羧基，一定條件下，可以發生酯化反應，產物有三種。
毒性：大鼠經口LD50為3.73g/kg體重；ADI無限制規定。乳酸有三種同分異構體：DL-型、D-型和L-型。將大鼠分為三組，每組投葯劑量為1.7g/kg體重的DL-型、D-型和L-型乳酸，口服三小時後解剖檢測，DL-型乳酸可使肝中肝糖增高，40%~95%在3h內吸收轉化；D-型和L-型乳酸使血中乳酸鹽增高，由尿液排出體外。
8生產方法發酵法
發酵法的主要途徑是糖在乳酸菌作用下，調節pH值5左右，保持大約50或60dm;C發酵三到五天得粗乳酸。
發酵法的原料一般是玉米、大米、甘薯等澱粉質原料（也有以苜蓿、纖維素等作原料，有研究提出廚房垃圾及魚體廢料循環利用生產乳酸的）。乳酸發酵階段能夠產酸的乳酸菌很多，但產酸質量較高的卻不多，主要是根黴菌和乳酸桿菌等菌系。不同菌系其發酵途徑不同，可分同型發酵和異型發酵，實際由於存在微生物其它生理活動，可能不是單純某一種發酵途徑。
發酵法分同型發酵和異型發酵。
合成法
合成方法制備乳酸有乳腈法、丙烯腈法、丙酸法、丙烯法等，用於工業生產的僅乳腈法(也叫乙醛氫氰酸法)和丙烯腈法。
（1）乳腈法
乳腈法是將乙醛和冷的氫氰酸連續送入反應器生成乳腈（或直接用乳腈作原料），用泵將乳腈打入水解釜，注入硫酸和水，使乳腈水解得到粗乳酸。然後再將粗乳酸送人酯化釜，加入乙醇酯化，經精餾、濃縮、分解得精乳酸。美國斯特林化學公司及日本的武藏野化學公司均採用此法合成乳酸。
（2）丙烯腈法
丙烯腈法是將丙烯腈和硫酸送入反應器中水解，再把水解物送人酯化反應器中與甲醇反應；然後把硫酸氫銨分出後，粗酯送入蒸餾塔，塔底獲精酯；再將精酯送入第二蒸餾塔，加熱分解，塔底得稀乳酸，經真空濃縮得產品。
（3）丙酸法
丙酸法以丙酸為原料，經過氯化、水解得粗乳酸；再經酯化、精餾、水解得產品。該法原料價格較貴，僅日本大賽路公司等少數廠家採用。反應如下：
CH3CH2COOH Cl2一→CH3CHClCOOH NaOH—→CH3CH(OH)COOH NaCl
酶化法
（1）氯丙酸酶法轉化
東京大學的本崎[6]等研究利用純化了的L-2-鹵代酸脫鹵酶和DL-2-鹵代酸脫鹵酶分別作用於底物L-2-氯丙酸和DL-2-氯丙酸，脫鹵製得L-乳酸或D-乳酸。L-2-鹵代酸脫鹵酶催化L-2-氯丙酸，而DL-2-鹵代酸脫鹵酶既可催化L-2-氯丙酸，又可催化L-2-氯丙酸生成相應的旋光體，催化同時發生構型轉化。
（2）丙酮酸酶法轉化
從活力最高的乳酸脫氫酶的混亂乳桿菌DSM20196菌體中得到D-乳酸脫氫酶，以無旋光性的丙酮酸為底物可得到D-乳酸。
工業生產乳酸方法主要是發酵法和合成法。發酵法因其工藝簡單，原料充足，發展較早而成為比較成熟的乳酸生產方法，約占乳酸生產的70以上，但周期長，只能間歇或半連續化生產，且國內發酵乳酸質量達不到國際標准。化學法可實現乳酸的大規模連續化生產，且合成乳酸也已得到美國食品和葯品管理局(FDA)的認可，但原料一般具有毒性，不符合綠色化學要求。酶法工藝復雜，其工業應用還有待於進一步研究。
9用途食品行業
1) 乳酸有很強的防腐保鮮功效，可用在果酒、飲料、肉類、食品、糕點製作、蔬菜 ( 橄欖、小黃瓜、珍珠洋蔥 ) 腌制以及罐頭加工、糧食加工、水果的貯藏，具有調節 pH 值、抑菌、延長保質期、調味、保持食品色澤、提高產品質量等作用；
啤酒
2) 調味料方面，乳酸獨特的酸味可增加食物的美味，在色拉、醬油、醋等調味品中加入一定量的乳酸，可保持產品中的微生物的穩定性、安全性，同時使口味更加溫和；
3) 由於乳酸的酸味溫和適中，還可作為精心調配的軟飲料和果汁的首選酸味劑；
4) 在釀造啤酒時，加入適量乳酸既能調整 pH 值促進糖化，有利於酵母發酵，提高啤酒質量，又能增加啤酒風味，延長保質期。在白酒、清酒和果酒中用於調節 pH ，防止雜菌生長，增強酸味和清爽口感；5.緩沖型乳酸可應用於硬糖，水果糖及其它糖果產品中，酸味適中且糖轉化率低。乳酸粉可用於各類糖果的上粉，作為粉狀的酸味劑；
5) 天然乳酸是乳製品中的天然固有成分，它有著乳製品的口味和良好的抗微生物作用，已廣泛用於調配型酸奶乳酪、冰淇淋等食品中，成為倍受青睞的乳製品酸味劑；
6) 乳酸粉末是用於生產蕎頭的直接酸味調節劑。乳酸是一種天然發酵酸，因此可令麵包具有獨特口味；乳酸作為天然的酸味調節劑，在麵包、蛋糕、餅乾等焙烤食品用於調味和抑菌作用，並能改進食品的品質，保持色澤，延長保質期。[4]
醫葯方面
1) 在病房、手術室、實驗室等場所中採用乳酸蒸氣消毒，可有效殺滅空氣中的細菌，起到減少疾病，達到提高健康之目的；
2) 在醫葯方面廣泛用作防腐劑、載體劑、助溶劑、葯物制劑、 pH 調節劑等；
3) 乳酸聚合得到聚乳酸，聚乳酸可以抽成絲紡成線，這種線是良好的手術縫線，縫口癒合後不用拆線，能自動降解成乳酸被人體吸收，無不良後果。尤其是體內手術縫線，免除二次手術拆線的麻煩。這種高分子化合物可做成粘接劑在器官移植和接骨中應用；
4) 乳酸可以直接配製成葯物或日常保健品使用；如嬌妍私處沐浴露是歐洲專家研製的配方，針對成熟女性陰道乳酸桿菌製造慢，加入了乳酸成份，維護好陰道的自潔作用。
5) 節肌肉活力和抗疲勞的制約作用。
其它工業
1) 乳酸在發酵工業中用於控制 pH 值和提高發酵物純度；
2) 在卷煙行業中可以保持煙草濕度，除去煙草中雜質，改變口味，提高煙草檔次，乳酸還可中和尼古丁煙鹼，減少對人體有害成份提高煙草品質；
3) 在紡織行業中用來處理纖維，可使纖維易於著色，增加光澤，使觸感柔軟；
4) 在塗料墨水工業中用作 pH 調節劑和合成劑；在塑料纖維工業是可降解新型材料聚乳酸 PLA 的首選原料；
5) 乳酸亦可作為聚乳酸的起始原料，生產新一代的全生物降解塑料；
6) 在製革工業中，乳酸可脫去皮革中的石灰和鈣質，使皮革柔軟細密，從而製成高級皮革；
7) 乳酸由於對鎳具有獨一無二的絡合常數，常被用於鍍鎳工藝，它同時可作為電鍍槽里的酸鹼緩沖劑和穩定劑。在微電子工業中，其獨特的高純度及低金屬含量滿足了半導體工業對高質量的要求，它作為一種安全的有機溶解劑可用於感光材料的清洗；
8) 乳酸作為 pH 調節劑和合成劑可應用於各種水基塗層的粘合系統。如：電積物的塗層。乳酸產品沸點低，非常適用於為高固體塗層制定的安全溶解系統。乳酸產品系列為生產具有良好流體性能的含高固形物的塗料提供了機會；
9) 乳酸具有清潔去垢等作用，用於洗滌清潔產品比傳統的有機除垢劑性能更佳，因此它可應用於眾多除垢產品中。如：廁所，浴室，咖啡機的清潔劑。乳酸具有抗微生物性，當它與其他抗微生物劑如乙醇配合使用，可產生協同作用。
化妝品業
1) 由於L-乳酸是皮膚固有天然保濕因子的一部分被廣泛用作許多護膚品的滋潤劑。L-乳酸是最有效的一種 AHA 且刺激性甚微；
2) 由於 L-乳酸天然存在於頭發中，作用是使頭發表面光澤亮麗，因此乳酸常作為各種護發產品的 pH 調節劑；
3) 乳酸可作為保濕劑用於各種浴洗用品中，如私處沐浴液，條狀肥皂和潤膚蜜。在液體肥皂，香皂和香波中可作為 pH 調節劑。此外，乳酸添加在條狀肥皂中可減少儲藏過程中水分的流失，因而防止肥皂的乾裂。
農業畜業
1) 光學純度高達 99% 以上的乳酸，在農葯方面可用於生產緩釋農葯，例如除草劑，具有對農作物和土壤無毒無害且高效的特點；
2) 乳酸聚合物用於生產農用薄膜，可用其取代塑料地膜，能被細菌分解後讓土壤吸收，利於環保；
3) 乳酸還用於青飼料貯藏劑、牧草成熟劑；
4) 在豬禽飼料中作為生長促進劑。乳酸可以降低胃內的 pH 值，起到活化消化酶、改善氨基酸消化能力的作用，並對腸道上皮的生長有好處。小豬在斷乳後的幾個星期餵食含有酸化劑的飼料，其在斷乳期間的體重可以增加 15%；
5) 乳酸抑制微生物的生長。哺乳期的小豬會染上由大腸桿菌和沙門氏菌引起的疾病，在飼料中加入乳酸能防止小豬下胃腸道中病原菌生長；
6) 乳酸可以作為飼料的防腐劑並增進飼料、穀物和肉類加工產品副產品的微生物穩定劑；
7) 在家禽和小豬的飲用水中加入乳酸，可以有效地抑制病原菌的生長，動物體重增加速度提高。
毒性防護 純品無毒。其鹽類只要不是重金屬鹽也無毒。對大鼠經口LD50為3730mg/kg。
10網路語言
相對於蛋疼而言，為表達相同的意思，一般理解為「無聊，悠閑」。女網友可以使用「乳酸」一詞，以避免出現「你有蛋嗎」一類的質疑。
11人與乳酸
對於人的身體來說，乳酸是疲勞物質之一，是身體在保持體溫和肌體運動而產生熱量過程中產生的廢棄物。我們身體生存所需要的能量大部分來自於糖分。血液按照需要把葡萄糖送至各個器官燃燒，產生熱量。這一過程中會產生水、二氧化碳和丙酮酸，丙酮酸和氫結合後生成乳酸。如果身體的能量代謝能正常進行，不會產生堆積，將被血液帶至肝臟，進一步分解為水和二氧化碳，產生熱量，疲勞就消除了。
如果運動過於劇烈或持久，或者身體分解乳酸所必需的維生素和礦物質不足，那麼體內的乳酸來不及被處理，造成乳酸的堆積。乳酸過多將使呈弱鹼性的體液呈酸性，影響細胞順利吸收營養和氧氣，削弱細胞的正常功能。堆積乳酸的肌肉會發生收縮，從而擠壓血管，使得血流不暢，結果造成肌肉酸痛、發冷、頭痛、頭重感等。乳酸堆積在初期造成酸痛和倦怠，若長期置之不理，造成體質酸化，可能引起嚴重的疾病。
有些人用在假日睡懶覺來消除疲勞，這是無效的。用化學葯品也只能求得一時的緩解，而且有副作用。正確的方法是用恰當的運動，尤其是舒展運動來放鬆肌肉，促進血液循環，選擇均衡清淡的營養，尤其是富含維生素B族的食物，再加上高質量的睡眠，那將得到最好的效果。
12研究新解
在強烈運動的過程中人體需要大量能量。這時人體內乳酸的生產比組織移走乳酸的速度高，組織內的乳酸濃度提高。這個過程的意義在於重建糖酵解所需要的煙醯腺嘌呤二核苷酸（NAD）來保持三磷酸腺苷生產，並為運動提高源源不斷的能量，該過程可以描述為[5]：
丙酮酸 + NADH + H → 乳酸 + NAD
不像一般錯誤的描述乳酸濃度的上升本身並不導致酸中毒，它也不是肌肉酸痛的原因。在人體內乳酸無法釋放質子，因此沒有酸性。對人體內糖酵解途徑的分析證明這個過程不會導致酸中毒。強烈運動時造成的酸中毒有另一個原因。
在三磷酸腺苷被分裂釋放能量是它釋放一個質子。這些質子是導致酸中毒的原因。在強烈運動時有氧新陳代謝無法保障三磷酸腺苷的生產，因此無氧新陳代謝開始。這個過程可以產生大量三磷酸腺苷，這些三磷酸腺苷在分解時釋放大量質子，降低組織內的pH值，造成酸中毒。這是強烈運動過程中肌肉酸痛的眾多原因之一。有人認為通過強離子濃度梯度乳酸可以造成酸中毒，但是對這個過程的研究還非常不完善，因此它是否存在還不清楚。
Ⅲ 如何測定乳酸菌的含量
菌種的分離 取lmL鹵汁以10倍遞增稀釋方法（一份酸奶，九份無菌水，再取一份第一隻管中溶液，加九份無菌水，依次類推），將其稀釋至1/10～10的-10次冪（我打不上去），然後從不同濃度稀
釋液中分別取lmL傾注在平皿中，再倒入培養基相混合，待培養基凝固後倒置於30~C恆溫下
培養48h。挑取長勢良好的單個茵落劃線分純，直至純化(茵落單個大小一致，革蘭氏染色鏡
檢，茵體一致)。結果分離得到3株不同菌株，分別編號為菌株1、菌株2、菌株3。再分別轉移
到試管斜面上進行保存。
分離用培養基：牛肉膏5g，蛋白腖10g，氯化鈉5g，蒸餾水1 000 mL，瓊脂20g，pH7．0—7．2
；保存用斜面培養基：酵母膏1％ ，碳酸鈣2％ ，葡萄糖1％ ，瓊脂2％ ，pH 7．0。
培養條件
將分離出的菌株1、菌株2、菌株3分別接種在上述4種不同的培養基上，
在30。【=恆溫條件下培養48h後觀察並測定其培養結果。
測定方法 菌落總數採用逐級稀釋法來計數；pH值用pHS一2C酸度計測定；乳酸定性
及含量測定依據食品檢驗技術
1I．2．1乳酸菌的分離與篩選的試驗程序 自然發酵酸奶---稀釋---培養---挑起單菌落染色、鏡檢一挑
選革蘭氏陽性球菌單菌落一Ⅲ號培養基一挑選溶鈣圈大的球菌反復在Ⅲ號培養基上幾次純化篩選一單菌落優
良菌株一試管穿刺低溫保存。
1．2 1．2 乳酸菌的鑒定 用光學顯微鏡、放大鏡進行乳酸菌的形態特徵鑒定。生理生化特徵鑒定：產乳
酸定性試驗——乳酸紙層析法0- 、過氧化氫酶(接觸酶)反應�6�8、明膠水解反應 、硫化氫反應 、乳酸菌
發酵營養型試驗0 、耐鹽、酸、溫度試驗。
1．2．I．3 乳酸菌的保存�6�8 採用定期移植低溫保藏法。培養基配方：葡萄糖1％ 、蛋白腖0 2％ 、
l(}l2PQ|0．2％、瓊脂20％、pH值7 0，分裝試管，121。c滅菌30min。將使用對數生長期後期的細胞進行穿刺
培養，然後密封存於冰箱玲藏室內(5qc左右)，2個月移植1次。
1．2．2 分離乳酸菌的生理特點試驗
1 2 2．1 最適生長溫度的測定OD值以同溫下不接種培養基作對照，定期取出接種培養基在721分光光度
計上，用最大吸收光波長 =6001RIifl測定。
1．2．2．2 生長周期的測定oD值(方法同上)；pH值：PHB一4pH計；可滴定酸(以乳酸計)：吸取ImL菌液
加入9Ⅱ1L蒸餾水，加入1～2滴酚酞，用0．1NNaOH滴定。
1．2 2．3 最適pH值的測試、最適鹽濃度的測試。
供試樣品及培養基
分離用樣品：酸奶、酸奶及西紅柿均為市售
分離用培養基：①BCP培養基：酵母膏2 5g，蛋白腖5g，葡萄糖5g，溴甲酚紫0 04g，瓊脂15g，
蒸槽水lO00ml，pH7 0；②MRS培養基見文獻 。
菌種保藏用培養基：脫脂乳培養基：新鮮牛乳離心去掉上層乳脂，下層奶液分裝試管，105℃
滅菌20mln。
菌利 鑒定用培養基見文獻 6。
1 2 方法
1 2 1 乳酸菌的分離純化 取泡菜汁、酸奶、西紅柿表面洗液進行梯度稀釋，分別用傾注法、塗布
法和劃線法在BCP和MRS培養基平板上進行菌種分離。挑取在BCP平板上有透明目的菌落，在
MRS平扳上有溶鈣圈的菌落，反復純化至純種，挑菌至脫脂牛奶試管中保存
1．2 2 乳酸菌復篩對初篩菌株進行革蘭氏染色，保留革蘭氏陽性菌株．並對其所產乳酸能力進
行定性、定量分析，篩選出產酸高的菌株保存，再把產酸高的菌株經蘿l、汁發酵 】，進一步選擇產
酸高、_l】味純正的菌株保存鑒定
1 2 3 乳酸定性測定果用紙層析法。溶劑系統為乙醇：濃氨水：水=80：5：15，顯色劑為0 04％
的溴甲酚紫酒精溶液。層析時將乳酸、檸檬酸配成1％ 的標准溶液，兩種標准溶液 及乳酸發酵液
均點樣3 ．上行層析，顯色與標准樣比較
1．2 4 乳酸的定量測定採用氣相色譜法，利用苄酯化法制備乳酸衍生物，將待測乳酸菌株在產
酸培養基內37"C培養3d，離心。取上清液剃備衍生物，氣相色譜分析含量。氣相色譜工作條件為：
EGS色譜柱，柱溫160'C，氣化溫度180'17．，檢測器溫度l70"C，載氣為N，。
1．2 5 菌種鑒定根據《簡明第八版伯傑細菌鑒定手冊》 和《一般細菌常用鑒定手冊》[6 對復篩
出的菌株的形態、生理生化、碳源利用等方面進行系統鑒定，並提取乳酸菌株DNA，採用熔鏈溫度 .
Ⅳ 乳酸菌的鑒定方法
1.形態和培養特徵觀察
採用牛肉膏蛋白腖培養基,將已純化後的甘油菌種活化後於37℃下培養20～24h ,並進行革蘭氏染色及菌體形態和菌落特徵的觀察。染色方法參照微生物鑒定實驗指導
2.生長條件試驗
(1)耐鹽性試驗(NaCl 濃度:0. 85 、1. 20 和1. 71) (mol/ L) ;
(2)耐酸鹼試驗(p H :4. 3 、5. 7 、6. 8 、8. 4 、8. 6 和8. 7) ;
(3)溫度梯度試驗(溫度: 10℃、30℃、40℃、50℃、55℃、60℃和65℃) 。
分別將參試菌接種於以上處理的液體培養基中培養48 h ,記錄生長狀況。
3.生理生化試驗
⑴過氧化氫酶測定
將實驗菌接種於PGY培養基斜面上,37℃培養20h—24h,取一環接種的培養物,塗於干凈的載玻片上,然後在其上滴加3%－—15%的過氧化氫,有氣泡則為陽性反應,無氣泡為陰性反應。
⑵葡萄糖產酸產氣實驗
在PY基礎培養基內加入30g葡萄糖和5%吐溫-80,1.6g/100mL的溴甲酚紫1.4mL作指示劑, 在培養基內放置一小倒管,分裝試管置37℃培養24h, 經培養後,指示劑變黃表示產酸,倒管內出現氣泡,表示產氣。
⑶澱粉水解實驗
接種新鮮的菌種於含有0.5g可溶性澱粉的PY基礎培養基中,取少許培養液於比色盤內,同時取未接種的培養液作對照,分別在其中加入盧哥氏碘液.不顯色表示澱粉水解,顯藍黑色或藍紫色時,表示澱粉未水解或水解不完全。
⑷明膠液化實驗
將實驗菌接種於明膠基礎培養基中,置37℃培養,以一支未接種的試管作為對照。將接種的和未接種的對照管置於冰箱或冷水中,等待對照管凝固後記錄實驗結果,反復觀察對比多次。如對照管凝固時,接種管液化為陽性反應,凝固為陰性反應
⑸甲基紅（M.R）試驗
接種實驗細菌於PYG培養基，於37℃培養2天後，於培養物中加入幾滴甲基紅酒精溶液，如呈紅色，表示陽性。
⑹乙醯甲基甲醇V-P實驗
接種新鮮的實驗菌種於培養基中, 37℃培養2天後,取培養液1mL在其中
加入1ml 10％的NaOH，混勻，再加入3－4滴2%氯化鐵溶液。數小時後，培養基表面的下層出現紅色者，為陽性
⑺檸檬酸鹽
取幼齡菌種接種於檸檬酸鹽斜面培養基上，適溫培養3－7天，培養基呈鹼性（藍色）者為陽性反應，不變者則為陰性
⑻酪素水解試驗
牛奶平板的制備：取5g脫脂奶粉加入50mL蒸餾水中（或用50mL脫脂牛奶），另稱1.5g瓊脂溶於50mL蒸餾水中，將兩液分開滅菌。待冷至45－50℃時，將兩液混勻倒平板，即成牛奶平板。將平板倒置過夜，使表面水分乾燥，然後將菌種點接在平板上，每皿可點接3－5株菌。適溫培養1、3、5天，記錄菌落周圍和下面酪素是否已被分解而呈透明。配製該培養基時，切勿將牛奶和瓊脂混合滅菌，以防牛奶凝固
⑼厭氧生長測定
將菌種接入營養肉湯平板後,用密封帶包好放入CO2培養箱37℃培養2天後,觀察生長情況,生長則為陽性
(10)厭氧硝酸鹽產氣
接種封油：以斜面菌種用接種環接種後，用凡士林油（凡士林和液體石蠟為1:1）封管，封油的高度約1厘米。必須同時接種不含有硝酸鉀的肉汁腖培養液作對照。
觀察結果：培養2－7d，觀察在含有硝酸鉀的培養基中有否生長和產生氣泡。如有氣泡產生，表示反硝化作用產生氮氣，為陽性反應。但如不含硝酸鉀的對照培養基也可產生氣泡，則只能按可疑或陰性處理。
(11)石蕊牛奶的反應
牛奶中主要含有乳糖和酪蛋白，在牛奶中加入石蕊是作為酸鹼指示劑和氧化還原指示劑。石蕊在中性時呈淡紫色，酸性時呈粉紅色，鹼性呈藍色，還原時則自上而下地褪色變白。觀察其產酸、產鹼、腖化、酸凝固、凝乳酶凝固、還原情況
(12)糖發酵實驗
將需要測定的糖或醇類等碳水化合物加入PY基礎培養基中,按表分裝含5mL培養基的試管.分別取0.2mL,被鑒定菌株接到滅菌後的碳水化合物培養基中37℃培養24h,振盪培養。檢測時取培養液少許置於比色盤內,同時取未加碳水化合物的PY培養液作為對照,滴加試劑比較顏色的變化,記錄產酸的強弱.
附一些培養基：
①PY培養基（100mL）：蛋白腖1.0g,酵母提取物1.0g,無機鹽溶液4.0mL[鹽溶液成分:無水CaCl2 0.2g,MgSO4 20.0g ,K2HPO4 1.0g, ,KH2PO4 1.0g,NaHCO3 10.0g,NaCl 2.0g](將CaCl2和MgSO4一起溶解於300mL蒸餾水中,再加500mL蒸餾水,一邊攪拌一邊緩慢加入其他鹽類.繼續攪拌直到全部溶解,加蒸餾水定容至1000mL,混合後貯備於4℃)
②PYG培養基:PY在基礎培養液內加入1.0g葡萄糖
③營養明膠 蛋白腖5g、牛肉膏3g、明膠120g、蒸餾水1000mL、pH6.8～7.0；加熱溶解、校正至pH7.4～7.6，分裝小管，121℃高壓滅菌10min，取出後迅速冷卻，使其凝固。復查最終pH應為6.8～7.0
④檸檬酸鹽斜面培養基：檸檬酸鈉 3g NH4H2PO4 1g MgSO4 0.2g
K2HPO4 1g NaCl 5g 瓊脂15—20g 水1000mL 加熱溶解後，調pH至7，再加入1.6%溴麝香草酚藍指示劑10mL,培養基呈綠色，分裝試管，每管5mL，121滅菌30min
⑤含硝酸鉀的營養肉湯 加入2g硝酸鉀入營養肉湯
4.16S rDNA 序列分析
這個LZ另外查好了，很多學問。
5.生長曲線
活菌計數方法：採用塗布法,進行菌落計數，每隔一段時間（2-4小時）測
Ⅳ 乳酸含量檢測方法，EDTA鈣定法
EDTA定鈣法是目前測定發酵液中乳酸含量的主要方法.本文採用對照乳酸結合高效液相色譜法對該方法的測定條件進行了研究.結果表明,發酵液中的乳酸必須預先用過量的 CaCO3中和,再用 NaOH調節 pH至 12.0以上,以鈣黃綠素為指示劑時,測定結果的重復性和回收率較好.HPLC法與 EDTA定鈣法測定結果比較,發現 EDTA定鈣法測定的乳酸含量偏大,但可通過適當校正用於生產過程檢測.
Ⅵ 聽說有細胞抗氧化水能喝，是如何細胞抗氧化法
一種基於細胞水平測定乳酸菌抗氧化活性的方法,屬於微生物技術領域.本發明在細胞水平利用96孔酶標板的全波頻熒光掃描型酶標儀代替常規的分光光度計測定處理後樣品的抗氧化能力,利用熒光探針和自由基引發劑能夠在1h的時間內,對乳酸菌菌體批量進行快速,准確的測定,從而從細胞水平為乳酸菌的抗氧化活性研究提供一個快速檢測方法,利用本發明可在極短的時間內批量測定乳酸菌不同菌株的抗氧化能力,能夠迅速准確的反映乳酸菌菌體的抗氧化水平.
人間充質幹細胞內源性抗氧化水平影響幹細胞存活的分子機制。方法:利用細菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/雙氧水(H2O2)協同誘導了一個與體內環境相似的體外氧化炎症壓力環境。應用依達拉奉作為抗氧化劑和馬來酸二乙酯(diethylmaleate,DEM)作為促氧化劑預處理人臍帶間充質幹細胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UCMSCs)後的不同時間點,測定幹細胞存活能力、細胞凋亡和內源性抗氧化水平的動態變化。其中,採用免疫熒光染色法和caspase-3/7活性法測定細胞凋亡的變化;用MTT評估細胞活性;用活性氧(reactive oxygen species,ROS)染色和GSH/GSSH比值顯示細胞內抗氧化水平。然後,用定量PCR系統檢測細胞抗凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Bax-1的m RNA表達水平變化;用蛋白免疫印跡法(Western blot,WB)測定內源性抗氧化酶中超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase-1,SOD1)、過氧化氫酶(catalase,CAT)和MAPK、PKC通路各蛋白的表達變化;用試劑盒測定Nrf2轉錄活性,以期對調控幹細胞凋亡和內源性抗氧化水平的分子機制進行探究。最後,用PD98059和staurosporine分別阻斷MAPK和PKC通路;用基因沉默的方法阻斷Nrf2的抑制蛋白質Keap1的表達,進一步驗證MAPK-PKC-Nrf2通路在影響幹細胞內源性抗氧化水平中的作用。結果:(1)與對照組比較,LPS/H2O2處理組幹細胞活性降低(P0.05);與LPS/H2O2組比較,促氧化劑DEM預處理後在所有時間點都進一步降低了幹細胞活性(P0.05);與LPS/H2O2組比較,兩種不同濃度的依達拉奉處理組(Eda)均提高了LPS/H2O2刺激下幹細胞的增殖活性,差異均有統計學意義(P0.05),且兩組Eda濃度間比較無統計學差異(P0.05);此外,依達拉奉預處理改善了由LPS/H2O2刺激導致的h UCMSCs細胞形態的異常,而DEM則進一步加劇該異常;(2)結果顯示與LPS/H2O2處理組比較,依達拉奉預處理組的10μM和20μM濃度組均降低了h UCMSCs細胞凋亡率,DEM預處理組增高了h UCMSCs細胞凋亡率,二者均有統計學意義(P0.05;P0.001);caspa se-3/7的活性變化與細胞凋亡率變化一致;q PCR結果顯示,與對照組比較,在處理後12、24、36、48、60、72小時(h)後,LPS/H2O2組的抗凋亡蛋白Bcl-2的m RNA表達率低,而促凋亡蛋白Bax1的m RNA表達率增高(P0.001);不同濃度的依達拉奉預處理後,可以抵消這種作用;DEM預處理後,進一步降低了Bcl-2和提高了Bax1的水平;(3)從處理後24h開始,與對照組比較,LPS/H2O2組培養基中DCFH-D A(ROS熒光染色劑)信號更明顯,依達拉奉預處理組減弱,而DEM預處理組加劇;GSH/GSSG比值變化與ROS表達情況相符:與對照組比較,在處理後12、24、36、48、72h時,LPS/H2O2組均引起胞內GSH/GSSG比率降低,差異均有統計學意義(P0.001);這種降低在依達拉奉組(10μM和20μM)被抵消,而在DEM組更低;(4)Western Blot結果顯示,與對照組比較,LPS/H2O2處理後的12、24、36、60和72 h,過氧化氫酶(CAT)和超氧化物歧化酶1(SOD1)蛋白的表達顯著降低,尤其是SOD1的表達;與LPS/H2O2組比較,依達拉奉預處理組蛋白表達高,DEM預處理組蛋白表達低(P0.05);(5)測定MAPK通路結果顯示:與對照組比較,LPS/H2O2處理組在大部分時間點表達更高水平的磷酸化的p38MAPK和ERK1/2。依達拉奉預處理組及DEM預處理組分別可以消除和增強LPS/H2O2的該效應;用PD98059和PKC抑制劑分別阻斷MAPK和PKC通路後,20μM依達拉奉組對細胞活性降低的升高作用被消除;應用基因沉默Keap1可以增強Nrf2的活性(P0.001),並可以部分逆轉DEM對細胞活性的影響。結論:(1)抗氧化劑依達拉奉預處理改善了氧化炎症刺激下h UCMSCs的形態學和生存能力;(2)抗氧化劑依達拉奉預處理後通過上調抗凋亡基因Bcl-2 m RNA的水平和下調促凋亡基因Bax-1 m RNA水平降低h UCMSCs的凋亡率;(3)抗氧化劑依達拉奉預處理後的h UCMSCs,通過修復氧化炎症刺激導致的內源性抗氧化酶活性損傷,提高幹細胞內源性抗氧化水平;(4)幹細胞部分通過調控自身MAPK-PKC-Nrf2通路的變化調節內源性抗氧化水平。
Ⅶ 乳酸菌的檢測方法和培訓資料！（越詳細越好）
摘要：
〔目的〕探索用細菌學方法檢測酵母浸出粉中維生素B族的存在。〔方法〕採用五種乳酸菌接種於含有被測的五種中外產的酵母粉培養基，用細菌學靈敏度、菌落計數和菌落直徑測定的方法進行比較。〔結果〕經統計學處理，生長波度、菌落計數和菌落直徑試驗結果說明五種酵母粉之間有顯著性差異，而靈敏度試驗則未見顯著性差異。〔結論〕酵母浸出粉中維生素B族生長因子的細菌學實驗方法估計，可以參考生長濃度、菌落計數和菌落直徑等綜合性實
指標。
關鍵詞：
乳酸菌；酵母浸出粉；維生素B族生長因子；生長濃度；菌數計數；菌落直徑
看到的
不知是不是想要的
還有另個
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFD2002-RPGY200201006.htm
乳酸菌飲料中乳酸菌的微生物學檢驗
1 主題內容與適用范圍
本標准規定了乳酸菌飲料中乳酸菌檢驗的技術要求。
本標准適用於以鮮乳、乳粉或輔以大豆等為原料，經乳酸菌發酵加工製成的具有相應風味的活性乳酸菌飲料。
2 引用標准
GB 4789.28 食品衛生微生物學檢驗 染色法、培養基和試劑
3 術語
乳酸菌：一群能分解葡萄糖或乳糖產生乳酸，需氧和兼性厭氧，多數無動力，過氧化氫酶陰性，革蘭氏陽性的無芽胞桿菌和球菌。
乳酸菌菌落總數：檢樣在一定條件下培養後，所得1mL檢樣中所含乳酸菌菌落的總數。
4 設備和材料
4.1 溫箱：36±1℃。
4.2 冰箱：0～4℃。
4.3 恆溫水浴：46±1℃。
4.4 電爐：可調式。
4.5 吸管：容量為1，10和25mL。
4.6 廣口瓶或三角瓶：容量為500mL。
4.7 平皿：直徑為9cm。
4.8 試管：18×180mm。
4.9 顯微鏡。
5 培養基和試劑
5.1 改良TJA培養基(改良番茄汁瓊脂培養基)。
5.2 改良MC培養基(Modified Chalmers培養基)。
5.3 0.1%美蘭牛乳培養基。
5.4 6.5%氯化鈉肉湯。
5.5 pH9.6葡萄糖肉湯。
5.6 40%膽汁肉湯。
5.7 澱粉水解培養基。
5.8 精氨酸水解培養基。
5.9 乳酸桿菌糖發酵管。
5.10 七葉苷培養基。
5.11 革蘭氏染色液：按GB 4789.28規定執行。
5.12 3%過氧化氫溶液：按GB 4789.28規定執行。
5.13 蛋白腖水、靛基質試劑：按GB 4789.28規定執行。
5.14 明膠培養基：按GB 4789.28規定執行。
5.15 硝酸鹽培養基、硝酸鹽試劑：按GB 4789.28規定執行。
5.16 生理鹽水：定量分裝於三角瓶和試劑管內滅菌。
6 乳酸菌菌落總數的測定
6.1 檢驗程序
乳酸菌菌落總數檢驗程序如下：
（略）
6.2 操作步驟
6.2.1 以無菌操作將經過充分搖勻的檢樣25mL(或25g)放入含有225mL滅菌生理鹽水的滅菌廣口瓶內作成1∶10的均勻稀釋液。
6.2.2 用1mL滅菌吸管吸取1∶10稀釋液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(注意吸管尖端不要觸及管內稀釋液)。
6.2.3 另取1mL滅菌吸管，按上述操作順序，作10倍遞增稀釋液，如此每遞增一次，即換用1支1mL滅菌吸管。
6.2.4 選擇2～3個以上適宜稀釋度，分別在作10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液於滅菌平皿內，每個稀釋度作兩個平皿。
6.2.5 稀釋液移入平皿後，應及時將冷至50℃的乳酸菌計數培養基(改良TJA或改良MC)注入平皿約15mL，並轉動平皿使混合均勻。同時將乳酸菌計數培養基傾入加有1mL稀釋液檢樣用的滅菌生理鹽水的滅菌平皿內作空白對照，以上整個操作自培養物加入培養皿開始至接種結束須在20min內完成。
6.2.6 待瓊脂凝固後，翻轉平板，置36±1℃溫箱內培養72±3h取出，觀察乳酸菌菌落特徵(見表1)，選取菌落數在30～300之間的平板進行計數。計算後，隨機挑取5個菌落數進行革蘭氏染色，顯微鏡檢查並做過氧化氫酶試驗。革蘭氏陽性，過氧化氫酶陰性，無芽胞的球菌或桿菌可定為乳酸菌。根據證實為乳酸菌菌落計算出該皿內的乳酸菌數，然後乘其稀釋倍數即得每毫升樣品中乳酸菌數。例如，檢樣10－4的稀釋液在改良TJA瓊脂平板上，生成的可疑菌落為35個，取5個鑒定，證實為乳酸菌的是4個，則1mL檢樣中乳酸菌數為：
6.3 乳酸菌在改良TJA和改良MC培養基上菌落生長形態特徵見表1。
表1 乳酸菌在不同培養基上菌落特徵
（表略）
7 乳酸菌的鑒定
對上述分離到的乳酸菌需進行菌種鑒定時，則作以下試驗。
7.1 菌種制備：自平板上挑取菌落，接種於改良TJA或改良MC瓊脂斜面，於36±1℃，24～48h培養，刮取菌苔，分別進行下列試驗。
7.2 乳酸桿菌鑒定試驗：極少見還原硝酸鹽，不液化明膠，不產生靛基質和硫化氫。
7.3 常見乳桿菌屬內種的碳水化合物反應，見表2。
7.4 產乳酸的鏈球菌的鑒別試驗，見表3。
表2 常見乳桿菌屬內種的碳水化合物反應
（表略）
表3 乳酸的鏈球菌的鑒別表
（表略）
參考資料：http://www.hopebiol.com/asphtml/refere85.htm
Ⅷ 怎麼檢測細胞培養液中的乳酸含量
原代動物細胞培養： 1、實驗材料要新鮮,從活體分離材料後要低溫保存,並盡快進行細胞分離實驗. 2、無菌操作.操作時用的培養液,可加平時細胞培養液5倍含量的青鏈黴素. 3、用酶法分離細胞時,注意酶液的濃度和控制消化時間. 貼塊法分離細胞時,注意動作要輕柔,不要傷到細胞組織,組織塊邊緣盡量平整有利於細胞游離. 4、培養液的選擇.不同的細胞有對培養液中營養的要求不同,根據所分離細胞的特性選擇. 傳代細胞培養： 1、無菌操作 2、控制消化時間 3、及時關注細胞生長狀態
Ⅸ 如何檢驗酸奶中的乳酸菌要具體的實驗步驟和方法及原理
太麻煩的，要有條件，把樣品稀釋後，例如估計含乳酸菌的量，稀釋到每毫升大約30-300個左右，再用特殊的平板培養基，添加了1%碳酸鈣的平板培養基，採用傾注法與呈液體狀態的40度含碳酸鈣的瓊脂營養培養基混合，倒制於90毫米在小平皿中，培養後，長出菌落，同時，菌落周圍有透明圈的，就是乳酸菌，還可以計數，再剩稀釋倍數，還可得含量。