『壹』 核酸種類的檢測方法
現在一般使用高效液相色譜法來分析,常規的有紫外分光光度法,但是不如高效液相色譜法精確。
『貳』 核酸檢驗方法
核酸檢測具體流程如下:
1. 核酸提取
使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設備並按說明書操作。提取RNA時應注意防止RNA降解。DNA應置於-20℃保存,RNA和需長期保存的DNA應置於-80℃保存。
2. 逆轉錄合成cDNA
逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中,在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。建議使用商品化RT-PCR一步法試劑進行第一輪擴增反應。逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中,在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。使用商品化RT-PCR一步法試劑進行第一輪擴增反應。
3. PCR擴增反應(使用二次擴增的套式PCR擴增方法)
PCR反應需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶(如Taq酶等)、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板(DNA或cDNA)。在擴增儀中,按照設定的程序進行擴增。使用二次擴增的套式PCR擴增方法。
4. 擴增產物定性分析
擴增產物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法,與分子量標准比較,判斷擴增片段是否在預期的分子量范圍內。其它擴增產物分析方法還有限制性內切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。自動化核酸擴增儀使用酶聯比色分析或熒光探針雜交等原理測定。
5.結果判定和完成報告單
(1)實驗成立的條件:每一次檢測需同時做兩個陽性對照、兩個陰性對照,只有陽性對照擴增出預期的片段、陰性對照沒有擴增出任何片段、雙份平行樣品結果一致的情況下實驗才成立,可以作出核酸陽性或陰性反應結果的判定。
(2)HIV核酸檢測陽性:發現核酸陽性反應,應該重復採集樣品進行復測,復測結果呈核酸陽性反應則判定為核酸陽性,復測結果為核酸陰性反應則判為不確定結果,需進一步隨訪檢測。
(3)HIV核酸檢測陰性:只可報告本次實驗結果陰性。
(4)應在完成檢測後5個工作日內發出檢測報告。
『叄』 核酸檢測方法有哪些
核酸檢測主要是鼻拭子或咽拭子法,經由鼻孔或口腔插入取得上呼吸道分泌物標本後送實驗室檢測。核酸檢測主要是指目前對於新型冠狀病毒肺炎的一種確診的實驗手段,核酸檢測一般分為鼻拭子、咽拭子或者肺泡灌洗液以及痰液,通過呼吸道的標本,我們在實驗室里可以檢測2019新型冠狀病毒的核酸,從而作為臨床診斷的重要的依據。那臨床上目前最常採用的檢測方法是鼻拭子或者是咽拭子,操作的時候由醫護人員採用特製的長柄取樣的棉簽,經由鼻孔或者經由口腔插入到鼻腔及咽腔中,在咽喉壁或者鼻腔的粘膜上進行塗抹,取得上呼吸道分泌物標本,這個標本取出之後再送到實驗室進行相關的核酸檢測。在做的過程中患者不用緊張,可能會有輕微的不適例如惡心,相信配合好醫護人員的話,能夠很快完成這個檢查,不會給您帶來很大的影響。
『肆』 核酸含量的測定方法及原理都有哪些
核酸檢測的主要原理其實是反轉錄和聚合酶鏈式擴增反應。也叫做RT-PCR。目前對新型冠狀病毒進行的核酸檢測也主要採用此種方式。簡單來說就是採取患者鼻咽拭子、痰和其他下呼吸道分泌物、血液、糞便,檢測人員通過。核酸提取試劑盒提取患者標本里邊兒的核酸,然後把提取到的核酸放進檢測試劑中進行復制擴增。然後再根據檢測結果進行判斷如果是陰性代表沒有感染,如果是陽性代表有感染。目前對新型冠狀病毒核酸檢測會存在假陰性的可能,所以可以選擇多次測量。如果連續兩次核酸檢測為陰性,同時沒有臨床症狀可以排除感染,並且對已經感染了新型冠狀病毒肺炎的患者,如果連續兩次檢測核酸為陰性,注意間隔時間必須大於一天,同時臨床症狀緩解,影像學好轉也可以解除隔離。
『伍』 核酸檢測方法
核酸檢測採用咽拭子檢測,有口咽拭子采樣和鼻咽拭子采樣兩種方式。
口咽拭子采樣就是在咽喉部位用棉簽塗擦,刷取咽喉部位上皮細胞的檢測。受檢測者只要放鬆心情,張口發出「啊——」的聲音就可以了,檢測過程並沒有創傷風險,是非常安全的檢測。
檢測時可能會有惡心、想要嘔吐的不適感覺,不過這些不適症狀通常只需要半分鍾到兩分鍾左右就可以完全緩解了。鼻咽拭子采樣是將一根細棉簽深入鼻孔,從下鼻道深入抵達鼻咽後壁,然後捻轉棉簽取樣。棉簽進入鼻腔的深度約為鼻尖到耳垂的距離。
(5)核酸修飾的分析方法擴展閱讀:
核酸檢測相關知識:
核酸檢測是檢測病毒的方法,它可以更早發現感染。現在臨床中對乙肝、丙肝、艾滋病都開展了核酸檢測,可以在抗體產生前檢測到血液中是否存在病毒。而一些呼吸道疾病可以通過咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸檢測來判斷是否感染,以及推測是否具有傳染性。
季節性流感、禽流感、冠狀病毒感染等通過咽拭子檢測可以方便地判斷出上呼吸道是否存在病毒成份,從而判斷被檢測者是否屬於感染者。
新冠病毒的核酸檢測已經是比較成熟的檢測方法了,只要在咽喉部位擦拭幾秒鍾就可以採集到標本。通過分析判斷是否有新冠病毒的核酸成分,可以盡早發現感染者,甚至在感染者出現症狀前就可以檢測到陽性。
感染者經過隔離治療後咽拭子檢測陰性說明病毒已經清除,不具有傳染性了。目前兩次咽拭子核酸檢測陰性是確診病例和無症狀感染者解除隔離的標准之一。
『陸』 核酸檢測方法有哪些
核酸檢測採用咽拭子檢測,有口咽拭子采樣和鼻咽拭子采樣兩種方式。
口咽拭子采樣就是在咽喉部位用棉簽塗擦,刷取咽喉部位上皮細胞的檢測。受檢測者只要放鬆心情,張口發出「啊——」的聲音就可以了,檢測過程並沒有創傷風險,是非常安全的檢測。
檢測時可能會有惡心、想要嘔吐的不適感覺,不過這些不適症狀通常只需要半分鍾到兩分鍾左右就可以完全緩解了。鼻咽拭子采樣是將一根細棉簽深入鼻孔,從下鼻道深入抵達鼻咽後壁,然後捻轉棉簽取樣。棉簽進入鼻腔的深度約為鼻尖到耳垂的距離。
(6)核酸修飾的分析方法擴展閱讀:
核酸檢測相關知識:
核酸檢測是檢測病毒的方法,它可以更早發現感染。現在臨床中對乙肝、丙肝、艾滋病都開展了核酸檢測,可以在抗體產生前檢測到血液中是否存在病毒。而一些呼吸道疾病可以通過咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸檢測來判斷是否感染,以及推測是否具有傳染性。
季節性流感、禽流感、冠狀病毒感染等通過咽拭子檢測可以方便地判斷出上呼吸道是否存在病毒成份,從而判斷被檢測者是否屬於感染者。
新冠病毒的核酸檢測已經是比較成熟的檢測方法了,只要在咽喉部位擦拭幾秒鍾就可以採集到標本。通過分析判斷是否有新冠病毒的核酸成分,可以盡早發現感染者,甚至在感染者出現症狀前就可以檢測到陽性。
感染者經過隔離治療後咽拭子檢測陰性說明病毒已經清除,不具有傳染性了。目前兩次咽拭子核酸檢測陰性是確診病例和無症狀感染者解除隔離的標准之一。
『柒』 核酸由什麼組成
這是我給樓主查到的有關信息 希望能夠幫到您 o(∩_∩)o 核酸的化學組成�
核酸是生物體內的高分子化合物,包括dna和rna兩大類。�
一、元素組成�
組成核酸的元素有c、h、o、n、p等,與蛋白質比較,其組成上有兩個特點:一是核酸一般不含元素s,二是核酸中p元素的含量較多並且恆定,約佔9~10%。因此,核酸定量測定的經典方法,是以測定p含量來代表核酸量。�
二、化學組成與基本單位�
核酸經水解可得到很多核苷酸,因此核苷酸是核酸的基本單位。核酸就是由很多單核苷酸聚合形成的多聚核苷酸。核苷酸可被水解產生核苷和磷酸,核苷還可再進一步水解,產生戊糖和含氮鹼基(圖15-1)。�
圖15-1核酸的組成��
核苷酸中的鹼基均為含氮雜環化合物,它們分別屬於嘌呤衍生物和嘧啶衍生物。核苷酸中的嘌呤鹼(purine)主要是鳥嘌呤(guanine,g)和腺嘌呤(adenine,a),嘧啶鹼(pyrimidine)主要是胞嘧啶(cytosine,c)、尿嘧啶(uracil,u)和胸腺嘧啶(thymine,t)。dna和rna都含有鳥嘌呤(g)、腺嘌呤(a)和胞嘧啶(c);胸腺嘧啶(t)一般而言只存在於dna中,不存在於rna中;而尿嘧啶(u)只存在於rna中,不存在於dna中。它們的化學結構請參見圖示。�
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核酸中五種鹼基中的酮基和氨基,均位於鹼基環中氮原子的鄰位,可以發生酮式一烯醇式或氨基�亞氨基之間的結構互變。這種互變異構在基因的突變和生物的進化中具有重要作用。
有些核酸中還含有修飾鹼基(modified component),(或稀有鹼基,unusual com ponent),這些鹼基大多是在上述嘌呤或嘧啶鹼的不同部位甲基化(methylation)或進行其它的化學修飾而形成的衍生物。一般這些鹼基在核酸中的含量稀少,在各種類型核酸中的分布也不均一。dna中的修飾鹼基主要見於噬菌體dna,如5-甲基胞嘧啶(m5c),5-羥甲基胞嘧啶hm5c;rna中以trna含修飾鹼基最多,如1-甲基腺嘌呤(m1a),2,2一二甲基鳥嘌呤(m22g)和5,6-二氫尿嘧啶(dhu)等。�
嘌呤和嘧啶環中含有共軛雙鍵,對260nm左右波長的紫外光有較強的吸收。鹼基的這一特性常被用來對鹼基、核苷、核苷酸和核酸進行定性和定量分析。�
核酸中的戊糖有核糖(ribose)和脫氧核糖(deoxyribose)兩種,分別存在於核糖核苷酸和脫氧核糖核苷酸中。為了與鹼基標號相區別,通常將戊糖的c原子編號都加上「′」,如c1′表示糖的第一位碳原子。�
戊糖與嘧啶或嘌呤鹼以糖苷鍵連接就稱為核苷,通常是戊糖的c1′與嘧啶鹼的n1或嘌呤鹼的n9相連接。�
核苷中戊糖的羥基與磷酸以磷酸酯鍵連接而成為核苷酸。生物體內的核苷酸大多數是核糖或脫氧核糖的c5′上羥基被磷酸酯化,形成5′核苷酸。核苷酸在5′進一步磷酸化即生成二磷酸核苷和三磷酸核苷。以核糖腺苷酸為例,除amp外,還有二磷酸腺苷(adp,adenosine 5′-diphosphate)和三磷酸腺苷(atp,adenosine 5′-triphosphate)兩種形式。核苷酸的二磷酸酯和三磷酸酯多為核苷酸有關代謝的中間產物或者酶活性和代謝的調節物質,以及作為核苷酸有關代謝的中間產物或者酶活性和代謝的調節物質,以及作為生理儲能和供能的重要形式。�
核苷酸還有環化的形式。它們主要是3′,5′-環化腺苷酸(camp,adenosine 3′,5′-cyclicmonophosphate)和3′,5′-環化鳥苷酸(cgmp,guanosine 3′,5′-cyclic monophosphate),化學結構如下。環化核苷酸在細胞內代謝的調節和跨細胞膜信號中起著十分重要的作用。
『捌』 核酸分析技術有哪些
總的來說包括了核酸的分離、提純,核酸的擴增,檢測,定性與定量分析等。下面以DNA為例說一下相關的概念。
1、DNA的分離提純就那些試劑,那些步驟,網上一大堆視頻的,自己去找吧。
2、擴增一般指的是PCR,需提供引物(引物具有特異性,比如說乙肝病毒基因的引物只能擴增乙肝病毒基因)、酶、底物等,三個流程一個循環:變性、復性、延長。
3、檢測一般有紫外分光光度法,電泳分析,雜交分析。
(1)紫外分光光度法:此法的原理涉及到一些光學的知識,可以查詢相關書籍以能更好的理解,可以做定量分析,分為單組份分析和多組分分析。
單組份分析有:
1)標准曲線法:用不通濃度的標准溶液,同一條件下測定吸光度A,以吸光度A為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標准曲線,根據測得的待測樣品吸光度,從標准曲線中便可知溶液濃度。
2)標准對照法:標准溶液濃度a,吸光度A,待測樣品吸光度B,則根據朗-比定律有待測樣品濃度為:B*a/A。
3)吸光系數法:吸光系數K,測得待測樣品吸光度A,溶液的厚度d,根據朗-比定律,則待測樣品的濃度為:A/(K*d)。
多組分分析沒研究過了,自己查查相關資料吧。
(2)電泳分析是根據DNA的分子量和結構不同而在電場中的移動速度不同的原理,電泳的時候需要加MARKER或者已知的基因的片段進行測量。說說MARKER的概念吧,MARKER是由一些列一定梯度的基因片段組成的基因混合物,梯度一般有100bp,200bp,500bp等,MARKER電泳過後便形成很多條距離相等的條帶,每兩條條帶之間的距離為前面提到的梯度值,MARKER用來做標准參考,具有標尺的作用
『玖』 核酸和蛋白質序列分析的內容和方法有哪些
核酸和蛋白質序列分析的內容和方法有哪些
蛋白質結構分析方法:X射線晶體衍射分析和核磁共振
x 射線衍射法的解析度可達到原子的水平,使它可以測定亞基的空間結構、各亞基間的相對拓撲布局,還可清楚的描述配體存在與否對蛋白質的影響。多維核磁共振波譜技術已成為確定蛋白質和核酸等生物分子溶液三維結構的唯一有效手段。NM R技術最大的優點不在於它的解析度,而在於它能對溶液中和非晶態的蛋白質進行測量。
蛋白質的序列結構測定:
1.到目前為止,最經典的蛋白質的氨基酸序列分析方法是,sarI等人基於Edman降解原理研製的液相蛋白質序列儀,及後來發展的固相和氣相的蛋白質序列分析儀。
2.質譜:早期的質譜電離的方式主要是電子轟擊電離(EI),它要求樣品的揮發性好,一般與
氣相色譜聯用。但使用G C/M S分析,肽的長度受到限制,只能分析小的肽段。近年來,
在離子化的技術及儀器方面取得了突破性進展,使得質譜所能測定的分子量的范圍大大超
出了10k u。因此,軟離子化技術、基質輔助的激光解吸/離子化(MALDI)和電噴霧離子化(E SI)顯得尤為有前途。通過串聯質譜技術(MS/MS)和源後衰減基質輔助的激光解吸/離子化(PSD—MAIDI—MS),人們就可以從質譜分析中獲得肽及蛋白質的結構信息。
『拾』 如何對一條全新的的核酸序列進行功能分析
有兩種方法:一、可以提取產生這種蛋白的細胞總RNA,逆轉錄,做成cDNA文庫。再把這種蛋白從兩端各測一段序列,根據密碼子表再翻譯成DNA序列(不止一種),根據這些序列全部做成DNA探針,再結合,然後把該蛋白的基因調出來。二、提取該蛋白,用兔子/小鼠/綿羊等哺乳動物做成該蛋白的抗體,再用抗體去調出正在翻譯的該蛋白的mRNA序列,因為在翻譯過程中,正在翻譯的蛋白由核糖體介導與該蛋白的mRNA相連,調出後就好辦了