葯物分析tlc雜質檢查方法

⑴ 利用薄層色譜對葯物進行鑒別和雜質檢查時應注意哪些操作事項

薄層色譜法(The layer chromatography，TLC)是將固定相均勻的塗布在具有光潔表面的玻璃、塑料或金屬板上形成薄層，在此薄層上進行色譜分離的方法，它屬於平板色譜，是一種常用的色譜分離方法。
TLC法被許多國家葯典用於葯物中雜質的檢查、葯物分析等方面，且是目前葯典中收載最多的鑒別與有關物質檢查方法之一，具有設備簡單、操作簡便、分離速度快，靈敏度和解析度較高等優點。
而薄層色譜在葯物分析中，則常用薄層色譜掃描法，其主要用於以下幾個方面：
1、中葯材與中成葯的鑒別與成分分析
2、 合成葯物及其制劑分析
3、葯物代謝研究

4、抗菌素分析
5、中葯的TLC指紋圖譜鑒別
高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又稱「高壓液相色譜」、「高速液相色譜」、「高分離度液相色譜」、「近代柱色譜」等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，採用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離後，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。該方法已成為化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術應用。
是20世紀70年代迅速發展起來的一種高效、快速、高選擇性、高靈敏度的新型分離分析技術，是經典液相色譜的發展。
高效液相色譜法在葯物分析中的應用主要是鑒別相關物質、檢查葯物中有關物質的含量限度，測定有效成分或主要成分含量。
1、在葯物鑒別中的應用
在HPLC法中，保留時間與組分的結構和性質有關，是定性的參數，可用於葯物的鑒別，在中國葯典中就有大量的葯物採用此法進行鑒別。
2、在雜質檢查中的應用
歷年來各國葯典中收載了多種葯物採用HPLC法進行雜質檢查的方法，並且可採用HPLC法進行雜質檢查的葯物種類在逐年頒布的葯典中有所增加。
3、在含量測定中的應用
用高效液相色譜法測定合成葯及其制劑的含量，可以消除葯物中的雜質，制劑中的附加劑及共存葯物的干擾。

⑵ 分析方法學驗證之(三):檢測限和定量限

這一期我們就來說說方法的靈敏度。

靈敏度（Sensitivity）是指某方法對單位濃度或單位量待測物質變化所引起的響應量變化程度。它可以用儀器的響應值或其他指示量與對應的待測物質的濃度或量之比來描述。它是分析方法的基本屬性，標志著方法的檢出能力，包括了檢測限和定量限。

定義和分類

檢測限（Limit of Detection，LOD）：系指試樣中被測物能被檢測出的最低量。檢測限僅作為限度試驗指標和定性鑒別的依據，沒有定量意義。因此需要注意的是在檢出限附近不能進行准確的定量，且報告未檢出時應附上方法的檢測限。

定量限（Limit of Quantitation，LOQ）：系指試樣中被測物能被定量測定的最低量。對於微量或痕量葯物分析、定量測定葯物雜質和降解產物時，應確定方法的定量限。需要注意的是定量限的測定結果應符合準確度和精密度要求。同時定量限的濃度通常應小於等於報告限的濃度，以確保報告數值的准確可靠。

另外需要注意的是：

• 定量限/檢測限有些地方會翻譯為Quantitation limit，QL和Detection Limit，DL，這個根據各個公司自己規定執行即可。

• 在一些國外的質檢報告（COA）中可能會出現LOD表示為Loss On Drying（乾燥失重）的縮寫，需要注意區分。

• 本文討論的檢測限均指的是分析方法的檢測限，對於儀器檢出限和方法檢出限的區別，我們後面再細細討論。

做法和要求

1）直觀法

用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。

如薄層色譜TLC法，通過配製一系列已知濃度的樣品來試驗，直至能夠明顯觀察到斑點。

2）基於響應值標准偏差和標准曲線斜率法

通過多次空白測定和標准曲線的建立，分別獲得響應值偏差和標准曲線的斜率來計算得到最低濃度。計算公式為：

• 峰峰漂移修正間的雜訊（PtoP）

• 用ASTM 方法檢測的雜訊 (ASTM)

4）基於精密度和准確度的特定濃度

ICH Q2（R2）在原先幾種方法的基礎上提出了一個新的方法——基於准確度和精密度的方法下限。

（註：ICH Q2中提出了方法的工作范圍Working Range這個概念，並將線性和定量限/檢測限合並了，其中下限lower range limit即可理解為方法的定量限和檢測限。）

看原文：

4.2.2.3 Based on Accuracy and Precision at lower range limits

Instead of using estimated values as described in the previous approaches, the QL can be directly validated by accuracy and precision measurements.

不同於原先方法的估算濃度，定量限可以直接通過驗證方法的精密度和准確度來設定。

然後在此項的數據要求中，有這樣一段描述：

Also, the QL and the approach used for its determination should be presented.

相同的，定量限的濃度以及測定方法是需要明確指出來的。

If the QL was estimated, the limit should be subsequently validated by the analysis of a suitable number of samples known to be near or at the QL. In cases where the QL is well below (e.g.,approximately 10 times lower than) the reporting limit, this confirmatory validation can be omitted with justification.

如果定量限是估算出來的，那麼這個限度濃度應該使用一系列已知的並且在定量限附近濃度的樣品來確認的。如果定量限遠小於報告限（如1/10或更低），那麼它是可以不像前面的做法來做確認的，進行解釋說明即可。

For impurity tests, the quantitation limit for the analytical procere should be equal to or below the reporting threshold.

對於雜質測定來說，分析方法的定量限應小於或等於報告限。

對此，個人理解ICH在傳遞的信息是：方法的靈敏度滿足使用需求即可（類似於Q3A中指出報告限的作用）。我們無需去證明方法的靈敏度有多高，只需要保證我們設定的特定限度滿足方法准確定量的要求即可。

隨著這個觀點的轉變，將使得LOD/LOQ從一個未知的濃度（需要估算或一系列實驗來摸索測定）變成了一個已知的濃度（特定的滿足使用要求的濃度），從解題變成了證明題，使得大家一下子變得輕鬆了許多。

實際上這個觀點，在國內很多人已經提出過並且也在被越來越多的人接受。原因就是在原先的要求下（既要滿足信噪比要求，又要滿足精密度和准確度要求），一方面兩者很難兼得，為達到要求往往需要耗費較多的精力；另一方面不同人員、不同儀器、不同時間、不同實驗室很難得出一個相同的濃度。因此大家在進行靈敏度驗證的時候就會變得非常糾結和痛苦。

採用這個新理念在具體的方法驗證過程中，對於定量限的驗證，需要做的就是選擇一個特定的濃度（通常以報告限為基礎，結合實際的控制限度，如報告限的一半或更低），然後用精密度和准確度的做法來驗證選定的定量限的這個濃度點。

文章最後，我們還需要再強調的一點就是：定量限是要保證精密度和准確度的！

因此定量限下的准確度和精密度是需要驗證的，驗證的可接受標準是不可以獨自放寬的。

⑶ 葯典採用的色譜法中 最常用於特殊雜質限量檢查的方法是

葯物中雜志限量的控制方法有兩種：一種為限量檢查法，另一種是對雜質進行含量測定。
限量檢查法不需要進行准確定量，只需檢查雜質是否超過限量。
進行限量檢查，多採用對照法，靈敏度法，比較法。
1 對照法：取一定量的被檢雜質標准溶液和一定量供試品溶液，在相同條件下處理，比較反應結果，已確定雜質含量是否超過限量。
2靈敏度法：在供試品溶液中加入一定量的試劑，在一定反應條件下，不得有正反應出現。該法不需要雜質對照品溶液。如乳酸中枸櫞酸，草酸，磷酸或酒石酸的檢查。
3比較法：取供試品一定量依法檢查，測定特定待檢雜質的參數（如吸光度）與規定的限量進行比較，不得更大。
關於殘留溶劑，常使用GC。
定量測定主要使用色譜法，包括TLC(鹽酸環丙沙星中氟喹啉酸檢查）
HPLC（紅黴素中紅黴素BC檢查）