核酸濃度純度分析方法

㈠ 紫外吸收法為什麼能測定核酸的含量和純度

採用紫外分光光度法測定蛋白質含量的實驗原理：
（1）蛋白質可作定量分析的原因：蛋白質中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環含有共軛雙鍵，所以蛋白質溶液在275 280nm具有一個吸收紫外吸收高峰。在一定濃度范圍內，蛋白質溶液在最大吸收波長處的吸光度與其濃度成正比，服從朗伯-比耳定律，因此可作定量分析。該法測定蛋白質的濃度范圍為0.1—1.0mg/mL。

（2）此種方法測量的准確度差一點的原因：由於不同蛋白質中酪氨酸和色氨酸的含量不同，所處的微環境也不同，所以不同蛋白質溶液在280nm的光吸收職也不同。據初步統計，濃度為1.0 mg/mL的1800種蛋白質及蛋白質亞基在280nm的吸光度在0.3—3.0之間，平均值為1.25+/-0.51。所以此種方法測量的准確度差一點。

㈡ 紫外吸收檢測DNA的濃度和純度原理是什麼

核酸的最大吸收波長為260nm，蛋白質為280nm，在波長260nm時，1OD值相當於雙鏈DNA濃度為50μg/ml，單鏈寡核苷酸的含量為30μg/ml，可以據此來計算核酸樣品的濃度,還可通過測定在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280），估計核酸的純度。純凈DNA的比值為1.8,
RNA為2.0。若比值高於1.8說明DNA樣品中的RNA尚未除盡，若樣品中含有酚和蛋白質將導致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干擾。
紫外分光光度法只能用於測定濃度大於0.25μg/ml的核酸溶液，對濃度更小的樣品，可採用熒光分光光度法。
生物幫上面有這方面的詳細介紹，
http://www.bio1000.com/zt/experiment/hesuan.html
核苷酸,核糖核酸,脫氧核糖核酸,核酸酶,核苷酸的作用。

㈢ 核酸含量的測定方法及原理都有哪些

核酸檢測的主要原理其實是反轉錄和聚合酶鏈式擴增反應。也叫做RT-PCR。目前對新型冠狀病毒進行的核酸檢測也主要採用此種方式。簡單來說就是採取患者鼻咽拭子、痰和其他下呼吸道分泌物、血液、糞便，檢測人員通過。核酸提取試劑盒提取患者標本里邊兒的核酸，然後把提取到的核酸放進檢測試劑中進行復制擴增。然後再根據檢測結果進行判斷如果是陰性代表沒有感染，如果是陽性代表有感染。目前對新型冠狀病毒核酸檢測會存在假陰性的可能，所以可以選擇多次測量。如果連續兩次核酸檢測為陰性，同時沒有臨床症狀可以排除感染，並且對已經感染了新型冠狀病毒肺炎的患者，如果連續兩次檢測核酸為陰性，注意間隔時間必須大於一天，同時臨床症狀緩解，影像學好轉也可以解除隔離。

㈣ 核酸分析技術有哪些

總的來說包括了核酸的分離、提純，核酸的擴增，檢測，定性與定量分析等。下面以DNA為例說一下相關的概念。

1、DNA的分離提純就那些試劑，那些步驟，網上一大堆視頻的，自己去找吧。

2、擴增一般指的是PCR，需提供引物（引物具有特異性，比如說乙肝病毒基因的引物只能擴增乙肝病毒基因）、酶、底物等，三個流程一個循環：變性、復性、延長。

3、檢測一般有紫外分光光度法，電泳分析，雜交分析。

（1）紫外分光光度法：此法的原理涉及到一些光學的知識，可以查詢相關書籍以能更好的理解，可以做定量分析，分為單組份分析和多組分分析。

單組份分析有：

1）標准曲線法：用不通濃度的標准溶液，同一條件下測定吸光度A，以吸光度A為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標准曲線，根據測得的待測樣品吸光度，從標准曲線中便可知溶液濃度。

2）標准對照法：標准溶液濃度a，吸光度A，待測樣品吸光度B，則根據朗-比定律有待測樣品濃度為：B*a/A。

3）吸光系數法：吸光系數K，測得待測樣品吸光度A，溶液的厚度d，根據朗-比定律，則待測樣品的濃度為：A/(K*d)。

多組分分析沒研究過了，自己查查相關資料吧。

（2）電泳分析是根據DNA的分子量和結構不同而在電場中的移動速度不同的原理，電泳的時候需要加MARKER或者已知的基因的片段進行測量。說說MARKER的概念吧，MARKER是由一些列一定梯度的基因片段組成的基因混合物，梯度一般有100bp，200bp，500bp等，MARKER電泳過後便形成很多條距離相等的條帶，每兩條條帶之間的距離為前面提到的梯度值，MARKER用來做標准參考，具有標尺的作用

㈤ 核酸含量的測定方法及原理都有哪些

核酸定量常用方法及原理如下：

1、光吸收法：核酸中鹼基共軛結構在近紫外光波長260nm處有最大吸收，吸收強度與核酸濃度成正比，因此可以用於核酸定量。

2、定P法：核酸中P含量約為9.5%，因此可以通過測定樣品中的有機P量來進行核酸定量。

㈥ 為什麼用OD260/OD280評定核酸純度

核酸的最大吸收波長是260nm，這個物理特性為測定核酸溶液濃度提供了基礎。

在波長260nm紫外線下，1 OD值的光密度相當於雙鏈DNA濃度為50μg/ml；單鏈DNA或RNA為40μg/ml；寡核苷酸為20μg/ml。可以此來計算核酸樣品的濃度。

通過測定在260nm和280nm的紫外線吸收值的比值（A260/A280）可以估計核酸的純度。純DNA的比值為1.8，純RNA的比值為2.0。若DNA比值高於1.8，說明制劑中RNA尚未除盡。RNA、DNA溶液中含有酚和蛋白質將導致比值降低。樣品中如混有RNA比值上升。

(6)核酸濃度純度分析方法擴展閱讀

顯示DNA的傳統方法是富爾根（Feulgen）反應，切片先用稀鹽酸處理，DNA經弱酸（1mol/L HCL）水解後，在60℃條件下使DNA分子中脫氧核糖與嘌呤之間的連接打開，脫氧核糖的一端釋放出醛基，並在原位與Schiff試劑反應生成紫紅色產物。

原理同PAS反應，使細胞核DNA顯紫紅色。在此過程中RNA不受影響，故染色具有DNA特異性。准確的溫度和鹽酸濃度，適宜的水解時間是成功的關鍵。水解過度或不足均降低染色強度。

核酸可分為脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）和核糖核酸（ribonucleic acid，RNA）。

核酸不但是一切生物細胞的基本成分，還對生物體的生長、發育、繁殖、遺傳及變異等重大生命現象起主宰作用。它在生物科學的地位，可用「沒有核酸就沒有生命」這句話來概括。

參考資料來源：網路-核酸

參考資料來源：網路-核酸顯示法

參考資料來源：網路-OD260/280比值

㈦ 如何判定核酸樣品的純度

您好！
① 如果是看DNA或者RNA的純度，可以通過OD260/OD280比值來衡量，DNA OD260/OD280比值在1.8-2.0；RNA ＞2.0。如果比值＜1.8，說明有蛋白質殘留。
② 如果是多個核酸樣品混合物，則通過電泳來看目的條帶在混合物中比例。

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㈧ 檢測核酸純度方法

紫外吸收檢測DNA濃度與純度2007年11月13日 星期二 11:40目的： 了解紫外吸收檢測DNA濃度與純度的原理，掌握測定方法。

原理： 核酸的最大吸收波長為260nm，蛋白質為280nm，在波長260nm時，1OD值相當於雙鏈DNA濃度為50μg/ml，單鏈

寡核苷酸的含量為30μg/ml，可以據此來計算核酸樣品的濃度,還可通過測定在260nm和280nm的OD值的比值

（OD260/OD280），估計核酸的純度。純凈DNA的比值為1.8, RNA為2.0。若比值高於1.8說明DNA樣品中的RNA尚未除

盡，若樣品中含有酚和蛋白質將導致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干擾。 紫外分光光度法只能用於測定濃度

大於0.25μg/ml的核酸溶液，對濃度更小的樣品，可採用熒光分光光度法。

試劑與儀器： 提取的質粒DNA，紫外分光光度儀。

操作步驟：
1) 分光光度計先用水在260nm和280nm兩個波長下校零。
2) 取質粒DNA樣品2μl，用水稀釋100倍，轉入分光光度計的石英比色杯中。
3) 在260nm和280nm分別讀出樣品光密度值。如果樣品濃度單位為μg/μl，則樣品DNA濃度為OD 值的10倍，即如

OD<SUB>260</SUB>=0.1，則樣品濃度即為1μg/μl。
4) 若OD<SUB>260</SUB>/OD<SUB>280</SUB>大於1.8，說明仍有RNA，可以考慮用RNA酶處理樣品，若小於1.8，說

明樣品中含有蛋白質或酚，應再用酚/氯仿抽提，以乙醇沉澱純化DNA。

㈨ 如何使用簡單的實驗方法檢測DNA純度

實驗原理

DNA/RNA在260nm處有最大的吸收峰，蛋白質在280nm處有最大的吸收峰，鹽和小分子則集中在230nm處。因此，可以用260nm波長進行分光測定DNA濃度，OD值為1相當於大約50μg/ml雙鏈DNA。如用25px光徑，用 H2O稀釋DNA/RNA樣品n倍並以H2O為空白對照，根據此時讀出的OD260值即可計算出樣品稀釋前的濃度：

DNA（ug/ml）=50×OD260讀數×稀釋倍數。

RNA（ug/ml）=40×OD260讀數×稀釋倍數。
DNA/RNA純品的OD260/OD280為1.8或2.0，故根據OD260/OD280的值可以估計DNA的純度。若比值較高說明含有RNA，比值較低說明有殘余蛋白質存在。OD230/OD260的比值應在0.4-0.5之間，若比值較高說明有殘余的鹽存在.本實驗室機器顯示是OD260\OD230，則比值應在2-2.5之間，偏小則說明有殘余鹽剩餘。

實驗步驟
1. 將制備的DNA懸浮溶解於TE緩沖液中[pH8.O, 1Ommo1/L的Tris緩沖液,內含〈1mmol/L EDTA〉]或懸浮溶解在滅菌水中(依據DNA含量加水)。
2. 用可掃描的紫外分光光度計測定製備的DNA/RNA的紫外吸收曲線，測定OD260和OD280，並計算比值：OD260/OD280，純DNA的此比值約為1.8～2.0。純RNA的此比值約為大於2.0。
3. 根據：每毫升1微克的純DNA的OD260值= 0.020，計算所得DNA的純度；
每毫升1微克的純RNA的OD260值= 0.025，計算所得RNA的純度；

並討論純度較低的原因和解決辦法。
260、320、230、280nm下的吸光度分別代表了核酸、背景（溶液渾濁度）、鹽濃度和蛋白等有機物的值。一般的，只看OD260/OD280（Ratio，R）。

DNA: OD260/OD280比值應接近1.80，若R值大於1.8。說明存在RNA，可重新用RNaseA處理,酚:氯仿:異戊醇(23:24:1)抽提。若R值小於1.8，則說明有蛋白質等雜質存在，需再用蛋白酶K、SDS及盼、氯仿、異戊醇重新對DNA進行純化（也可加入1/8體積的3M NaAc(pH5.2)與冷乙醇一同促使DNA沉澱析出。

RNA: OD260/OD280比值在1.8-2.0時，認為RNA中蛋白或者時其他有機物的污染是可以容忍的，不過要注意，當你用Tris作為緩沖液檢測吸光度時，R值可能會大於2（一般應該是<2.2的）。當R<1.8時，溶液中蛋白或者時其他有機物的污染比較明顯，你可以根據自己的需要決定這份RNA的命運。當R>2.2時，說明RNA已經水解成單核酸了。

注意事項：
1. 有用品均需要高溫高壓，以滅活殘余的DNA酶/RNA酶。

2. 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配製，RNA均用DEPC處理的水。

3. 用大口滴管或吸頭操作，以盡量減少打斷DNA的可能性。