A. 起始進樣量20ngdna的情況下，數字pcr檢測ctdna單個位點的檢測靈敏度是多少
數字PCR
可以絕對定量，理論上可以檢測單個拷貝的突變，但是實際上如果突變分子比例太低，你可能取不到。20ng人基因組大致
拷貝數
是5.8E6，目前看文獻報道，可以檢出萬分之一的突變比例，至於十萬分之一，估計有點難度
數字PCR即Digital PCR（dPCR)，它是一種核酸分子絕對定量技術。相較於qPCR，數字PCR可讓你能夠直接數出DNA分子的個數，是對起始樣品的絕對定量。
在定量PCR時，我們常常糾結一個問題，究竟是相對定量還是絕對定量呢？如今，你無需糾結了，因為數字PCR（digital PCR）來了。盡管這兩種技術有些類似，都是估計起始樣品中的核酸量，但它們有一個重要的區別。定量PCR是依靠標准曲線或參照基因來測定核酸量，而數字PCR則讓你能夠直接數出DNA分子的個數，是對起始樣品的絕對定量。因此特別適用於依靠Ct值不能很好分辨的應用領域：拷貝數變異、突變檢測、基因相對表達研究（如等位基因不平衡表達）、二代測序結果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等。
原理
PCR實際上是一個在模板DNA、引物(模板片段兩端的已知序列)和四種脫氧核苷酸等存在的情況下，DNA聚合酶依賴的酶促合成反應，擴增的特異性取決於引物與模板DNA的特異結合。
數字PCR可以實現更高准確性、靈敏度和絕對定量
數字PCR是一種核酸檢測和定量分析的新方法，可以作為傳統實時定量PCR的替代方法，以實現絕對定量及稀有等位基因的檢測。數字PCR的工作原理在於將DNA或cDNA樣品分割為許多單獨、平行的PCR反應，部分這些反應包含了靶標分子（陽性），而其他不包含（陰性）。單個分子可以被擴增一百萬倍或更多。在擴增期間，TaqMan化學試劑及染料標記探針可用於檢測特定序列的靶標。當不存在任何靶標序列時，沒有信號累積。PCR分析後，陰性反應片段用於生成樣品中靶標分子的絕對計數，而無需標准品或內標。
納流晶元的使用提供了便捷和直觀的機制來同時平行運行上千個PCR反應。每個孔都加入了樣品、擴增混合物和 TaqMan測定試劑的混合物，然後進行單獨分析以檢測存在（陽性）或不存在（陰性）終點信號。考慮到孔可能接收到多個靶標序列分子，使用泊松模型應用了一個校正因子。
以上來自網路。
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相對定量 相對定量得到的結果為特定樣本中目的基因相對於另一參照樣本的量的變化。 在某些不需要對基因進行絕對定量，只需要確定基因相對表達差異的情況下，如某樣品在經過某種處理後目的基因表達量是增加了還是減少了，用相對定量的方法就可以得到結果，......
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數字PCR技術的發展與應用簡介
實時定量PCR探針概述
基於數字PCR的單分子DNA定量技術研究進展（二）
D. 數字PCR的原理
數字 PCR 的工作原理在於將 DNA 或 cDNA 樣品分割為許多單獨、平行的 PCR 反應，部分這些反應包含了靶標分子（陽性），而其他不包含（陰性）。 單個分子可以被擴增一百萬倍或更多。 在擴增期間，TaqMan® 化學試劑及染料標記探針可用於檢測特定序列的靶標。 當不存在任何靶標序列時，沒有信號累積。 PCR 分析後，陰性反應片段用於生成樣品中靶標分子的絕對計數，而無需標准品或內標。
E. 大夫您好！我朋友在做正常體查中，做了腫瘤早期篩查，用微滴式數字PCR技術做了血液11項基因檢測，其
指導意見：
腫瘤的治療最好是中西醫結合治療同時進行效果最好。西醫的手術。放化療都有很大的毒副作用和後遺症。所以最好同時配合無毒抗癌綠色療法 中醫中葯。這樣既可以減輕西醫治療的毒副作用。鞏固病情；同時還可以減輕症狀。控制病情發展。提 高生存質量。延長生存期。
F. 什麼是數字PCR
數字PCR技術是一種核酸分子絕對定量技術，其原理是將一個PCR反應體系分配到大量微小的反應單元中，在每個單元包含一個或多個拷貝的目標分子( DNA 模板) ，進行單分子模板擴增，擴增結束後通過陽性反應的數目和統計學方法計算原始樣本中目標基因的拷貝數。
G. 如何利用數字PCR評估基因編輯效率
在定量PCR時，我們常常糾結一個問題，究竟是相對定量還是絕對定量呢？如今，你無需糾結了，因為數字PCR（digital PCR）來了。盡管這兩種技術有些類似，都是估計起始樣品中的核酸量，但它們有一個重要的區別。定量PCR是依靠標准曲線或參照基因來測定核酸量，而數字PCR則讓你能夠直接數出DNA分子的個數，是對起始樣品的絕對定量。因此特別適用於依靠Ct值不能很好分辨的應用領域：拷貝數變異、突變檢測、基因相對表達研究（如等位基因不平衡表達）、二代測序結果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等。
H. 數字 pcr 的應用做snp 頻率怎麼弄
有很多方面你需要考慮，最重要的根據基因多態性頻率為指標估算需要總樣本量，如果其發生數服從Poisson分布，就採用Poisson分布的公式；其次根據基因多態性對你研究的疾病結局的相對危險度為指標估算需要病例數，具體的計算採用W. James Gauderma。
I. 什麼是數字PCR （Digital PCR）
數字PCR是一種核酸（DNA和RNA）單分子計數手段，可實現核酸分子的絕對定量。數字PCR的基本原理是，將適度稀釋的低濃度核酸樣本分裝進若干個獨立的微反應體系中，由於稀釋後靶核酸分子濃度極低，分裝的結果使有些微反應體系中無靶核酸分子，有些微反應體系中含有至少1個靶核酸分子。經過PCR擴增，無靶核酸分子的微反應呈陰性，有靶核酸分子的微反應呈陽性。計數陽性微反應的數量，再結合泊松分布概率密度函數，即可得到每個微反應體系中靶核酸分子的平均含量，進而獲得樣品中靶核酸分子的原始濃度。