A. 過氧化物酶活性測定的方法有哪些
實驗 48 過氧化物酶活性的測定（比色法）
過氧化物酶是植物體內普遍存在的、活性較高的一種酶，它與呼吸作用、光合作用及生長素的氧化等都有密切關系，在植物生長發育過程中，它的活性不斷發生變化，因此測量這種酶，可以反映某一時期植物體內代謝的變化。
一、原理
在有過氧化氫存在下，過氧化物酶能使愈創木酚氧化，生成茶褐色物質，該物質在 470 nm 處有最大吸收，可用分光光度計測量 470 nm 的吸光度變化測定過氧化物酶活性。
二、實驗材料、試劑與儀器設備
（一）實驗材料
馬鈴薯塊莖。
（二）試劑
1 ． 100 mmol ／ L 磷酸緩沖液 pH6.0 （見附錄）。
2 ．反應混合液： 100 mmol ／ L 磷酸緩沖液（ pH6.0 ） 50 mL 於燒杯中，加入愈創木酚 28 μl ，於磁力攪拌器上加熱攪拌，直至愈創木酚溶解，待溶液冷卻後，加入 30 % 過氧化氫 19 μl ，混合均勻，保存於冰箱中。
（三）儀器設備
分光光度計，研缽，恆溫水浴鍋， 100 mL 容量瓶，吸管， 離心機。
三、實驗步驟
1 ．稱取植物材料 1 g ，剪碎，放入研缽中，加適量的磷酸緩沖液研磨成勻漿，以 4000 r ／ min 離心 15 min ，上清液轉入 100 mL 容量瓶中，殘渣再用 5 mL 磷酸緩沖液提取一次，上清液並入容量瓶中，定容至刻度，貯於低溫下備用。
2 ．取光徑 1 cm 比色杯 2 只，於 1 只中加入反應混合液 3 mL 和磷酸緩沖液 1mL ，作為對照，另 1 只中加入反應混合液 3 mL 和上述酶液 1mL （如酶活性過高可稀釋之），立即開啟秒錶記錄時間，於分光光度計上測量波長 470 nm 下吸光度值，每隔 1min 讀數一次。
四、結果計算
以每分鍾吸光度變化值表示酶活性大小，即以 ΔA 470 /[min • g （鮮重） ] 表示之。也可以用每 min 內 A 470 變化 0.01 為 1 個過氧化物酶活性單位（ u ）表示。
過氧化物酶活性 [u/ （ g • min ） ]=
式中： Δ A 470 ——反應時間內吸光度的變化。 W ——植物鮮重， g 。
V T ——提取酶液總體積， mL 。
V s ——測定時取用酶液體積 , mL 。
t ——反應時間， min 。