活螺旋體標本染色最常用的方法

❶ 螺旋體的種類介紹

梅毒螺旋體細長，5～15×0.1～0.2um，形似細密的彈簧，螺旋彎曲規則，平均8～14個，兩端尖直。電鏡下顯示梅毒螺旋體結構復雜，從外向內分為：外膜（主要由蛋白質、糖及類脂組成）、軸絲（主要由蛋白質組成）、圓柱形菌體（包括細胞壁、細胞膜及胞漿內容物）；一般染料不易著色。梅毒螺旋體有生活發育周期，分為顆粒期、球形體期及螺旋體期，平均約30小時增殖一代，發育周期與所致疾病周期、隱伏發作及慢性病程有關。梅素螺旋體抗原分為三類：
1．螺旋體表面特異性抗原：刺激機體產生特異的凝集抗體及密螺旋體制動或溶解抗體，後者加補體可溶解螺旋體。
2．螺旋體內類屬抗原：可產生補體結合抗體，與非病原性螺旋體有交叉反應。
3，螺旋體與宿主組織磷脂形成的復合抗原：當螺旋體侵入組織後，組織中的磷脂可粘附在螺旋體上，形成復合抗原，此種復合抗原可刺激機體產生抗磷脂的自身免疫抗體，稱為反應素（Aegagin），可與牛心肌或其他正常動物心肌提取的類脂質抗原起沉澱反應（康氏試驗）或補體結合反應（華氏試驗）。
1981年，Fieldsteel等採用棉尾兔單層上皮細胞，在微氧條件下培養成功，在人工培養基上尚不能培養。
梅素螺旋體對溫度、乾燥均特別敏感，離體乾燥1～2小時死亡，41℃中1小時死亡，對化學消毒劑敏感，1～2%石炭酸中數分鍾死亡，對青黴素、四環素、砷劑等敏感。 人是梅毒的唯一傳染源，由於感染方式不同可分先天性梅毒和後天性梅毒。前者是患梅毒的孕婦經胎盤傳染給胎兒的；後者是出生後感染的，其中95%是由性交直接感染，少數通過輸血等間接途徑感染。
先天性梅毒又稱胎傳梅毒。梅毒螺旋體經胎盤進入胎兒血循環，引起胎兒全身感染，螺旋體在胎內兒臟（肝、脾、肺及腎上腺）及組織中大量繁殖，造成流產或死胎，如胎兒不死則稱為梅毒兒，會出皮膚梅毒瘤、骨膜炎、鋸齒形牙、神經性耳聾等症狀。
後天獲得性梅毒表現復雜，依其傳染過程可分為三期：
初期梅毒：梅毒螺旋體侵入皮膚粘膜約三周後，在侵入局部出現無痛性硬結及潰瘍，稱硬性下疳。局部組織鏡檢可見淋巴細胞及巨噬細胞浸潤。下疳多發生於外生殖器，其潰瘍滲出物含有大量梅毒螺旋體，傳染性極強。下疳常可自然癒合，約2～3個月無症狀的隱伏期後進入第二期。
二期梅毒：此期的主要表現為全身皮膚粘膜出現梅毒疹，全身淋巴結腫大，有時亦累及骨、關節、眼及其他器官。在梅毒疹及淋巴結中有大量螺旋體。不經治療症狀一般可在3周～3個月後自然消退而全愈；部分病例經隱伏3～12個月後可再發作。二期梅毒因治療不當，經過5年或更久的反復發作，而進入三期。
三期梅毒：主要表現為皮膚粘膜的潰瘍性損害或內臟器官的肉芽腫樣病變（梅毒瘤），嚴重者在經過10～15年後引起心血管及中樞神經系統損害，導致動脈瘤、脊髓癆及全身麻痹等，此期的病灶中螺旋體很少，不易檢出。
一、二期梅毒又統稱為早期梅毒，此期傳染性強而破壞性小。三期梅毒又稱為晚期梅毒，該期傳染性小，病程長、而破壞性大。
目前尚未證明梅毒螺旋體內毒素或分泌外毒素，其致病機理尚不清楚，可能與螺旋體對宿主細胞的直接損害及Ⅲ、Ⅳ型變態反應有關。
梅毒的免疫是有菌免疫，以細胞免疫為主，體液免疫只有一定的輔助防禦作用，意義不大。當螺旋體從體內清除後仍可再感染梅毒，而且仍可出現一期梅毒症狀。此病周期性潛伏與再發的原因可能與體內產生的免疫力有關，如機體免疫力強，螺旋體能變成顆粒形或球形，在體內一些部位潛伏起來，一旦機體免疫力下降，螺旋體又可侵犯體內某些部位而復發。 （一）檢查螺旋體，採取初期及二期梅毒硬性下疳、梅毒疹的滲出物等，用暗視野或墨汁顯影，如查見有運動活潑的密螺旋體即可診斷。
（二）血清學檢查
1．非螺旋體抗原試驗：是用正常牛心肌的心類脂（Cardiolipin）作為抗原，檢測病人血清中的反應素。國際上常用性病研究實驗室（UDRL）的玻片試驗法；該法是一種簡單的玻片沉澱試驗，試劑及對照已標准化。另外，還可用不加熱血清反應素試驗（USR），其抗原是UDRL抗原的改良，敏感性和特異性與UDRL相似。反應素在第一期梅毒病變出現後1～2周就可測出，第二期陽性率幾乎達100，第三期陽性率較低。本試驗所用抗原是非特異的，檢測的抗體時應排除假陽性反應，結合病史，臨床表現及多次的試驗結果進行分析。
2．螺旋體抗原試驗：抗原為梅毒旋體，以檢測血清中的特異性抗體，該試驗特異性高，目前常用下述兩種方法。
（1）熒光密螺旋體抗體吸收試驗（FTA～ABS）：為間接熒光抗體法，其敏感性及特異性均高，常用於梅毒的早期診斷。
（2）梅毒螺旋體制運試驗（TPI）：用來檢測血清中是否存在抑制螺旋體活動的特異性抗體。用活梅毒螺旋體（Nichol株）加病人新鮮血清，35℃培養16小時，同法作正常血清對照，然後用暗視野顯微鏡觀察活動的螺旋體數目，如試驗標本活動的螺旋體數目小於或等於對照血清標本內的40%，即為陽性。 鉤端螺旋體病是一種由鉤端螺旋體屬細菌引起的疾病，可感染人類和動物。這種細菌在全世界廣泛存在，尤其是在降雨量多的熱帶國家。它可在淡水、潮濕的土壤、植物和淤泥存活很久。大雨後的洪水有助將細菌在周圍環境傳播。
鉤端螺旋體病對戶外工作或需接觸動物的人士構成職業病風險，對遊玩人士亦會造成威脅，包括露營、在受污染的湖和河流進行水上運動，例如游泳、涉水和乘筏子的旅客。
疾病潛伏期是2天到4個星期。病情可持續幾天到3個星期或更久。征狀包括發高燒、嚴重頭痛、冷顫、肌肉疼痛和嘔吐，亦可能出現黃疸(眼球和皮膚呈黃色)、紅眼、肚痛、腹瀉或出疹。如果病人不及早接受治理，可能會出現腎臟損傷、腦膜炎、肝臟功能衰竭和呼吸困難；有些罕見的例子更會導致死亡。
1．早期（鉤體血症期），此期臨床症狀似流感，出現發熱；肌肉疼痛；頭痛、周身乏力；眼結膜充血；腓腸肌壓痛；淺表淋巴結腫大與壓痛，持續3天。 2．中期（器官損傷期），此期由於損害器官不同臨床症狀各異。神經外損害可有肺出血、腎功能不全、肝臟損害。神經系統損害：於起病後2～3日左右，出現劇烈頭痛、頻繁嘔吐、頸項強直等腦膜刺激征；嚴重病例腦實質損害，表現為嗜睡、譫妄或昏迷，部分患者有抽搐、癱瘓、錐體束征，甚至腦干損害等。 3．後期（恢復期），大部分病人恢復，部分病人出現後發神經系統並發症。 ①後發腦膜炎 多是由於變態反應所致，表現為頭痛、惡心、嘔吐、腦膜刺激征。腦脊液壓力增高，蛋白增高，抗鉤端螺旋體抗體陽性。 ②腦動脈炎 是鉤體病神經系統損害最常見最嚴重的神經系統後發症，多由於變態反應引起多發性動脈炎，動脈內膜增厚，血管閉塞。病人在鉤體感染後半月到半年發病，表現為急性腦梗死、TIA發作或進展性卒中。有報道鉤體感染引起脊髓炎和多發性神經炎，比較少見。 抗生素可治療端螺旋體病，患者應盡快接受治療。病情嚴重者或須留院治理，接受抗生素靜脈注射和其它支援治理。
1、病因治療：鉤體對多種抗菌葯物敏感，如青黴素、鏈黴素、慶大黴素、四環素、氯黴素、頭孢噻吩，以及合成的鹽酸甲唑醇（methimidol）和咪唑酸酯。國內首選青黴素G，療程7～10天，應用青黴素後由於蟲體破壞，釋放毒素，可出現病情一過性加重。青黴素過敏者改用四環素類或氨基糖甙類葯物。 2、神經系統並發症治療：應用糖皮質激素減輕免疫反應；高顱壓者應用甘露醇、甘油果糖、速尿等脫水降顱壓；合並腦動脈炎腦梗死病人加用擴血管、抗血小板等治療。

❷ 液體培養基中的細菌如何染色

細菌用革蘭氏染色就可以了（某些特殊的細菌可以用其他染色法）

先用接種環在酒精燈上灼燒滅菌，然後伸入液體培養基中降溫，並挑取一環在玻片上待其自然乾燥。如果含菌量太大，可以用生理鹽水稀釋。之後在火焰上略微加熱固定，後面的就和一般的革蘭氏染色方法相同了。