常用什麼方法固定乳酸細胞

1. 固定化細胞技術應有的范圍有哪些

固定化細胞技術就是將具有一定生理功能的生物細胞，例如微生物細胞、植物細胞或動物細胞等，用一定的方法將其固定，作為固體生物催化劑而加以利用的一門技術。固定化細胞與固定化酶技術一起組成了現代的固定化生物催化劑技術。

固定化細胞的應用范圍極廣，目前已遍及工業、醫學、制葯、化學分析、環境保護、能源開發等多種領域。在工業方面，如利用產葡萄糖異構酶的固定化細胞生產果葡糖漿；將糖化酶與含α澱粉酶的細菌、黴菌或酵母細胞一起共固定，可以直接將澱粉轉化成葡萄糖；利用漲澡酸鈣或卡拉膠包埋酵母菌，通過批式或連續發酵方式生產啤酒；利用固定化酵母細胞生產酒精或葡萄酒；此外，還可利用固定化細胞大量生產氨基酸、有機酸、抗生素、生化葯物和甾體激素等發酵產品。在醫學方面，如將固定化的胰島細胞製成微囊，能治療糖尿病；用固定化細胞製成的生物感測器可用於醫療診斷。在化學分析方面，可製成各種固定化細胞感測器，除上述醫療診斷外，還可測定醋酸、乙醇、谷氨酸、氨和BOD等。此外，固定化細胞在環境保護、產能和生化研究等領域都有著重要的應用。

2. 組織和細胞的固定的方法有哪些

組織和細胞的固定的方法，浸潤法
浸潤法是組織化學和免疫
組織化學常用的固定方法，一次要處理許多組織樣品時也多用此法。
預先需估計固定劑的用量，並在取材前配好固定液，分裝於小容器內，在容器上標記組別和取材時間。容器內放人記錄組織類型的紙條，以便包埋時辨認。固定液的用量應是樣品的40倍，以保證組織充分固定。固定時間可根據所選固定液和組織類型而定。
若進行酶組織化學染色，應在4℃短時間固定，固定時間長會導致酶活性減弱，甚至消失。
可以到生物幫詳細的了解下，幹細胞專用培養基
http://doc.bio1000.com/show-3439.html

3. 幾種細胞固定方法

選擇最佳固定液標準是： （1）最好地保持細胞和組織的形態結構； （2）最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金屬的固定液在免疫組化和細胞化學技術中是禁用的； （3）不要用可能帶有自發熒光的固定劑，如帶有苦味酸的固定劑，還有甲醛升汞固定液，會使上皮細胞產生非特異性熒光； （4）固定劑的選擇、固定時間、溫度和PH值都會影響實驗結果。 單純固定液（1）4%中性甲醛固定液：最常用的固定液，能滿足常規HE及免疫組化、PCR等工作（Job）。中性甲醛是以PH7.2-7.4的磷酸緩沖液為溶劑配製的，其固定效果及對組織抗原性的保存均優於一般的4%甲醛固定液。此固定液配製後應密封並保存在陰涼處，保存時間不超過一個月。 甲醛（40%） 100ml 無水磷酸氫二鈉 6.5g 磷酸二氫鈉 4.0g 蒸餾水 900ml （2）乙醇固定液：使用時以80%-95%的濃度為宜，具有硬化、固定、脫水等作用，對組織滲透力較弱，因此很少單獨使用，但其保存組織中的核酸強於中性甲醛，故常用於有核酸操作的實驗或檢查，假如用於證實尿酸結晶和保存糖原，可用於100%乙醇固定組織。 （3）4%多聚甲醛固定液：主要用於培養細胞的固定。 混合固定液（1）乙醇-甲醛（乙醇-福爾馬林，AF）固定液：適用於皮下組織中肥大細胞的固定。該固定液有固定兼脫水作用，固定後的標本可直接入95%乙醇脫水。 甲醛（40%） 100ml 95%乙醇 900ml （2）B5（醋酸鈉-升汞-甲醛）固定液：多用於固定淋巴組織。染色前應進行脫汞沉澱處理。 無水醋酸鈉 1.25g升汞 6.0g蒸餾水 90ml 使用前加入甲醛 10ml （3）Bouin固定液：非凡適用於睾丸活檢組織的固定。Bouin液對組織固定較均勻，收縮很少，不會使組織變硬變脆。需現配現用。 飽和苦味酸水溶液（約1.22%） 75ml甲醛 25ml冰醋酸 5ml（4）Carnoy固定液：穿透能力強，可很好的固定細胞質和細胞核，非凡適用於固定外膜緻密的組織，也適用於糖原及尼氏小體的固定。 無水乙醇 60ml氯仿 30ml冰醋酸 10ml （5） Zenker固定液：經此液固定的標本，細胞核和細胞質染色頗為清楚，但成本較高且需非凡處理汞。該固定液要避免接觸陽光，以免引起化學變化而失效。 升汞 5.0g 重鉻酸鉀 2.5g 蒸餾水（加至）100ml

4. 細胞生物學實驗中常用來固定細胞或細胞器的方法有哪些

細胞固定化方法有：Adsorption（吸附）；covalent bonding（共價結合）；Cross linking（交聯）；Entrapment（包埋）、Encapsulation（微膠囊） 。下面對這幾種做具體介紹。
一、吸附法
1，原理
利用載體和細胞表面所帶電荷的靜電引力（van der Walls forces），使細胞吸附於載體上。吸附法可分為物理吸附和離子吸附兩種。該法操作簡單，固定化過程對細胞活性影響小。
2，載體的材料
採用吸附法固定細胞，所用的載體主要有：硅藻土、木屑、多孔玻璃、活性炭、
多孔陶瓷、離子交換樹脂和等。塑料
3，影響吸附固定化的因素
（1）Z-電位
（2）細胞的性質和細胞壁的組成
（3）載體的性質
（4）pH
二、共價結合法
利用細胞表面的反應基團（如氨基、羧基、羥基、巰基、咪唑基）與活化的無機或有機載體反應，形成共價鍵將細胞固定。用該法制備的固定化細胞一般為死細胞。

三、交聯法
利用雙功能或多功能試劑與細胞表面的反應基團（如氨基、羧基、羥基、巰基、咪唑基）反應，從而使細胞固定。常用的交聯劑包括：戊二醛、甲苯二異氰酸酯、雙重氮聯苯胺。
由於交聯試劑的毒性，這一方法具有一定的局限性。
四、包埋法
包埋法是細胞固定化最常用的方法。包埋法可以分為：
1，微膠囊法：利用半透性聚合物薄膜將細胞包裹起來，形成微型膠囊；
2，凝膠包埋法：是在無菌條件下，將生物細胞和膠溶液混合在一起，然後再經過相應的造粒處理，形成直徑為1-4mm的膠粒。
常用的包埋劑為：聚丙烯醯胺、瓊脂、海藻酸、卡拉膠、二醋酸纖維、三醋酸纖維、明膠等。
五、固定化方法的比較
吸附法：條件溫和、方法簡便、載體可再生。但操作穩定性差。
共價法：操作穩定性高。但由於試劑的毒性，易引起細胞的破壞。
交聯法：可得到高細胞濃度，但機械強度低，無法再生，不適於實際應用。
包埋法：細胞和載體間沒有束縛，固定化後，細胞仍保持較高活力。但這類方法只適用於小分子底物。

5. 高中生物：固定化酶（固定化細胞）技術是什麼

將酶或細胞固定於載體上，便於與反應物分離，並能可重復使用。提高生成物的質量。
固定化酶一般採用化學結合法，固定化細胞多採用包埋法、物理吸附法（像用海藻酸鈉進行包埋）

6. 固定化細胞的固定化原理及方法

細胞的種類多種多樣，大小和特性個不相同，故此細胞固定化的方法有很多種。歸結起來，主要可以分為吸附法和包埋法兩大類。 吸附法 利用各種吸附劑，將細胞吸附在其表面而使細胞固定的方法稱為吸附法。
用於細胞固定化的吸附劑主要有硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、多孔塑料、金屬絲網、微載體、和中空纖維等。
酵母細胞帶有負電荷，在pH3~5的條件下能夠吸附在多空陶瓷、多空塑料等載體的表面，製成固定化細胞，用於酒精和啤酒等的發酵生產；在環境保護領域內使用的活性污泥中含有各種各樣的微生物，這些微生物可以沉積吸附在硅藻土、多孔玻璃、多孔陶瓷、多空塑料等載體的表面，用於各種有機廢水的處理，降低廢水中的化學需氧量（COD)和生化需氧量（BOD）；各種黴菌會長出菌絲體，這些菌絲體可以吸附纏繞在多空塑料、金屬絲網等載體上用於生產有機酸和酶等；植物細胞可吸附在中空纖維外壁，用於生產色素、香精、葯物和酶等次級代謝產物；動物細胞大多屬於貼壁細胞，必需依附在固體表面才能正常生長，故可吸附在容器壁、微載體、中空纖維外壁等載體上，製成固定化細胞，用於各種蛋白質的生產。
2.包埋法
將細胞包埋在多空載體內部而製成固定化細胞的方法稱為包埋法。包埋法可分為凝膠包埋法和半透膜包埋法。
凝膠包埋法是應用最廣泛的細胞固定方法。

7. 做流式細胞儀之前，如何固定細胞

一
般來說都是將細胞懸液離心並棄上清後加入固定液，我們加的是70％的冰乙醇，加的量根據你細胞的多少。你這個涉及的測蛋白，那麼加多聚甲醛的量和時間可能
要控製得嚴一些才能保證最低限度不破壞a－SMA的結構。如果單測細胞凋亡和周期的話固定液多一點和固定時間長一點都影響不是太大。
其實無論是做細胞周期
的乙醇固定，還是做蛋白染色的多聚甲醛固定，固定液加1mL就可以了，一般每個樣品的細胞數都在106左右。固定液太少了不好，因為固定液的實際作用濃
度一定程度上受棄上清後管內殘留液體量的影響，但太多了也沒有意義。也正是這個原因，實際上多聚甲醛的濃度用4%的多一些，而且因其有揮發性，時間長濃度
會有所降低。至於固定時間，一般4度30min固定作用就已經比較完全了，但是也可以放置過夜，這樣有時有利於時間安排。

8. 微生物細胞的固定方法有哪些常用的是哪種

微生物細胞的固定方法有主要有物理吸附法和包埋法兩種。
1．物理吸附法
帶電的微生物細胞和載體之間的靜電相互作用，使細胞體吸附固定在硅藻土、木材、玻璃、陶瓷和塑料等載體上。如酵母細胞是帶負電的，在固定時要選擇帶正電的載體。在PH4時，熱帶假絲酵母、釀酒酵母等在陶瓷表面上的吸附程度較大，載體表面的40~70%被細胞牢固吸附，不會被高流培養液沖掉。載體的性質也影響細胞與載體之間的相互作用，主要是載體的成分、表面電荷、表面積和PH的影響。所有的玻璃和陶瓷都是由不同比例的氧化硅、氧化鎂等組成，如將玻璃等放在溶液中，在它的表面會發生離子交換，形成不再是鋁、硅等的氧化物，而為相應的氫氧化物。載體表面的羥基可被微生物細胞表面的氨基或羧基所取代，在細胞與載體之間形成鍵。物理吸附法固定化活細胞的酶活性不受影響，但吸附過程相當復雜，吸附過程與微生物的性質、載體的特性及細胞與載體之間發生的相互作用有關，只有這些參數配合恰當時才能形成穩定的微生物細胞-載體復合物。
物理吸附法固定微生物細胞現已廣泛用於廢水處理工程——生物膜法，中國科學院微生物研究所應用自養菌和異養菌的混合菌，吸附於玻璃鋼蜂窩填料繁殖成生物膜，用以處理含硫氰酸鈉的腈綸廢水。北京工業大學應用馴化的混合菌吸附於活性炭的大孔及其表面，用以處理印染廢水等。
2．包埋法
將微生物細胞用物理的方法包埋在瓊脂、海藻酸鈉、明膠、聚丙烯醯胺和聚乙烯醇（PVA）等凝膠載體內，使微生物細胞固定化。一般的包埋成形法比較復雜、機械性能差、易磨損、不適於大批量生產。因而近年來一些學者又研究了一種制備珠型固定化細胞技術。
1）瓊脂凝膠包埋法，稱取4g瓊脂或瓊脂糖溶於50ml 0.2M pH7.0磷酸緩沖液中，加熱溶解後，冷卻到55℃左右，將細胞濃度為60%左右細菌懸浮液於40℃下保溫，然後與瓊脂溶液混合均勻。用注射器針頭將熱的混合液滴入冷的甲苯溶液，四氯乙烯溶液或液體石臘內，冷卻形成2~3mm直徑的小球。或將熱瓊脂-細菌混合液流加到攪拌下的500ml30℃的醋酸丁酯中，加完後繼續攪拌3分鍾，到混合物分散成小滴，迅速加入300ml冷的醋酸丁酯，再攪拌2~5分鍾，傾去醋酸丁酯，抽濾干，用緩沖液洗至無醋丁酯味，即製成珠型固定化細胞，小珠約在1~3mm。使用前將球形固定化細胞放入消毒好營養液中30℃活化24小時後再用。
2）海藻酸鈣凝膠包埋法 稱取2g海藻酸鈉，加30ml生理鹽水於高壓滅菌鍋中加熱溶解、冷卻到40℃，取20ml與20ml細胞濃度為50%的細菌懸浮混合均勻，然後用注射器針頭滴加到0.1M氯化鈣或4%的氯化鋇溶液中，邊滴邊搖，使其形成2mm直徑球型小珠，然後用生理鹽水洗滌。或將混合液流加到攪拌下的200~500ml醋酸丁酯中，當分散成小滴後，迅速加入5ml 0.1M的二氯化鈣溶液,繼續攪拌5~10分鍾,自然沉降,傾去醋酸丁脂,再加入50ml 0.1M的二氯化鈣溶液,浸泡1小時,進一步固化,然後用蒸餾水徹底洗滌,即得直徑為1~3mm珠型固定化細胞。干後可保存於低溫下，使用前需放入消毒好的營養液中30℃活化24小時後再用。由於磷酸鹽會破壞凝膠的結構，因而在使用海藻酸鈉固定細胞時盡量防止磷酸鹽的加入。
3）明膠包埋法 稱取6g明膠，加入50ml 0.1M pH7.0的磷酸緩沖液，加熱溶解後冷卻至40℃，取20ml與20ml細胞濃度為60%的細菌懸液在40℃混合均勻，冷卻凝固後切成1~2mm3方塊，然後再加2.5%戊二醛，使包埋塊懸浮在戊二醛溶液中，室溫下輕輕攪拌4小時進行交聯，濾去戊醛後，逐次用0.1M氯化鈉和去離子水洗滌後即成。或者將明膠-菌體混合液流加到200ml 20℃攪拌下的醋酸丁酯溶液中，當分散成小珠後，迅速加入5ml 5%的戊二醛溶液，繼續攪拌5~10分鍾，傾去醋酸丁酯，水洗即得到珠型固定化細胞，再放入50ml的pH5.0的戊二醛溶液中浸泡30分鍾，然後徹底洗滌，即獲得直徑1~3mm的球形小珠。使用前將其放入營養液中30℃活化24小時後再用。用戊二醛交聯的明膠包埋法，可獲得機械強度及工作穩定性較好的固定化細胞。
4）聚丙烯醯胺凝膠包埋法，引此法是較常用的一種包埋法。聚丙烯醯胺凝膠是由丙烯醯胺單體和交聯劑甲叉雙丙烯醯胺在催化劑作用下聚合形成三維網狀結構的凝膠。常用的催化劑和加速劑是過硫酸銨和四甲乙二胺或三乙醇胺。
稱取17.6g丙烯醯胺和1.2g N—N′—甲叉雙丙烯醯胺溶於0.05M pH7.0的Tris-HCl緩沖液中，取20ml與5g的濕菌泥混合均勻，加入50μl的40%過硫酸銨，混合均勻後流加到攪拌的豆油或液體石蠟中，攪拌分散成小滴，迅速加入250μl的四甲基乙二胺，小滴即很快聚合形成小珠，傾去流體，用水或緩沖液充分洗滌即可獲得珠型固定化細胞。或將菌泥混合液加入1%過硫酸銨0.25ml和10%三乙醇胺4 ml，將上述混合液攪拌均勻，不要出現氣泡，置於40℃恆溫浴中30分鍾左右，即形成聚內烯醯胺凝膠固定化細胞，在凝膠未乾時切成2~3mm3小塊，於50~60℃中乾燥後保存。使用前將包埋好的固定化細胞放入消毒後的營養液中活化24小時再用。最常用的是包埋法。

9. 請問組織和細胞的固定用什麼方法

灌流固定法
此法是經血管途徑，將固定液灌注到欲固定的器官內，使生活的細胞在原位及時迅速固定，取下組織之後再浸入相同的固定液內繼續固定。
灌流固定時大動物多採用輸液方式，將固定液從一側頸總動脈或股動脈輸入，從另一側切開靜脈放血，輸入固定液與放血同時進行。固定液的輸人量因個體不同而異，即500―2000ml不等。
生物幫上面有這方面的詳細內容，
http://www.bio1000.com/news/orgnization/3/
生物科研院所
生命科學研究所,生命科學學院,