高通基因檢測方法

① 研究蛋白質之間相互作用的實驗方法有哪些

白質與蛋白質之間相互作用構成了細胞生化反應網路的一個主要組成部分，蛋白-蛋白互作網路與轉錄調控網路對調控細胞及其信號有重要意義。把原來spaces空間上的一篇蛋白質與蛋白質間相互作用研究方法轉來，算是實驗技巧分類目錄的首篇。x0dx0ax0dx0a一、酵母雙雜交系統x0dx0a酵母雙雜交系統是當前廣泛用於蛋白質相互作用組學研究的一種重要方法。其原理是當靶蛋白和誘餌蛋白特異結合後，誘餌蛋白結合於報道基因的啟動子，啟動報道基因在酵母細胞內的表達，如果檢測到報道基因的表達產物，則說明兩者之間有相互作用，反之則兩者之間沒有相互作用。將這種技術微量化、陣列化後則可用於大規模蛋白質之間相互作用的研究。在實際工作中，人們根據需要發展了單雜交系統、三雜交系統和反向雜交系統等。Angermayr等設計了一個SOS蛋白介導的雙雜交系統。可以研究膜蛋白的功能，豐富了酵母雙雜交系統的功能。此外，酵母雙雜交系統的作用也已擴展至對蛋白質的鑒定。x0dx0ax0dx0a二、噬茵體展示技術x0dx0a在編碼噬菌體外殼蛋白基因上連接一單克隆抗體的DNA序列，當噬菌體生長時，表面就表達出相應的單抗，再將噬菌體過柱，柱上若含目的蛋白，就會與相應抗體特異性結合，這被稱為噬菌體展示技術。此技術也主要用於研究蛋白質之間的相互作用，不僅有高通量及簡便的特點，還茄手襪具有直接得到基因、高選擇性的篩選復雜混合物、在篩選過程中通過適當改變條件可以直接評價相互結合的特異性等優點。目前，用優化的噬菌體展示技術，已經展示了人和鼠的兩種特殊細胞系的cDNA文庫，並分離出了人上皮生長因子信號傳導途徑中的信號分子。x0dx0a三、等離子共振技術x0dx0a表面等離子共振技術(Surface Plasmon Resonance，SPR)已成為蛋白質相互作用研究中的新手段。它的原理是利用一種納米級的薄膜吸附上「誘餌蛋白」，當待測蛋白與誘餌蛋白結合後，薄膜的共振性質會發生改變，通過檢測便可知這兩種蛋白的結合情況。SPR技術的優點是不需標記物或染料，反應過程可實時監控。測定快速且安全，還可用於檢測蛋白一核酸及其它生物大分子之間的相互作用。x0dx0a四、熒光能量轉移技術x0dx0a熒光共振能量轉移（FRET ）廣泛用於研究分子間的距離及其相互作用; 與熒光顯微鏡結合，可定量獲取有關生物活體內蛋白質、脂類、DNA 和RNA 的時空信息。隨著綠色熒光蛋白（GFP）的發展，FRET 熒光顯微鏡有可能實時測量活體細胞內分子的動態性質。提出了一種定量測量FRET效率以及顫激供體與受體間距離的簡單方法，僅需使用一組濾光片和測量一個比值，利用供體和受體的發射譜消除光譜間的串擾。該方法簡單快速，可實時定量測量FRET 的效率和供體與受體間的距離，尤其適用於基於GFP 的供體受體對。x0dx0a五、抗體與蛋白質陣列技術x0dx0a蛋白晶元技術的出現給蛋白質組學研究帶來新的思路。蛋白質組學研究中一個主要的內容就是研究在不同生理狀態下蛋白水平的量變，微型化，集成化，高通量化的抗體晶元就是一個非常好的研究工具，他也是晶元中發展最快的晶元，而且在技術上已經日益成熟。這些抗體晶元有的已經在向臨床應用上發展，比如腫瘤標志物抗體晶元等，還有很多已經應用再眼就的各個領域里。x0dx0a六薯知、免疫共沉澱技術 x0dx0a免疫共沉澱主要是用來研究蛋白質與蛋白質相互作用[/url]的一種技術，其基本原理是，在細胞裂解液中加入抗興趣蛋白的抗體，孵育後再加入與抗體特異結合的結合於Pansobin珠上的金黃色葡萄球菌蛋白A(SPA)，若細胞中有正與興趣蛋白結合的目的蛋白，就可以形成這樣一種復合物：「目的蛋白—興趣蛋白—抗興趣蛋白抗體—SPA\|Pansobin」，因為SPA\|Pansobin比較大，這樣復合物在離心時就被分離出來。經變性聚丙烯醯胺凝膠電泳，復合物四組分又被分開。然後經Western blotting法，用抗體檢測目的蛋白是什麼，是否為預測蛋白。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內天然與興趣蛋白結合的，符合體內實際情況，得到的蛋白可信度高。但這種方法有兩個缺陷：一是兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋梁作用；二是必須在實驗前預測目的蛋白是什麼，以選擇最後檢測的抗體，所以，若預測不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。x0dx0a七、pull-down技術x0dx0a蛋白質相互作用的類型有牢固型相互作用和暫時型相互作用兩種。牢固型相互作用以多亞基蛋白復合體常見，最好通過免疫共沉澱（Co-IP） 、Pull-down技術或Far-western法研究。Pull-down技術用固相化的、已標記的餌蛋白或標簽蛋白（生物素-、PolyHis-或GST-），從細胞裂解液中釣出與之相互作用的蛋白。通過Pull-down技術可以確定已知的蛋白與釣出蛋白或已純化的相關蛋白間的相互作用關系，從體外傳路或翻譯體系中檢測出蛋白相互作用關系。

② DNA序列是怎麼測量出來的

大致過程也是先把 DNA 切成短序列模板，然後把這些短序列都放固定到要成像的 chip 上，每個短序列都是一個 polony，就是說在 chip 占據一個位置，在這個位置上固定的是一批通過 PCR 復制的這段序列的克隆。
然後就跟傳統方法一樣，配對生長，每長一個核苷酸，就成像一次，在圖像上看就是無數的小點，每個小點對應一個 polony，回頭通過分析就是這個 polony 對應序列的一個核酸（其實具體的技術還很不同，這么說太粗了）。這樣生長下去，就能把每個 polony 的序列給測出來了。
好處當然是因為高通量，所以一下子就把一個基因組就測了（理論上）。缺點是，每個序列長度都短：長 polony 時，每一步都會因為種種問題，有些序列模板長不下去了，信號也會變弱。最後得到的序列長度相對傳統方法就短一些。
短的問題是，它很難作 de novo 的測序，就是說，因為短序列之間的交疊太少，就無法從短序列合成出全部基因組（事實上，就是傳統的 sanger 法，在染色體末端，因為有大量的重復序列，也是無法很好的測出的，所以人類基因組推出時，這段是沒有的）。所以只能拿舊方法測出的全基因組作參考序列，把短序列對上去（alignment）。這樣，也是越長，對得越准，出現不確定結果的可能越小。
類似的問題是，測序終歸是要看這序列與已知序列的異同，就要面對有很多不同，短序列對很多基因變異的檢測能力會下降，比如染色體的倍增這樣的。
另外的問題是 coverage，就是說用這種高通路方法，生成的以億計的 polony，看上去看多，但可能還是會錯過部分基因組，而在某些部分有很多的短序列覆蓋。早期的方法，好像是能覆蓋 80％，也就叫全基因組測序了。