常用的抗原檢測方法

1. 抗原或抗體的體外檢測方法有哪些

抗原抗體檢測有凝集反映、沉澱反應、放免技術、熒光技術、酶聯免疫,化學發光、生物親和,固相免疫、免疫組化等技術

2. 免疫學檢驗常用技術有哪些

以下是幾種常用的免疫學技術：
1．免疫熒光技術
免疫熒光技術是利用熒光素標記的抗體（或抗原）檢測組織、細胞或血清 中的相應抗原（或抗體）的方法。由於熒光抗體具有安全、靈敏的特點，因此已 廣泛應用在免疫熒光檢測和流式細胞計數領域。根據熒光素標記的方式不同，可 分為直標熒光抗體和間標熒光抗體。間標熒光抗體中一抗並不直接連接熒光素， 而是先將一抗結合到蛋白，然後帶有熒光素的二抗再結合至一抗。通過二抗的結 合，能將信號進行放大，因此能在一定程度上提高檢測的靈敏度，但是隨之帶來 的高背景也降低了檢測的特異性。近年來，隨著熒光素和熒光檢測技術的不斷進 步，熒光檢測的靈敏度已經接近同位素檢測的水平，直接標記的熒光抗體逐漸取 代間接標記抗體。這些標記了熒光素的抗體直接結合至抗原，大大提高了檢測的 特異性，使檢測的結果更加准確可靠。熒光檢測技術的發展，使得免疫熒光技術 在傳染病診斷上有廣泛的用途，如在細菌、病毒、螺旋體感染的疾病，檢查IgM 抗體，做為近期接觸抗原的標志。利用單克隆熒光直接標記抗體鑒定淋巴細胞的 亞類。通過流式細胞儀，針對細胞表面不同抗原，可以同時使用多種不同的熒光 抗體，對同一細胞進行多標記染色。
2．放射免疫檢測
放射免疫檢測技術是目前靈敏度最高的檢測技術，利用放射性同素標記抗 原（或抗體），與相應抗體（或抗原）結合後，通過測定抗原抗體結合物的放射 性檢測結果。放射性同位素具有pg 級的靈敏度，且利用反復曝光的方法可對痕 量物質進行定量檢測。但放射性同位素對人體的損傷也限制了該方法的使用。

3．酶聯免疫吸附試驗（ELISA）
酶聯免疫檢測是目前應用最廣泛的免疫檢測方法。該方法是將二抗標記上 酶，抗原抗體反應的特異性與酶催化底物的作用結合起來，根據酶作用底物後的 顯色顏色變化來判斷試驗結果，其敏感度可達ng 水平。常見用於標記的酶有辣 根過氧化物酶(HRP)、鹼性磷酸酶（AP）等。由於酶聯免疫法無需特殊的儀器， 檢測簡單，因此被廣泛應用於疾病檢測。常用的方法有間接法、夾心法以及BAS －ELISA。間接法是先將待測的蛋白抱被在孔板內，然後依次加入一抗、標記了 酶的二抗和底物顯色，通過儀器（例如酶標儀）定量檢測抗原。這種方法操作簡 單但由於高背景而特異性較差。目前已逐漸被夾心法取代。夾心法利用二種一抗 對目標抗原進行捕獲和固定，在確保靈敏度的同時大大提高了反應的特異性。近 年來，抗原的定量檢測技術也不斷推陳出新。近年來，在夾心法ELISA 的基礎上， 開發了多抗原檢測試劑盒，能同時檢測微量液相樣本中多個抗原含量。這項技術 的應用大大縮短了診斷的時間，提高診斷的可靠性和及時性。
4．免疫金膠體技術
膠體金技術經過30 多年的發展到現在已日趨成熟，該方法是將二抗標記上 膠體金顆粒，利用抗原抗體間的特異性反應，最終將膠體金標記的二抗吸附於滲 濾膜上，此方法簡單，快速，廣泛應用於臨床篩查。

3. 臨床免疫檢驗常用的分析技術

一、免疫標記技術：2種分類

1.(1) 免疫組化技術(immunohistochemical technique): 用於組織切片或其他標本中抗原抗體的定位(2)免疫測定(immunoassay): 用於液體標本中抗原或抗體的測定.

2.(1) 免疫熒光技術 (2) 酶免疫技術 (3) 放射免疫技術(4) 金標技術(5)化學發光技術

酶免疫技術—固相酶免疫技術―酶聯免疫吸附測定(ELISA)

ELISA方法類型與操作步驟

雙抗體夾心法：檢測抗原最常用的方法

原理(操作步驟)： (1) 特異性抗體包被載體形成固相抗體. (2) 洗去未結合的抗體和雜質. (3) 加入待測樣品，使其中相應抗原和固相抗體呈特異性結合成復合物. (4) 再洗滌除去未結合的物質.(5) 加酶標抗體，使之與固相上的抗原呈特異性結合.(6) 經充分洗滌後除去未結合的游離酶標記抗體.(7) 加入相應酶的底物，固相化的酶催化底物變成有色產物，顏色反應的程

度與固相上抗原的量有關.

適用范圍：檢測抗原的最常用方法 ,用此方法檢測的抗原，應至少有2個以上結合位點，故不能用以測定半抗原物質。

2、競爭法：(可用於測定抗原或抗體)

原理(操作步驟)：以測定抗原為例(1) 將特異性抗體包被載體，使形成固相抗體,(2) 洗去雜質，待測孔中同時加待測標本和酶標記抗原，使之與固相抗體反應。如待測標本中含有抗原，則與酶標記抗原共同競爭結合固相抗體。待測標本中抗原量越多，酶標記抗原結合量越少(3) 洗滌除去游離酶標記物後，加底物顯色(4) 結果是不含受檢抗原的對照孔，其結合的酶標記抗原最多，顯色最深。對照孔與待測孔顏色深度之差代表受檢標本中的抗原量。待測孔越淡, 標本中抗原量越多。

3、間接法：(可檢測各種相應抗體)

原理(操作步驟)：(1) 將特異性抗原包被載體，使形成固相抗原; (2) 洗去未結合的物質,加入待測樣品，使其中待測的特異性抗體與固相抗原相結合形成固相抗原抗原復合物;(4)再經洗滌後，固相上僅留下特異性抗體; (5) 加酶標抗人球蛋白(酶標抗抗體)，使與固相復合物中抗體結合，從而使待測抗體間接標記上酶;(6) 洗滌除去多餘的酶標抗體，固相結合酶量就代表待測抗體的`量; (7) 最後加入底物顯色，其顏色深淺可代表待測抗體量。

免疫熒光法---抗核抗體的檢測

二、沉澱反應

可溶性抗原與相應抗體特異性結合所出現的反應。反應分為兩個階段:(1) 抗原抗體特異性結合;(2) 形成可見的免疫復合物。

三、凝集反應

細菌和紅細胞等顆粒性抗原與相應抗體結合後，出現肉眼可見的凝集(agglutination)現象。

凝集反應的發生分為兩個階段：(1)抗原抗體的特異結合;(2)出現可見的顆粒凝聚。

4. 酶聯免疫法的檢測方法

雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下：
一、將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質。
二、加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。
三、加酶標抗體：使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量正相關。
四、加底物：夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。
根據同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物，即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。
在臨床檢驗中，此法適用於檢驗各種蛋白質等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用於包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清，包被和酶標用的抗體最好分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用於包被固相載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應，作一步法檢測。
在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物。類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象，此時反應後顯色的吸光值（位於抗原過剩帶上）與標准曲線（位於抗體過剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同，如按常法測讀，所得結果將低於實際的含量，這種現象被稱為鉤狀效應（hook effect），因為標准曲線到達高峰後呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時，反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時，應注意可測范圍的最高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。
假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型，顯然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性，這也是用單抗作夾心法應注意的問題。
雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子（RF）的干擾。RF是一種自身抗體，多為IgM型，能和多種動物IgG的Fc段結合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF，它可充當抗原成份，同時與固相抗體和酶標抗體結合，表現出假陽性反應。採用F（ab'）或Fab片段作酶結合物的試劑，由於去除了Fc段，從而可消除RF的干擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響，已被列為這類試劑的一項考核指標（參見6.2）。
雙抗體夾心法適用於測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用於測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。
雙抗原夾心法測抗體
反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物，以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋，可直接用於測定，因此其敏感度相對高於間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常採用本法。本法關鍵在於酶標抗原的制備，應根據抗原結構的不同，尋找合適的標記方法。 在雙抗體夾心法測定抗原時，如應用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，則在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步並作一步。這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應時間，如應用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應用使測定抗原的ELISA提高到新水平。
在一步法測定中，應注意鉤狀效應（hookeffect），類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象。當標本中待測抗原濃度相當高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物，所得結果將低於實際含量。鉤狀效應嚴重時甚至可出現假陰性結果。 間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶標記的抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：
⑴將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質。
⑵加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌後，固相載體上只留下特異性抗體。其他抗體及血清中的雜質由於不能與固相抗原結合，在洗滌過程中被洗去。
⑶加酶標抗抗體：與固相復合物中的抗體結合，從而使該抗體間接地標記上酶。洗滌後，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體，可用酶標羊抗人IgG抗體。
⑷加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。
本法主要用於對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。間接法的優點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗抗體建立檢測相應抗體的方法。
間接法成功的關鍵在於抗原的純度。雖然有時用粗提抗原包被也能取得實際有效的結果，但應盡可能予以純化，以提高試驗的特異性。特別應注意除去能與一般健康人血清發生反應的雜質，例如以E.Coli為工程酶的重組抗原，如其中含有E.Coli成份，很可能與受過E.Coli感染者血清中的抗E.Coli抗體發生反應。抗原中也不能含有與酶標抗人Ig反應的物質，例如來自人血漿或人體組織的抗原，如不將其中的Ig去除，試驗中也發生假陽性反應。另外如抗原中含有無關蛋白，也會因競爭吸附而影響包被效果。
間接法中另一種干擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性抗體。病人血清中受檢的特異性IgG只佔總IgG中的一小部分。IgG的吸附性很強，非特異IgG可直接吸附到固相載體上，有時也可吸附到包被抗原的表面。因此在間接法中，抗原包被後一般用無關蛋白質（例如牛血清蛋白）再包被一次，以封閉（blocking）固相上的空餘間隙。另外，在檢測過程中標本須先行稀釋（1:40~1:200），以避免過高的陰性本底影響結果的判斷。 競爭法可用於測定抗原，也可用於測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合，因此結合於固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下：
⑴將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌。
⑵待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應。如受檢標本中無抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結合。如受檢標本中含有抗原，則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結合，競爭性地佔去了酶標抗原與固相載體結合的機會，使酶標抗原與固相載體的結合量減少。參考管中只加酶標抗原，保溫後，酶標抗原與固相抗體的結合可達最充分的量。洗滌。
⑶加底物顯色：參考管中由於結合的酶標抗原最多，故顏色最深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淡，表示標本中抗原含量越多。一般情況，是通過方波伏安法，檢測培養體系的峰電流，通過峰電流與抗原抗體的線性關系來最終確定體系的最終檢測目標的濃度。
當抗原材料中的干擾物質不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。標本中抗體量越多，結合在固相上的酶標抗體愈少，因此陽性反應呈色淺於陰性反應。如抗原為高純度的，可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質，直接包被不易成功，可採用捕獲包被法，即先包被與固相抗原相應的抗體，然後加入抗原，形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質，然後再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應。競爭法測抗體有多種模式，可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合，抗HBc ELISA一般採用此法。另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合，洗滌後再加入酶標抗體，與結合在固相上的抗原反應。抗HBe的檢測一般採用此法。 血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在，後者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗體多用捕獲法，先將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG後再測定特異性IgM。操作步驟如下：
⑴將抗人IgM抗體連接在固相載體上，形成固相抗人IgM。洗滌。
⑵加入稀釋的血清標本：保溫反應後血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質成分。
⑶加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性IgM結合。洗滌。
⑷加入針對特異性的酶標抗體：使之與結合在固相上的抗原反應結合。洗滌。
⑸加底物顯色：如有顏色顯示，則表示血清標本中的特異性IgM抗體存在，是為陽性反應。 親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結合。維生素H，分子量244.31，存在於蛋黃中。用化學方法製成的衍生物，生物素－羥基琥珀亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可與蛋白質、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產物。親和素與生物素的結合，雖不屬免疫反應，但特異性強，親和力大，兩者一經結合就極為穩定。由於1個親和素分子有4個生物素分子的結合位置，可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復合體。因此把親和素和生物素與ELISA偶聯起來，就可大提高ELISA的敏感度。
親和素－生物素系統在ELISA中的應用有多種形式，可用於間接包被，亦可用於終反應放大。可以在固相上先預包被親和素，原用吸附法包被固相的抗體或抗原與生物素結合，通過親和素－生物素反應而使生物素化的抗體或抗在相化。這種包被法不僅可增加吸附的抗體或抗原量，而且使其結合點充分暴露。另外，在常規ELISA中的酶標抗體也可用生物素化的抗體替代，然後連接親和素－酶結合物，以放大反應信號。 在臨床檢驗中一般採用商品試劑盒進行測定。ELISA中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：
⑴已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；⑵酶標記的抗原或抗體（結合物）；
⑶酶的底物；
⑷陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標准品和控制血清（定量測定中）；
⑸酶聯物（結合物）及標本的稀釋液；
⑹洗滌液；
⑺酶反應終止液。

5. 檢測乙肝表面抗原的方法都有什麼具體一點點

去醫院化驗。有專門的一項叫乙肝抗體
然後抗原抗體都查了
僅僅抗體陽性不能確診乙肝
如果抗原抗體都陽的話才行

6. vivo抗原怎麼測

抗原測的方法為：
1、清潔雙手：在抗原檢測之前，應當對雙手進行嚴格消毒、清潔。然後檢查試劑盒的包裝是否完好、破損。
2、樣本採集：清理鼻腔，頭稍向後仰。手持鼻拭子的尾部從一側鼻孔進入，慢慢向鼻腔深入，在鼻腔內部至少旋轉4圈，然後在另一側鼻腔重復這一操作。
3、樣本提取：取樣後立即將鼻拭子放入取樣管內，用力旋轉拭子使其充分與處理液混合。
4、檢測：折斷處理瓶的蓋子，取出檢測卡，垂直倒置處理瓶，滴三滴液體到樣品孔中，等待十五分鍾。檢測卡C處顯色而T處未顯為陰性，若C處和T處均顯色為陽性，T刻度線一條杠代表檢測無效。
5、廢物處理：要將檢測物品裝入醫療密封袋內，按醫療廢物處置。

7. 請問;檢測 衣原體 抗原(ELISA)法是什麼

酶聯免疫吸附劑測定
enzyme linked immunosorbent assay，ELISA。指將可溶性的抗原或抗體吸附到聚苯乙烯等固相載體上，進行免疫反應的定性和定量方法。
基本原理
1971年Engvall和Perlmann發表了酶聯免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用於IgG定量測定的文章，使得1966年開始用於抗原定位的酶標抗體技術發展成液體標本中微量物質的測定方法。這一方法的基本原理是：①使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，並保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開，最後結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物後，底物被酶催化變為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據顏色反應的深淺刊物定性或定量分析。由於酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。
方法類型和操作步驟
ELISA可用於測定抗原，也可用於測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體，②酶標記的抗原或抗體，③酶作用的底物。根據試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件，可設計出各種不同類型的檢測方法。

（一）雙抗體夾心法
雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下：
（1）將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質。
（2）加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。
（3）加酶標抗體：使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量正相關。
（4）加底物：夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。
根據同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物，即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。

（二）雙位點一步法
在雙抗體夾心法測定抗原時，如應用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，則在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步並作一步（圖15-5）。這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應時間，如應用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應用使測定抗原的ELISA提高到新水平。
在一步法測定中，應注意鉤狀效應（hookeffect），類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象。當標本中待測抗原濃度相當高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物，所得結果將低於實際含量。鉤狀效應嚴重時甚至可出現假陰性結果。
（三）間接法測抗體
間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：
（1）將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質。
（2）加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌後，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質由於不能與固相抗原結合，在洗滌過程中被洗去。
（3）加酶標抗抗體：與固相復合物中的抗體結合，從而使該抗體間接地標記上酶。洗滌後，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體，可用酶標羊抗人IgG抗體。
（4）加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。
本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標抗抗體檢測各種與抗原相應的抗體。
（四）競爭法
競爭法可用於測定抗原，也可用於測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合，因此結合於固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下：
（1）將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌。
（2）待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應。如受檢標本中無抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結合。如受檢標本中含有抗原，則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結合，競爭性地佔去了酶標抗原與固相載體結合的機會，使酶標抗原與固相載體的結合量減少。參考管中只加酶標抗原，保溫後，酶標抗原與固相抗體的結合可達最充分的量。洗滌。 （3）加底物顯色：參考管中由於結合的酶標抗原最多，故顏色最深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淡，表示標本中抗原含量越多。
（五）捕獲法測IgM抗體
血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在，後者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗本多用捕獲法，先將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG後再測定特異性IgM。操作步驟如下：
（1）將抗人IgM抗體連接在固相載體上，形成固相抗人IgM。洗滌。
（2）加入稀釋的血清標本：保溫反應後血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質成分。
（3）加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性IgM結合。洗滌。
（4）加入針對特異性的酶標抗體：使之與結合在固相上的抗原反應結合。洗滌。
（5）加底物顯色：如有顏色顯示，則表示血清標本中的特異性IgM抗體存在，是為陽性反應。
（六）應用親和素和生物素的ELISA
親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結合。現在使用更多的是從鏈黴菌中提取的鏈霉和素（strepavidin）。生物素（biotin）又稱維生素H，分子量244.31，存在於蛋黃中。用化學方法製成的衍生物，生物素－羥基琥珀亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可與蛋白質、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產物。親和素與生物素的結合，雖不屬免疫反應，但特異性強，親和力大，兩者一經結合就極為穩定。由於1個親和素分子有4個生物素分子的結合位置，可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復合體。因此把親和素和生物素與ELIS偶聯起來，就可大提高ELISA的敏感度。
親和素－生物素系統在ELISA中的應用有多種形式，可用於間接包被，亦可用於終反應放大。可以在固相上先預包被親和素，原用吸附法包被固相的抗體或抗原與生物素結合，通過親和素－生物素反應而使生物素化的抗體或抗在相化。這種包被法不僅可增加吸附的抗體或抗原量，而且使其結合點充分暴露。另外，在常規ELISA中的酶標抗體也可用生物素化的抗體替代，然後連接親和素－酶結合物，以放大反應信號。
ELISA 普遍用作非放射性同位素的成鍵化驗. 在這種方法中, 通常標准配體是固定的, 通過加入溶液相受體或蛋白質來使之成鍵. 通過加入與受體特異性反應的抗體來定量成鍵的受體, 而且最初抗體的量以加入第二種能顯色的抗體測量. 第二種抗體能識別抗體的末端, 在其末端的鹼性磷酸酯或過氧化物酶等與酶發生反應, 從而使溶液顯色.

8. 艾滋病怎麼檢測

艾滋病是一種嚴重的性病，一個朋友當中懷孕自己得了這種疾病，到醫院進行過檢測，那麼，艾滋病怎麼檢測?下面和大家介紹一下。
1. 檢測方法一、抗體檢測。主要有酶聯免疫吸附試驗(ELISA)和免疫熒光試驗(IFA)。快速檢測法，也稱為金標法，也是抗體檢測的一種方法，根據免疫層析法的原理，用於HIV抗體檢測的定性檢測，這也是一種最常用的方法，同時檢測的准確率高達90%。


2. 檢測方法二、抗原檢測。用ELISA檢測P24抗原,在HIV感染早期尚未出現抗體時,血中就有該抗原存在.由於P24量太少,陽性率通常較低。現有用解離免疫復合物法或濃縮P24抗原，來提高敏感性。


3. 檢測方法三、核酸檢測。用PCR法檢測HIV基因，具有快速、高效、敏感和特異等優點，目前該法已被應用於HIV感染早期診斷及艾滋病的研究中。


注意事項
艾滋病是一種嚴重的疾病，特別是也會有潛伏期，在平時的時候要重視對這種疾病的預防，主要是在進行性生活的時候要做好防護的措施，而且也要注意輸血等情況的保護方法。

9. ELISA技術中，最常用來檢測抗原的方法是

正確答案:A
解析：ELISA技術中，最常用來檢測抗原的方法是雙抗體夾心法
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