laminol檢測ros的方法

❶ ros染色原理

ROS(reactive oxygen species)即活性氧自由基，主要包括活性氧族如超氧陰離子自由基(O2-·)、過氧化氫(H2O2)、羥自由基(OH·)和單線態氧，通常是有氧代謝的副產物。

在病理條件下，由於活性氧的產生和清除失去了正常平衡，會對組織細胞造成損傷。

二氫乙錠(Dihydroethidium, DHE)，可自由透過活細胞進入細胞內，並被細胞內的ROS氧化，形成氧化乙錠;氧化乙錠可摻入染色體DNA中，產生紅色熒光。

根據活細胞中紅色熒光的產生，可以判斷細胞ROS含量的多少和變化。檢測ROS水平常用於凋亡、衰老、自噬、炎症、缺血再灌注損傷、神經退行疾病等領域的研究。

ROS染色是活氧檢測，組織冰凍切片不能用固定液固定，最好是新鮮組織，ROS陰性細胞僅有較低的熒光強度，ROS陽性細胞有較強的紅色熒光。

❷ huvecs細胞用DCF探針檢測ROS時，陽性對照雙氧水的濃度是多大

huvecs細胞用DCF探針檢測ROS時，陽性對照雙氧水的濃度
這個濃度我也試了很多次，最後確定用的是2mM，比陰性對照高8倍左右！

❸ 如何用流式細胞儀檢測細胞內的ROS

流式檢測ROS的特異性比較差。一般來說，針對過氧化氫和超氧化物有熒光探針。加到細胞培養液後，細胞攝齲遇到ROS，可以發出熒光，上機檢測可以比較各組之間熒光強度的變化從而代表ROS水平的不同。你這個圖橫坐標代表的是相對熒光強度，縱坐標代表的是細胞計數。 圖的含義就是在每個熒光強度有多少細胞。 估計你用了氧化敏感的熒光指針，ROS反應後熒光增加。所以你應該先用對照組設一個閾值，看實驗組的熒光強度有沒有高於或者低於該閾值。

❹ 誰能告訴我怎麼看流式檢測ROS的圖啊

你是不是想問winbox中interfaces----traffic，這里顯示的圖？
如是的，當中，就是tx與rx，一個出一個進，或是說一個下載，一個上傳，上下兩圖是相對的。
其實，可以簡單的看，大的數字為下載的流量，小的數字為上傳的。一般的都是下載大於上傳的。
就此圖沒有多大的意義。
能觀察到的，也就是流量的峰值。

❺ 求助各位專家DHE染色檢測ROS的具體步驟

細胞免疫熒光的詳細操作步驟1，取出細胞爬片放到35mm或60mm用過的細胞培養皿里，PBS洗三遍。注意有的時候作的細胞爬片可能比較小，因此夾取的時候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分鍾，PBS洗三遍。3，0.2%TritonX100通透10分鍾，PBS洗三遍。4，與二抗相同宿主的血清封閉30分鍾，PBS洗三遍。5.，一抗4度濕盒內過夜，也可37度2小時，感覺前者效果好，PBS洗三遍。6，二抗室溫2小時，或者37度1半小時，PBS洗三遍。7，最好用DAPI染核，然後直接照熒光片。8，蒸餾水洗掉PBS，甘油封片，指甲油封片子的四周。

❻ 求助關於用氧化敏感探針DCFH-DA檢測細胞內ROS

DCFH-DA 的使用步驟：
DCFH-DA使用僅提供指導和參考，具體實驗方案應針對您的特定應用進行修改：
1. BCECF開封前，適當的做離心，以保證粉末落入樣品管低,確保染料足量；
2.加入適量無水DMSO（DMSO檢驗用有機濾器進行過濾使用） 或者其他有機溶劑配製成 1～10mM儲存液進行使用，剩餘的制備液分裝存儲，避免重復凍融影響試劑活性；
3. 正式開始實驗前，採用生理鹽緩沖液（常用的緩沖液有：PBS緩沖液，HBSSS緩沖液 和HEPESS緩沖液）稀釋至工作濃度1～10μM之間，不同實驗需根據需求調整至合適的工作濃度；
4. 從培養基中取出細胞，向細胞中加入染料工作溶液，然後在室溫或 37℃條件孵育細胞 5-60 分鍾時長；
5. 吸走染色用的工作液，然後用預熱的緩沖液 或 細胞培養液進行清洗一遍。之後再加入預熱的緩沖液或者細胞培養液，在適宜恆溫條件下孵育。對於二乙酸酯的衍生物，需要短暫復原時間讓細胞內酯酶將其水解，從而讓染料對氧化應激產生反應。最佳的復原時間范圍很廣，由於某些細胞類型通常顯示極其低水平的酯酶活性；
6.將細胞置於刺激物錢，需要先測定載入細胞的背景熒光強度；
7. 評估陰性對照：

• 綠色發射光譜內檢查未染色細胞的自熒光情況；

• 對於流式分析，查明染料載入和處理後細胞的前向角散射和側向角散射是不變。細胞尺寸的變化可能與起泡或萎縮有關，由於處理或有毒反應引起的。

• 對包含和不包含刺激物的染料和緩沖液/培養基的無細胞混合物進行熒光檢測。在不含細胞外酯酶和其他氧化酶的情況下，隨著時間熒光的逐漸增加可能與瞬間水解、空氣氧化、和/或光誘導氧化有關。

• 檢查培養在生長培養液或簡單緩沖液內的未處理載入細胞（對照）的熒光。在健康細胞內，細胞內酶和/或天然抗氧化劑會清除這些氧自由基。經過染料載入復原時間後，健康細胞應該表現出低水平的熒光信號，且在整個實驗期間相對穩定。然而，逐漸增加（由於自氧化）或降低（由於細胞內染料喪失或光淬滅）也有可能觀察到。在不含任何刺激物或誘導劑的體系內，健康和未處理細胞突然發現強熒光，表明細胞發生死亡或一些其他的氧化事件。

• 8. 建立陽性對照，可採用下面方法刺激氧化活性：

• 腫瘤促進劑（PMA，工作濃度100pM～10μM）

• H2O2 或者 TBHP（終濃度~100μM）（可以調節濃度：根據細胞對其的靈敏度以及反應性提高或降低濃度）。

• 9. 需要確保其他化合物或者刺激試劑不造成起染料熒光淬滅。同時檢查化合物的吸收光譜，確認化合物的吸收峰不會與氧化後的染料最大激發或者是發射光譜出現重讀。

❼ 如何用ping指令來檢測ROS路由器網路連接

PING命令
用於驗證與遠程計算機的連接。該命令只有在安裝了 TCP/IP 協議後才可以使用。Ping命令的主要作用是通過發送數據包並接收應答信息來檢測兩台計算機之間的網路是否連通。當網路出現故障的時候，可以用這個命令來預測故障和確定故障地點。Ping命令成功只是說明當前主機與目的主機之間存在一條連通的路徑。如果不成功，則考慮：網線是否連通、網卡設置是否正確、IP地址是否可用等。

❽ 組織中的ros一般用什麼方法檢測

活性氧檢測試劑盒是利用熒光探針DCFH-DA進行活性氧檢測的。DCFH-DA本身沒有熒光，可以自由穿過細胞膜，進入細胞內後，可以被細胞內的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細胞膜，從而使探針很容易被裝載到細胞內。細胞內的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細胞內活性氧的水平。活性氧檢測試劑盒。

熒光法檢測線粒體產生和釋放的反應性氧化物（ROS）[10]。羥基自由基的檢測（二羥苄胺DHBAs和水楊酸鹽Salicylate）[11] ROS was evaluated by the staining of 2』，7』- dichlorofluorescein diacetate（二氯熒光乙醯乙酸鹽）.ROS proction was detected by nitroblue tetrazolium （NBT，硝基四氮唑藍）assay。

目前，對於細胞線粒體產生的ROS 測定，所發展的方法有（熒游標記後）激光掃描共聚焦顯微術（Takahashi et al.，2002）和熒光探劑DCFDA標記後的熒光分光光度法（Esposti ，2002）等，本實驗以lucigenin 或luminol 為探劑，用化學發光技術，對從正常大鼠肝細胞及心肌細胞分離的線粒體的METC 電子漏進行了測定

❾ 流式檢測檢測ros，細胞數要一致嗎

流式細胞檢測的是相對值，所以每個樣本的細胞數和細胞濃度在染色前都應該一致