vb12鑒別和測定方法

『壹』 維生素b1的鑒別方法和檢查方法，要根據中國葯典的。謝謝

鑒別：

（1）取本品約5mg，加氫氧化鈉試液2.5ml溶解後，加鐵氰化鉀試液0.5ml與正丁醇5ml，強力振搖2分鍾，放置使分層，上面的醇層顯強烈的藍色熒光；加酸使之成酸性，熒光即消失；再加鹼成鹼性，熒光又顯出。
（2）取本品適量，加水溶解，水浴蒸干，在105℃乾燥2小時測定。本品的紅外吸收圖譜應與對照的圖譜（光譜集1205圖）一致。
（3）本品的水溶液顯氯化物的鑒別反應。

『貳』 vb12的功效與作用說明書

VB12也叫做維生素B12，是一種維生素。

維生素B12具有以下功效：

1、營養神經，維生素B12具有營養神經，促進神經纖維修復的作用。廣泛用於各種神經系統疾病，包括腦出血、腦梗死、短暫性腦缺血發作、面神經麻痹、脊髓病變、脫髓鞘病變、周圍神經病變、阿爾茨海默病、帕金森病、自主神經功能失調等。

2、糾正貧血，維生素B12常與葉酸聯用治療巨幼紅細胞性貧血，多用於治療胃大部分切除術後貧血的病人。

3、促進睡眠，維生素B12還具有誘導睡眠，提高睡眠質量，減輕多夢症狀的作用。

4、維生素B12還具有緩解眼睛酸脹、干澀的作用。

(2)vb12鑒別和測定方法擴展閱讀：

維生素B12的用途：

1，用於治療和預防維生素B12缺乏症。

2，用於胃切除或吸收不良綜合症，維生素B12缺乏造成貧血的預防。

3，用於補充因消耗性疾病，甲狀腺機能亢進，妊娠，哺乳等造成的維生素B12需求增加。

4，營養性和妊娠性貧血。

5，廣節裂頭絛蟲病貧血。

6，肝障礙貧血。

7，放射性引起的白細胞減少。

8，神經疼，肌肉疼，關節疼。

9，末梢神經炎，末梢神經麻痹。

10，脊髓炎，脊髓變性。

『叄』 vb12含量測定吸收池的透光率和厚度不能完全一致什麼情況下必須做檢驗校正

70．氯化鈉溶液和硝酸銀溶液：NaCl + AgNO3 ==== AgCl↓ + NaNO3
71．硫酸鈉和氯化鋇：Na2SO4 + BaCl2 ==== BaSO4↓ + 2NaCl
五．其它反應：
72．二氧化碳溶解於水：CO2 + H2O === H2CO3
73．生石灰溶於水：CaO + H2O === Ca(OH)2
74．氧化鈉溶於水：Na2O + H2O ==== 2NaOH
75．三氧化硫溶於水：SO3 + H2O ==== H2SO4
76．硫酸銅晶體受熱分解：CuSO4·5H2O 加熱 CuSO4 + 5H2O
77．無水硫酸銅作乾燥劑：CuSO4 + 5H2O ==== CuSO4·5H2O

『肆』 vb12能與什麼物質特異性結合

（1）和抗原特異性結合的為抗體，故若物質B為抗原，物質A為抗體，其化學本質是蛋白質．能分泌抗體的為漿細胞，它可能是由B細胞或記憶細胞產生的．抗體由核糖體合成，經內質網和高爾基體加工後，通過胞吐分泌到細胞外，故合成、運輸、釋放直接相關的細胞器為④→⑤→⑥．
（2）若物質A為神經遞質，因神經遞質與突觸後膜上的受體相結合，故B是受體，物質A釋放過程為胞吐過程，需要能量，不需要載體．
（3）若物質A為促甲狀腺激素釋放激素，它能促進垂體分泌促甲狀腺激素，故B位於垂體細胞上．
（4）由於核酸中和磷脂中均含有P元素，具有膜的細胞結構均含有磷脂，故含有核酸和膜結構的均含有P元素，故圖中含有P元素的結構包括②細胞核，③線粒體，④核糖體，⑤內質網，⑥高爾基體，⑦細胞膜．
故答案為：
（1）抗體蛋白質 漿細胞 B細胞或記憶 ④→⑤→⑥
（2）特異性受體 需要能量不需要載體
（3）垂體
（4）②③④⑤⑥⑦

『伍』 紫外和液相方法檢測的維生素B12 有何不同

論壇上有這樣的帖子，紫外檢測是1.0%的B12，用液相檢測的話含量僅有0.4～0.6% 查看原帖>>

『陸』 VB12的作用

維生素B12又叫鈷胺素，是唯一含金屬元素的維生素。自然界中的維生素B12都是微生物合成的，高等動植物不能製造維生素B12。維生素B12是唯一的一種需要一種腸道分泌物（內源因子）幫助才能被吸收的維生素。有的人由於腸胃異常，缺乏這種內源因子，即使膳食中來源充足也會患惡性貧血。植物性食物中基本上沒有維生素B12。它在腸道內停留時間長，大約需要三小時（大多數水溶性維生素只需要幾秒鍾）才能被吸收。維生素B12的主要生理功能是參與製造骨髓紅細胞，防止惡性貧血；防止大腦神經受到破壞。維生素B12是B族維生素中迄今為止發現最晚的一種。維生素B12是一種含有3價鈷的多環系化合物，4個還原的吡咯環連在一起變成為1個咕啉大環（與卟啉相似），是維生素B12分子的核心。所以含這種環的化合物都被稱為類咕啉。維生素B12為淺紅色的針狀結晶，易溶於水和乙醇，在pH值4.5～5.0弱酸條件下最穩定，強酸（pH<2）或鹼性溶液中分解，遇熱可有一定程度破壞，但短時間的高溫消毒損失小，遇強光或紫外線易被破壞。普通烹調過程損失量約30%。
希望採納一下

『柒』 如何利用VB12專一性微生物對樣品VB12進行定量分析

1:無水磷酸氫二鈉1.3克,無水偏重亞硫酸鈉1.0克,檸檬酸1.2克,100毫升蒸餾水定蓉.
2:稱一定量的樣品(VB12的含量在50-100ng），用10毫升上述溶液混合,再加150毫升蒸餾水,於121度水解10分鍾,冷後調PH到4.5,再用蒸餾水稀釋到濃度為VB12在0.01-0.02ng/ml

『捌』 vb12的功效與作用說明書

進口的有好幾種呢不知道你說的是不是德國產的拜他命B12（但這個目前大陸好像沒有引進，香港有）主要成份：Vitamin B12，Cyanocobalamine，Propyl-4-hydroxybenzoate，Methyl-4-hydroxybenzoate，benzyl Alcohol 使用方法：肌肉注射 產地：德國 規格：10ml 圖：還有一種，國內用的比較多的針劑，是叫甲鈷銨注射液，也叫彌可保，它不是VB12，但是用於缺乏維生素B12引起周圍神經炎、末梢性神經障礙。 或因缺乏維生素B12引起的巨紅細胞性貧血等，它是一種鈷制劑。圖片：

『玖』 VB12作用

維生素B12又叫鈷胺素，是唯一含金屬元素的維生素。自然界中的維生素B12都是微生物合成的，高等動植物不能製造維生素B12。維生素B12是需要一種腸道分泌物（內源因子）幫助才能被吸收的惟一的一種維生素。有的人由於腸胃異常，缺乏這種內源因子，即使膳食中來源充足也會患惡性貧血。植物性食物中基本上沒有維生素B12。它在腸道內停留時間長，大約需要三小時（大多數水溶性維生素只需要幾秒鍾）才能被吸收。維生素B12的主要生理功能是參與製造骨髓紅細胞，防止惡性貧血；防止大腦神經受到破壞。
維生素B12又稱為紅色維生素，屬於水溶性維生素。維生素(維生素食品)B12是唯一含有主要礦物質的維生素；很難被人體吸收。在吸收時需要與鈣(鈣食品)結合，才能有利於人體的機能活動；在人類的飲食中，維生素B12的主要來源是動物性食物，為植物性食物(除極少數外)都不含維生素B12。成人的建議每日攝取量是2mcg。妊娠期間為2.2mcg，哺乳期的女性(女性食品)則需要2.6mcg的攝取量；
維生素B族的攝取量少，而又多吃有葉酸(葉酸食品)的食物(蔬菜(蔬菜食品))時容易造成維生素B[12]的不足；
甲狀腺的機能正常時，維生素B[12]的吸收也能順利進行。
生素B[12]缺乏症在體內蓄積的維生素B[12]全部耗盡的5年後才會顯現出來；
一、維生素B12的效用功能：
1.促進紅血球的形成和再生，防止貧血；
2.促進兒童(兒童食品)發育，增進食慾；
3.增強體力；
4.維持神經系統的正常功能；
5.能使脂肪、碳水化合物、蛋白質(蛋白質食品)適宜地為體內所利用；
6.消除煩躁不安；
7.促使注意力集中，增進記憶力與平衡感。
二、維生素B12的缺乏症：惡性貧血、腦障礙。
三、富含維生素B12的食物：動物肝臟、牛肉、豬肉、蛋、牛奶、乳酪。
四、維生素B12的副作用：沒有發現有關維生素B12副作用的報告。
五、補充維生素B12的建議：
1.素食(素食食品)且不吃蛋和奶製品的人必須補充維生素B12；
2.如果您經常應酬而大量喝酒，那麼補充維生素B12是非常重要的；
3.和葉酸一起攝取時，可使維生素B12產生最佳效果，很快就能使人恢復活力；
4.多吃蛋白質食物的人必須要攝取更多的維生素B12。維生素B12與其他的B族維生素和維生素A、E、C都有相輔相成的作用；
5.老年(老年食品)人經常會對維生素B12吸收困難，因此必須通過注射予以補充；
6.在月經期間或月經前，同時服用維生素B12和其他的B族維生素非常有益。

『拾』 VA VD VB VC的測定方法，優缺點的比較，及各種維生素測定樣品處理的不同

維生素C是一種已糖醛基酸，有抗壞血病的作用，所以被人們稱做抗壞血酸，主要為還原型及脫氫型兩種，廣泛存在於植物組織中，新鮮的水果、蔬菜，特別是棗、辣椒、苦瓜、柿子葉、獼猴桃、柑橘等食品中含量較多。它是氧化還原酶之一，本身易被氧化，但在有些條件下又是一種抗氧化劑。
維生素C（還原型）純品為白色無臭結晶，熔點190～192℃，溶於水或乙醇中，不溶於油劑。在水溶液中易被氧化，在鹼性條件下易分解，在弱酸條件中較穩定，維生素C開始氧化為脫氫型抗壞血酸（有生理作用）。如果進一步水解則生成2，3-二酮古樂糖酸，失去生理作用。
根據它具有的還原性質可以測定維生素C的含量。常用的測定方法有
（1）2，6-二氯靛酚法 （還原型VC）
（2）2，4-二硝基苯肼法 （總VC）
（3）碘量法
（4）熒光分光光度法
一、2，6-二氯靛酚滴定法
1、原理：
還原型抗壞血酸還原染料2，6-二氯靛酚，該染料在酸性中呈紅色，被還原後紅色消失。還原型
抗壞血酸還原2，6-二氯靛酚後，本身被氧化成脫氫抗壞血酸。在沒有雜質干擾時，一定量的樣
品提取液還原標准2，6-二氯靛酚的量與樣品中所含維生素C的量成正比。
2、試劑
⑴ 1%草酸溶液：稱取10g草酸，加水至1000ml；
⑵ 2%草酸溶液：稱20g草酸，加水至1000ml；
⑶ 維生素C標准液：准確稱20mgVC溶於1%草酸中，並稀釋至100ml，吸5ml於50ml容量瓶中，加入1%草酸至刻度，此溶液每毫升含有0.02mgVC；
⑷ 0.02%2，6-二氯靛酚溶液：稱取2，6-二氯靛酚50mg，溶於200ml含有52mg碳酸氫鈉的熱水中，冷卻後，稀釋至250ml，過濾於棕色瓶中，貯存於冰箱內，應用過程中每星期標定一次。
標定一：吸標液（VC）5ml於三角瓶→加6%KI溶液0.5ml→加1%澱粉3滴→用0.001N KIO3標液滴定到淡蘭色。
計算：
抗壞血酸濃度（mg/ml）= （V1 × 0.088）/ V2
V1 - 滴定時消耗0.001N KIO3標液的體積（ml）
V2 -維生素C重量（g）
0.088 -1ml0.001N KIO3標液≈維生素C的量（mg/ml）
標定二：吸5ml已知濃度V C標液 → 加5ml1%草酸 → 用染料2，6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉紅色，在15秒不褪色為終點
計算：每毫升2，6-二氯靛酚相當於維生素C的毫克數等於滴定度（T）
T= （C × V1）/ V2
C - 維生素C的濃度（mg/ml）
V1 -維生素C的體積（ml）
V2 -消耗2，6-二氯靛酚的體積（ml）
⑸ 0.001N KIO3標液：吸0.1N KIO3溶液5ml→於500ml容量瓶內→加水至刻度，每毫升相當於VC0.008mg；
⑹ 0.5%澱粉溶液；
⑺ 6%KI溶液；
3、操作方法
⑴ 提取：稱樣50g→加2%草酸100ml→到入搗碎機中→處理→過濾→顏色若深可加白陶土
⑵ 滴定：吸5ml樣液→於三角瓶→用染料滴定至粉紅色→15秒內不褪色
計算：
VC（mg/100g）=（V × T）/ W × 100
V -消耗染料體積（ml）
T -1ml染料所能氧化維生素C的毫克數
W- 滴定時所有濾液中含有樣品的克數
4、注意事項
⑴ 所有試劑的配製最好都用重蒸餾水；
⑵ 滴定時，可同時吸二個樣品。一個滴定，另一個作為觀察顏色變化的參考；
⑶ 樣品進入實驗室後，應浸泡在已知量的2%草酸液中，以防氧化，損失維生素C；
⑷ 貯存過久的罐頭食品，可能含有大量的低鐵離子（Fe2+），要用8%的醋酸代替2%草酸。這時如用草酸，低鐵離子可以還原2，6-二氯靛酚，使測定數字增高，使用醋酸可以避免這種情況的發生；
⑸ 整個操作過程中要迅速，避免還原型抗壞血酸被氧化；
⑹ 在處理各種樣品時，如遇有泡沫產生，可加入數滴辛醇消除；
⑺ 測定樣液時，需做空白對照，樣液滴定體積扣除空白體積。

熒光法
1．原理
樣品中還原型抗壞血酸經活性炭氧化成脫氫型抗壞血酸後，與鄰苯二胺（OPDA）反應生成具有熒光的喹喔啉（quinoxaline）,其熒光強度與脫氫抗壞血酸的濃度在一定條件下成正比，以此測定食物中抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的總量。
脫氫抗壞血酸與硼酸可形成復合物而不與OPDA反應，以此排除樣品中熒光雜質所產生的干擾。本方法的最小檢出限為0.022 g/ml。
2．適用范圍
GB12392-90 本方法適用於蔬菜、水果及其製品中總抗壞血酸的測定
3．儀器
3．1．實驗室常用設備。
3．2．熒光分光光度計或具有350nm及430nm波長的熒光計。
3．3．打碎機。
4．試劑
本實驗用水均為蒸餾水，試劑不加說明均為分析純試劑。
（1）偏磷酸－乙酸液：稱取15g偏磷酸，加入40ml冰乙酸及250ml水，攪拌，放置過夜使之逐漸溶解，加水至500ml。4℃冰箱可保存7～10天。
（2）0.15 mol/L硫酸：取10ml硫酸，小心加入水中，再加水稀釋至1200ml。
（3）偏磷酸－乙酸－硫酸液：以0.15mol/L硫酸液為稀釋液，其餘同4.1.配製。
（4）50％ 乙酸鈉溶液：稱取500g乙酸鈉（CH3COONa�6�13H2O），加水至1000ml。
（5）硼酸-乙酸鈉溶液：稱取3g硼酸，溶於100ml乙酸鈉溶液（4.4）中。臨用前配製。
（6） 鄰苯二胺溶液：稱取20mg鄰苯二胺，於臨用前用水稀釋至100ml。
（7） 0.04%百里酚藍指示劑溶液：稱取0.1g百里酚藍，加0.02mol/L氫氧化鈉溶液，在玻璃研缽中研磨至溶解，氫氧化鈉的用量約為10.75ml，磨溶後用水稀釋至250ml。
變色范圍：pH=1.2 紅色 pH=2.8 黃色 pH＞4.0 蘭色
（8） 活性炭的活化：加200g炭粉於1L 1+9鹽酸中，加熱迴流1~2h，過濾，用水洗至濾液中無鐵離子為止，置於110~120℃烘箱中乾燥，備用。
（9）標准
抗壞血酸標准溶液（1mg/ml）：准確稱取50mg抗壞血酸，用溶液（4.1）溶於50ml容量瓶中，並稀釋至刻度。
抗壞血酸標准使用液（100μg/ml）: 取10ml抗壞血酸標准液，用偏磷酸-乙酸溶液稀釋至100ml。定容前試pH值，如其pH＞2.2時，則應用溶液（4.3）稀釋。
標准曲線的制備：取下述"標准"溶液（抗壞血酸含量10μg/ml）0.5、1.0、1.5和2.0ml標准系列，取雙份分別置於10ml帶蓋試管中，再用水補充至2.0ml。
5.操作步驟
5.1 樣品制備
全部實驗過程應避光。
稱取100g鮮樣，加100g偏磷酸-乙酸溶液，倒入打碎機內打成勻漿，用百里酚藍指示劑調試勻漿酸鹼度。如呈紅色，即可用偏磷酸-乙酸溶液稀釋，若呈黃色或蘭色，則用偏磷酸-乙酸-硫酸溶液稀釋，使其pH為1.2。勻漿的取量需根據樣品中抗壞血酸的含量而定。當樣品液含量在40~100μg/ml之間，一般取20g勻漿，用偏磷酸-乙酸溶液稀釋至100ml，過濾，濾液備用。
5.2 氧化處理：分別取樣品濾液及標准使用液各100ml於帶蓋三角瓶中，加2g活性炭，用力振搖1min，過濾，棄去最初數毫升濾液，分別收集其餘全部濾液，即樣品氧化液和標准氧化液，待測定。
5.3 各取5ml標准氧化液於2個50ml容量瓶中，分別標明"標准"及"標准空白"。
5.4 各取5ml樣品氧化液於2個50ml容量瓶中，分別標明"樣品"及"樣品空白"。
5.5 於"標准空白"及"樣品空白"溶液中各加5ml硼酸-乙酸鈉溶液，混合搖動15min，用水稀釋至50ml，在4℃冰箱中放置2h，取出備用。
5.6 於"樣品"及"標准"溶液中各加入5ml50%乙酸鈉溶液，用水稀釋至50ml，備用。
5.7 熒光反應
取"標准空白"溶液，"樣品空白"溶液及（5.6）中"樣品"溶液各2ml，分別置於10ml帶蓋試管中。在暗室中迅速向各管中加入5ml鄰苯二胺，振搖混合，在室溫下反應35min，用激發光波長338nm、發射光波長420nm測定熒光強度。標准系列熒光強度分別減去標准空白熒光強度為縱坐標，對應的抗壞血酸含量為橫坐標，繪制標准曲線或進行相關計算，其直線回歸方程供計算時使用。
6. 計算
X=（c×V/m）×F×(100/1000)
式中：X-----樣品中抗壞血酸及脫氫抗壞血酸總含量，mg/100g；
c------由標准曲線查得或由回歸方程算得樣品溶液濃度，μg/ml；
m-----試樣質量，g；
F------樣品溶液的稀釋倍數；
V------熒光反應所用試樣體積，ml。
例： 測定每一制備溶液的熒光強度。用標准溶液每ml含2.5μg、5.0μg、7.5μg及10.0μg，各標准濃度管讀數減去相應的標准空白讀數的各平均值做標准曲線。
由樣品液讀數減去樣品液空白讀數之值，從標准曲線上查得相應的抗壞血酸（μg/ml），按取樣量及稀釋率計算樣品中抗壞血酸的含量。
如：取制備好的辣椒樣品2.138g，稀釋到100ml，氧化後分別取10ml濾液稀釋到50ml
樣品讀數為23.34，樣品空白讀數為3.188，樣品讀數減去樣品空白讀數為20.152，查熒游標准曲線相當標准抗壞血酸的2.23μg。
2.23×100× 50× 100
---------------- --------= 52（mg/100g）
2.138× 10 ×1000
7. 注意事項
7.1 大多數植物組織內含有一種能破壞抗壞血酸的氧化酶，因此，抗壞血酸的測定應採用新鮮樣品並盡快用偏磷酸-醋酸提取液將樣品製成勻漿以保存維生素C。
7.2 某些果膠含量高的樣品不易過濾，可採用抽濾的方法，也可先離心，再取上清液過濾。
7.3活性炭可將抗壞血酸氧化為脫氫抗壞血酸，但它也有吸附抗壞血酸的作用，故活性炭用量應適當與准確，所以，應用天平稱量。我們的實驗結果證明，用2g活性炭能使測定樣品中還原型抗壞血酸完全氧化為脫氫型，其吸附影響不明顯。

2，4-二硝基苯肼法
1．原理
總抗壞血酸包括還原型、脫氫型和二酮古樂糖酸。樣品中還原型抗壞血酸經活性炭氧化為脫氫抗壞血酸，再與2，4-二硝基苯肼作用生成紅色脎，脎的含量與總抗壞血酸含量成正比，進行比色測定。
2．適用范圍
GB12392-90 本方法適用於蔬菜、水果及其製品中總抗壞血酸的測定。
3. 儀器
3.1恆溫箱：37±0.5℃
3.2可見-紫外分光光度計
3.3打碎機
4．試劑
本實驗用水均為蒸餾水，試劑純度均為分析純。
4.1 4.5mol/L硫酸：謹慎地加250ml硫酸（比重1.84）於700ml水中，冷卻後用水稀釋至1000ml。
4.2 85%硫酸：謹慎地加900ml硫酸（比重1.84）於100ml水中。
4.3 2%2，4-二硝基苯肼溶液：溶解2g 2，4-二硝基苯肼於100ml4.5mol/L硫酸內，過濾。不用時存於冰箱內，每次用前必須過濾。
4.4 2%草酸溶液：溶解20g草酸於700ml水中，稀釋至1000ml。
4.5 1%草酸溶液：稀釋500ml 2%草酸溶液到1000ml。
4.6 1%硫脲溶液：溶解5g硫脲於500ml 1%草酸溶液中。
4.7 2%硫脲溶液：溶解10g硫脲於500ml1%草酸溶液中。
4.8 1mol/L鹽酸：取100ml鹽酸，加入水中，並稀釋至1200ml。
4.9 活性炭：將100g活性炭加到750ml 1mol/L鹽酸中，迴流1~2h，過濾，用水洗數次，至濾液中無鐵離子（Fe3+）為止，然後置於110℃烘箱中烘乾。
4.10 標准
（1）抗壞血酸標准溶液（1mg/ml）：溶解100mg純抗壞血酸於100ml 1%草酸溶液中。
（2）標准曲線繪制
加1g活性炭於50ml標准溶液中，搖動1min，過濾。
取10ml濾液放入500ml容量瓶中，加5.0g硫脲，用1%草酸溶液稀釋至刻度。抗壞血酸濃度為20μg/ml。
取5，10，20，25，40，50，60ml稀釋液，分別放入7個100ml容量瓶中，用1%硫脲溶液稀釋至刻度，使最後稀釋液中抗壞血酸的濃度分別為1，2，4，5，8，10及12μg/ml。
按樣品測定步驟形成脎並比色。
以吸光值為縱坐標，以抗壞血酸濃度（μg/ml）為橫坐標繪制標准曲線。
5. 操作步驟
5.1樣品制備
全部實驗過程應避光。
5.1.1鮮樣制備：稱100g鮮樣和100g2%草酸溶液，倒入打碎機中打成勻漿，取10-40g勻漿（含1-2mg抗壞血酸）倒入100ml容量瓶中，用1%草酸溶液稀釋至刻度，混勻。
5.1.2干樣制備：稱1-4g干樣（含1-2mg抗壞血酸）放入乳缽內，加入1%草酸溶液磨成勻漿，倒入100ml容量瓶中，用1%草酸溶液稀釋至刻度，混勻。
5.1.3將上述兩液過濾，濾液備用。不易過濾的樣品可用離心機沉澱後，傾出上清液，過濾，備用。
5.2氧化處理：取25ml上述濾液，加入0.5g活性炭，振搖1min，過濾，棄去最初數毫升濾液。取10ml此氧化提取液，加入10ml 2%硫脲溶液，混勻。
5.3呈色反應
5.3.1於三個試管中各加入4ml稀釋液。一個試管作為空白，在其餘試管中加入1.0ml 2%2，4-二硝基苯肼溶液，將所有試管放入37±0.5℃恆溫箱或水浴中，保溫3h。
5.3.2 3h後取出，除空白管外，將所有試管放入冰水中。空白管取出後使其冷到室溫，然後加入1.0ml 2%2，4-二硝基苯肼溶液，在室溫中放置10~15min後放入冰水內。其餘步驟同樣品。
5.3.3 85%硫酸處理：當試管放入冰水後，向每一試管中加入5ml85%硫酸，滴加時間至少需要1min，需邊加邊搖動試管。將試管自冰水中取出，在室溫放置30min後比色。
5.3.4 比色：用1cm比色杯，以空白液調零點，於500nm波長測吸光值。
6. 計算
同熒光法。
7. 注意事項
7.1 大多數植物組織內含有一種能破壞抗壞血酸的氧化酶，因此，抗壞血酸的測定應採用新鮮樣品並盡快用2%草酸溶液製成勻漿以保存維生素C。
7.2 若溶液中含有糖，硫酸加得太快，溶解熱會使溶液變黑。
7.3 試管自冰水中取出後，顏色會繼續變深，所以，加入硫酸後30分鍾應准時比色。

碘滴定法
一、目的及原理
本試驗是利用碘酸鉀做氧化劑。即在一定量的鹽酸酸性試液中加碘化鉀—澱粉指示劑，用已知濃度的碘酸鉀滴定。當碘酸鉀滴入後即釋放出遊離的碘，此碘被維生素C還原，直至維生素C完全氧化後，再滴以碘酸鉀液時，釋放出的碘因無維生素C的作用，可使澱粉指示劑呈藍色，即為中點，其反應如下：
KIO3 + 5KI + 6HCl→6KCl + 3H2O + 3 I2

二、葯品與器材
柑橘、鮮棗、洋蔥、甘藍、辣椒等。
碘酸鉀、碘化鉀、澱粉，2%鹽酸。
研缽、燒杯、100ml容量瓶、0.5、2、5ml移液管、滴定管、漏斗、紗布、分析天平。

三、操作與步驟
1.試劑制備
（1）0.5%澱粉液：稱取可溶性澱粉0.5g，用蒸餾水調成漿狀，注入100ml蒸餾水，煮沸至透明狀，冷後用棉花過濾。
（2）0.001N KIO3液：精確稱取KIO3 0.3568g（KIO3預先在102℃烘2小時，在乾燥器中冷卻備用）， 准確配成1000ml，得到0.01N KIO3液。再稀釋10倍即為0.001N。
2.樣品試液的制備：
將果蔬樣品洗凈，用紗布拭乾其外部所附著的水分，若樣品清潔可不必洗滌。樣品若為大型果蔬，先縱切為4―8等分，取其20―30g為一份，除去不能食用部分，切碎。若為大型葉菜，沿中脈切分為二分，取其一分切碎。稱取20g作分析用。
將稱取的樣品放研缽中，加2%的鹽酸5―10ml，研磨至呈漿狀。小心無損地移研缽中樣品於100ml容量瓶中，研缽用2%鹽酸液沖洗後，亦倒入量瓶中，並加2%鹽酸至100ml，充分混合。用清潔乾燥二層紗布過濾入乾燥的燒杯中，濾液作測定用。
3.樣品液的測定：
在50ml的燒杯中，用移液管注入1%的KI0.5ml，0.5%澱粉液2ml，以及上述製得的試液5ml；再加蒸餾水至總體積10ml（加2.5毫升）。用0.001N KIO3液滴定，要一滴一滴加入，並時時搖動燒杯，至微藍色不褪為終點（一分鍾不褪為止）。記錄所用KIO3液毫升數。
同上法再測定3次。用各次測定的平均值，計算維生素C含量。
計算公式：
V X 0.088 b
W = ―――――――― X — X 100
B a
W = 100克樣品含的抗壞血酸毫克數。
V = 滴定樣品所用的KIO3毫升數。
0。088 = 1毫升0.001N 碘酸鉀溶液相當的抗壞血酸的量（mg/ml）。
B = 滴定時所用樣品溶液毫升數。
b = 製成樣品液的總毫升數。
a = 樣品的克數。

四、結果與計算
1.將測定的數據填入下列表中

樣品名稱 樣品重量（g） 樣品液總體積（ml） 滴定時用樣品液的量（ml） 滴定樣品所用KIO3量（ml） 維生素C含量（mg/100g）
1 2 3 4 平均

2.列出計算式並計算結果

其實測定Vc方法有很多種，還有磷鉬酸銨法，間接碘量法等等。其中熒光法和2，4－二硝基苯肼法為國標方法。常用的一般為上面4種。