蒸汽滅菌的檢測方法

1. 脈動真空壓力蒸汽滅菌器空鍋做生物監測怎麼操作

如果是做滅菌效果檢測的話，常用下面兩種方法：

一、化學指示卡測試法

將化學指示卡放置擬滅菌物品包中央。滅菌後，將包裹取出，觀察指示卡，如果指示卡色塊顏色達到或深於卡面標准色，說明物品包中心已達到滅菌溫度和時間；如果指示劑顏色無變化或變色淺於標准色，則表明未達到規定的滅菌溫度和時間。

二、生物監測法。通常採用國際通用的熱力滅菌試驗菌株為嗜熱脂肪芽胞桿菌。將生物指示劑放入標准試驗包中心部位。試驗包大小為25 cm×30 cm×30 cm。測試設5個點,分別為滅菌櫃（上層中心,中層左前,右後,下層左後,排氣口附近）。按滅菌操作程序,滅菌結束後，壓碎安瓿培養基與菌片混合一起置於56°C培養箱內,24 h～48 h之間觀察結果。如培養基的滅菌管，說明無嗜熱脂肪芽胞桿菌生長繁殖，表示滅菌徹底；如由紫紅色變為黃色，說明有嗜熱脂肪芽胞桿菌生長繁殖，表示滅菌失敗。

(1)蒸汽滅菌的檢測方法擴展閱讀：

滅菌原理：利用機械抽真空的方法，使滅菌室內形成負壓，蒸汽得以迅速穿透到物品內部，與器械接觸後飽和蒸汽釋放出大量的潛熱（2250KJ），當蒸汽遇到冷的滅菌物品時即冷凝成水，釋放全部潛熱，使滅菌物品的溫度快速的升高，迅速升高的溫度使細菌中的蛋白質凝固變性，從而將所有微生物包括細菌芽孢全部殺死。

滅菌過程：待滅菌器械由消毒員放置到專用滅菌架內，推入滅菌器，關閉前門，操作人員運行滅菌器已預先設定好的滅菌程序進行滅菌處理。程序運行過程如下：脈動——升溫——滅菌——排汽——乾燥——結束。

a．脈動：對滅菌器內室進行抽真空、進蒸汽操作，反復進行三次，然後再次抽真空，待內室壓力到達脈動下限後，程序轉入升溫階段。經過該階段後，內室的冷空氣排除率可達到99%以上，確保內室無死點，保證滅菌的合格。

b．升溫：蒸汽經過滅菌器夾層進入內室，對器械進行加熱，同時內室疏水閥間歇性開啟，將蒸汽冷凝後產生的水排出。內室溫度達到設定值後程序轉入滅菌階段。

c．滅菌：開始滅菌計時，在此期間內室進汽閥受到內室溫度和壓力的共同控制以確保內室保持在一定的溫度范圍內對器械進行滅菌。當內室溫度高於滅菌器設定的數值上限時，進汽閥關閉，低於數值下限時，進汽閥打開；同時，當內室壓力高於數值上限時，進汽閥也會關閉，低於內室壓力下限值時，進汽閥打開以確保滅菌階段溫度的上下波動不超過3°。滅菌計時結束後，程序轉入排汽階段。

d．排汽：排汽閥打開，內室的蒸汽在內外壓差的作用下排出，經過換熱器的作用，大部分蒸汽冷凝成水，少部分蒸汽經過濾後排至大氣。內室壓力下降到設定值後，程序轉入乾燥階段。

e．乾燥：真空泵打開對內室進行抽真空，同時夾層保持一定的壓力和溫度，起到烘乾器械的作用。

f．結束：蜂鳴器呼叫，此時可以打開門將滅菌車推出進行器械的晾放。

2. 壓力蒸汽滅菌的效果檢測包括哪些

B-D試紙：指示殘留冷空氣的排放是否合格。
化學指示膠帶：指示物品包是否經過滅菌處理。
化學指示卡：指示物品包中央溫度和持續時間，滅菌效果是否合格。
生物指示劑：指示物品包中央溫度和持續時間，滅菌效果是否合格。

3. 高壓消毒鍋的滅菌監測包括3點。

1， 生物學監測：使用活的細菌芽孢製成生物指示劑，其抗力均大於或等於各種致病微生物。在第 1個滅菌周期(滅菌時間3 min)對嗜熱脂肪桿菌(ATCC7953)芽孢未全部殺滅。經過第 1個周期後(滅菌時間5、7、9min)對嗜熱脂肪桿菌(ATCC7953)芽孢全部殺滅。

用生物指標劑來證明滅菌物品內微生物是否全部死亡，是判斷滅菌是否合格的直接指標，也是最可靠的監測方法。高壓蒸汽滅菌所用生物指示劑是用嗜熱脂肪桿菌芽孢制備，乾熱滅菌和環氧乙烷滅菌所用生物指示劑則是以枯草桿菌黑色變種芽孢制備的。

但由於使用生物指示劑操作復雜，幾天後才能出結果，不適於日常監測。衛生部《消毒技術規范》要求，使用生物法監測高壓蒸汽消毒鍋每月1次。監測使用的生物指示管必須放於標准包內，標准包放在消毒鍋的最低層，主要考慮蒸汽穿透物品的時間和高壓蒸汽消毒鍋溫度最低處，具有代表性。

2，化學監測：用某些熱敏化學物質配成印墨印製而成。在一定溫度的飽和蒸汽條件下作用一定時間，使其顏色改變，再根據標准色來判斷是否達到滅菌條件，因此是間接指標，種類有B—D試驗指標圖、化學指示膠帶和化學指示卡。

B-D測試(Bowie—Dick test) 專門用於預真空(包括脈動式噴射式等)高壓蒸汽消毒鍋空氣排除效果的監測。預真空不可能達到絕對真空(約有 2%空氣)。因此，空氣的存在影響蒸汽對物品的穿透和殺菌效果，可導致滅菌失敗。所以，高壓蒸汽滅菌時以物品包中是否有空氣團的存在作為滅菌能否成功的一個重要指標。衛生部《消毒技術規范》要求：每日進行一次B-D測試。如B—D測試失敗，須仔細查找原因，直至B-D測試通過後，該消毒鍋方能使用。B-D測試設計原理是使試驗包成為消毒鍋內殘留空氣的聚焦點，因為熱蒸汽進入櫃內時，它相對較大的體積和可透氣性布料極易吸附、「捕捉」殘留空氣。真空測試圖上的化學指示劑對殘留空氣具有敏感性，能檢測出殘留空氣在試驗包中是否存在。

化學指示膠帶 (包外指示膠帶) 用於每個包裹的包外，指示已暴露於某種滅菌過程，以區分滅菌和未滅菌的物品，而不能作為滅菌可靠與否的指示劑。

化學指示卡(包內指示卡) 是對消毒鍋滅菌溫度、時間、飽和蒸汽的綜合反映，用於考核每個包裹內部滅菌情況，如果滅菌過程中出現消毒鍋，蒸汽質量和人為因素都會使監測結果不準。

4. 高壓蒸汽滅菌法滅菌效果的檢測方法包括那三種

1. 滅菌包內放化學指示卡
2. 生物檢測方法
3. 進行B-D實驗

5. 高壓滅菌的溫度,時間,適用范圍,如何對高壓滅菌效果進行監測

壓力蒸汽滅菌效果監測包括物理監測、化學監測和生物監測。
(1)物理監測：每次滅菌應連續監測並記錄滅菌時的溫度、壓力和時間等滅菌參數。溫度波動范圍在+3℃以內，時間滿足最低滅菌時間的要求，同時應記錄所有臨界點的時間、溫度與壓力值，結果應符合滅菌的要求。
(2)化學監測：包括包外、包內化學指示物監測。具體要求為滅菌包包外應有化學指示物，高度危險性物品包內應放置包內化學指示物，放於包內最難滅菌的部位。通過觀察化學指示物顏色的變化，判定是否達到滅菌合格要求。採用快速壓力蒸汽滅菌程序滅菌時，應直接將包內化學指示物置於待滅菌物品旁進行化學監測。
(3)生物監測：將嗜熱脂肪桿菌芽孢片製成標准生物測試包、生物PCD（滅菌過程驗證裝置），或使用一次性標准生物測試包，對滅菌器的滅菌質量進行生物監測。將生物監測包置於滅菌器最難滅菌的部位，並設陽性對照和陰性對照。根據微生物芽孢的死亡情況來判斷滅菌是否成功，考核滅菌器負荷是否達到無菌保障水平，這是確定壓力蒸汽滅菌是否有效的最可靠的方法

6. 小型壓力蒸汽滅菌器的監測怎麼做測試包是多大尺寸

小型壓力蒸汽滅菌器因一般無標准生物監測包，應選擇滅菌器常用的、有代表性的滅菌製作生物測試包或生物PCD(滅菌過程驗證裝置Process Challenge Device,PCD)，置於滅菌器最難滅菌的部位，且滅菌器應處於滿載狀態。生物測試包或生物PCD應側放，體積大時可平放。

壓力蒸汽滅菌B-D測試方法： 具體作法是:B-D測試包由100%脫脂純棉布折疊成長30cm±2cm、寬25cm±2cm、高25cm～28cm大小的布包裹；將專門的B-D測試紙，放入布測試包的中間；測試包的重量為4kg±5%或用一次性B-D測試包。B-D測試包水平放於滅菌櫃內滅菌車的前底層，靠近櫃門與排氣口底前方；櫃內 除測試包外無任何物品; 134℃，3.5min～4min後，取出B-D測試紙觀察顏色變化，均勻一致變色，說明冷空氣排除效果良好，滅菌鍋可以使用；反之，則滅菌鍋有冷空氣殘留，需檢查B-D測試失敗原因，直至B-D測試通過後該鍋方能使用。

需要糾正一個概念，用於化學監測即B-D試驗的是B-D測試包，需每日進行一次。而標准包一般是指用於生物監測。

用於預真空和脈動真空壓力蒸汽滅菌器的標准包製作方法則是：16條全棉手術巾每條41cm×66cm，將每條手術巾的長邊折成3層，短邊折成2層，然後疊放，包裹成大小為23cm×23cm×15cm即可。將兩個生物指示劑置於標准包中心部位，後將包至於滅菌櫃內排氣口上方。經過一個滅菌周期後，將生物指示劑取出培養，並設陰性和陽性對照，觀察其顏色變化以判斷滅菌效果。

7. 壓力蒸汽滅菌的化學監測包括哪些

化學監測法：是利用既能指示蒸汽溫度，又能指示溫度持續時間的化學指示管(卡)等在一定溫度與作用時間條件下受熱後根據顏色或性狀的變化，來判斷滅菌是否合格的方法。

（1）化學指示卡(管)監測：

1）化學指示卡(管)監測方法: 將既能指示蒸汽溫度，又能指示溫度持續時間的化學指示管(卡)
放入大包和難以消毒部位的物品包中央，經一個滅菌周期後，取出指示管(卡)，根據其顏色及性狀的改變判斷是否達到滅菌條件。

2）結果判定: 檢測時，所放置的指示管(卡)
性狀或顏色均變至規定的條件，判為滅菌合格；若其中之一未達到規定的條件，則滅菌過程不合格。

（2）化學指示膠帶監測

1）監測方法:
將化學指示膠帶粘貼於每一待滅菌物品包外，經一個滅菌周期後，觀察其顏色的改變，以指示是否經過滅菌處理，而不能作為滅菌效果判定指標。

2）結果判定:
檢測時，所放置的指示管(卡)、膠帶的性狀或顏色均變至規定的條件，判為滅菌合格；若其中之一未達到規定的條件，則滅菌過程不合格。

（3）B-D試驗：用於預真空（包括脈動真空）壓力蒸汽滅菌器冷空氣排放效果的檢測，冷空氣是造成預真空（包括脈動真空）壓力蒸汽滅菌失敗的主要因素之一。對預真空和脈動真空壓力蒸汽滅菌，每日進行一次B-D試驗。

1）檢測方法：B-D試驗要求做前預熱、空載監測每天一次，將B-D試紙放入標准測試包，中間包好，水平放入滅菌櫃內滅菌車的前底層，靠近櫃門與排氣口底前方（上方）滅菌櫃內除測試包無任何物品。

2）結果判定:經134℃，3.5—4分鍾後，取出B-D測試紙觀察顏色變化。若變色均勻一致，說明冷空氣排放效果良好，滅菌器可以使用。

（4）化學檢測注意事項: 監測所用化學指示物須經衛生部批准，並在有效期內使用。

8. 壓力蒸汽滅菌器滅菌效果的監測

B-D試驗是用於檢測預真空（脈動真空）壓力蒸汽滅菌器冷空氣排出情況的試驗，該試驗是根據指示圖顏色的改變是否均勻來判斷滅菌器在滅菌過程中是否有冷空氣團殘留。
1 材料與方法
1.1 材料 採用江蘇連雲港醫療器械廠生產的DMQ－0.3型脈動真空壓力滅菌器，3M公司生產的B-D測試紙，自製純棉布標准包。
1.2 方法 B-D試驗包由純棉布巾50cm×90cm大小的50條組成，布巾先橫折為3層，再縱折形成6層。將折好的布巾一條摞一條至25cm高度，摞放時，各層布巾按折疊側左右交替擺放，以使兩側厚度相等。布巾擺好後，將化學指示圖水平的夾放於中央層布巾之間，然後用布將所有布巾包成一試驗包，外面用3M化學指示劑膠帶固定，整個布巾包的大小，高約25cm，寬23cm，長27cm，重4kg。將試驗包水平放於空鍋內，靠近櫃門與排氣口處，在蒸汽源壓力0.30～0.50MPa，水源壓力0.15～0.30MPa條件下，抽真空3次，以真空度為0.086MPa，達到工作壓力0.21MPa，溫度134℃，滅菌3.5～4min，取出後觀察判斷結果。
2 判斷標准B-D測試紙顯示黑白線條分明，顏色均勻，清晰，說明蒸汽快速滲透，冷空氣排除，無明顯空氣泄漏，無冷空氣團存在，表示測試合格。B-D測試紙出現變色不均勻或測試紙中間部位比外部顏色淡，表示監測不合格。

3討論分析脈動真空壓力蒸汽滅菌器B-D試驗失敗的原因主要有：（1）新棉布巾未洗凈，有漿存在，蒸汽難以穿透;（2）舊棉布巾測試後未洗滌，布與布之間受高熱蒸汽的影響，互相壓緊，使蒸汽不容易穿透，影響潛伏熱的釋放，試紙圖案中間色澤淺［1］；（3）測試包包紮過緊，影響蒸汽穿透，圖案黑白線不清；（4）蒸汽壓力不足，蒸汽壓力不到0.3MPa；（5）滅菌器使用前預熱時間不夠，特別是冬季，如預熱時間少於10min，也會出現圖案中間部位顏色比外部淡；（6）布巾過分乾燥，造成布巾濕度過低，蒸汽進入滅菌櫃後不能凝結成水和釋放潛能，產生過度飽和狀態，圖案呈不均勻灰色［2］；（7）布巾過於潮濕，高溫蒸汽進入櫃室內遇到冷的潮濕的布巾，迅速凝結成水，多餘的水份向測試紙滲透形成水漬，影響熱穿透，圖案白色線條邊緣黃褐色［2］；（8）滅菌器出現故障，真空泵效果下降，致使櫃室未達到應有的真空程度；自控系統失靈，抽氣時間縮短，密封圈老化，不能維持規定的負壓，造成排除冷空氣的同時仍有冷空氣的滲入，影響測試結果［1］。通過對B-D試驗包的規范製作，並做到每次測試後的布巾都必須洗滌後方才使用；避免布巾過干或過濕；布巾包松緊適宜；滅菌器出現故障時，及時請專業維修人員進行檢修，滅菌器維修後，進行復測B-D試驗。經查找原因並改進後2005年進行的145次B-D試驗全部合格。供應室滅菌質量的保證是防止醫院感染的重要措施之一。而脈動真空壓力蒸汽滅菌器內冷空氣團的殘留，將影響滅菌器的滅菌效果。B-D試驗是檢測脈動真空壓力滅菌器是否達到滅菌要求的重要指標之一。因此，高壓滅菌前，必須對脈動真空壓力（預真空）滅菌器進行B-D試驗。分析B-D試驗失敗的原因，避免因技術因素所致的B-D試驗失敗而造成的人力、物力、時間等資源的浪費，保證壓力蒸汽滅菌器滅菌效果的可靠性。

9. 高壓蒸汽滅菌法效果最可靠的是哪種檢測方法

細菌培養法。取滅過菌的樣品，塗布到無菌培養基上，用未滅菌樣品和未塗布的板子分別做對照，培養一定時間後數菌落數，即可獲得滅菌效果。

10. 監測高壓蒸汽滅菌效果最有效的方法是

監測高壓蒸汽滅菌效果最有效的方法是細菌培養法。取滅過菌的樣品，塗布到無菌培養基上，用未滅菌樣品和未塗布的板子分別做對照，培養一定時間後數菌落數，即可獲得滅菌效果。

細菌在自然界中分布極廣，數量大，種類多，它可以造福人類，也可以成為致病的原因。大多數細菌可用人工方法培養，即將其接種於培養基上，使其生長繁殖。培養出來的細菌用於研究、鑒定和應用。細菌培養是一個復雜的技術。

培養條件

培養時應根據細菌種類和目的等選擇培養方法、培養基，制定培養條件（溫度、pH值、時間，對氧的需求與否等）。一般操作步驟為先將標本接種於固體培養基上，做分離培養。再進一步對所得單個菌落進行形態、生化及血清學反應鑒定。

培養基常用牛肉湯、蛋白腖、氯化鈉、葡萄糖、血液等和某些細菌所需的特殊物質配製成液體、半固體、固體等。一般細菌可在有氧條件下，37℃中放18～24小時生長。厭氧菌則需在無氧環境中放2～3天後生長。個別細菌如結核菌要培養1個月之久。