㈠ 外泌體的提取與鑒定-鹿明生物4D-DIA+超微量蛋白質組技術
外泌體是細胞外囊泡的一種，直徑約為30-150納米，由脂質雙分子層包裹，內含蛋白質、核酸等多種生物活性分子。外泌體廣泛存在於各種體液中，包括血液、尿液、唾液等。
外泌體的提取方法多樣，如超速離心法、密度梯度離心、超濾離心、磁珠免疫法、PEG-base沉澱法和試劑盒提取等。超離法操作簡便，回收率較高，但過程耗時且可能損害外泌體質量；密度梯度離心法純度較高，但步驟繁瑣、耗時；超濾離心法簡單高效，不影響外泌體生物活性；磁珠免疫法具有特異性高、操作簡便的優點，但效率低、生物活性易受影響；PEG-base沉澱法早先應用於病毒收集，原理與競爭性結合水分子有關；試劑盒提取法通過特殊設計過濾器或空間排阻色譜法實現分離純化。
外泌體的鑒定方法包括電鏡檢測、粒徑檢測和Western Blot檢測。電鏡檢測通過負染方法直接觀察單個外泌體形態和大小；粒徑檢測准確、快速、重復性好，對外泌體大小進行整體評估；Western Blot檢測通過抗原抗體特異性結合原理，對外泌體標志蛋白進行檢測，實現蛋白質層面對外泌體的鑒定。
外泌體在生理病理標志物和葯物遞送方面有巨大應用潛力。它們作為腫瘤液體活檢的新前沿，具有非侵入性、樣本易收集、穩定循環、富含標志物等優勢，成為液體活檢中最具潛力的生物標志物。此外，外泌體作為無細胞治療的新興方案，因其低免疫原性、高耐受性、高通透性、可靶向改造、易獲得等特性，在疾病治療中展現出巨大潛力。
鹿明生物提供專業的蛋白質組學服務，具有豐富的外泌體分離及蛋白質組檢測經驗。通過結合4D-DIA技術，實現高深度鑒定、高重復性、高定量准確性。基於超微量蛋白質組技術，鹿明生物能夠極大節約樣本，適用於稀有難收集樣本的外泌體分離及蛋白質組檢測，擴大了檢測樣本類型。
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㈡ 分離外泌體後，鑒定怎麼做
研載生物科技（上海）有限公司為您解答：國際細胞外囊泡學會（ISEV）建議對於分離獲得的外泌體需從大小、形態、表面標志物這三個方面進行鑒定。首先，大小鑒定通常通過流式細胞術、納米粒度分析等方法進行，以確保外泌體顆粒尺寸符合預期。其次，形態鑒定主要關注外泌體的形狀、完整性及是否有聚集現象，可通過電子顯微鏡觀察來實現。最後，表面標志物的鑒定則需確認外泌體表達的特定蛋白質或糖類，常用方法包括免疫熒光染色、免疫印跡及流式細胞術等。
除此之外，對於外泌體的內含物，通過高通量測序、蛋白質譜、代謝組分析等組學方法進行全方面分析。高通量測序可以揭示外泌體攜帶的RNA種類和數量，蛋白質譜則能識別外泌體中特定蛋白質的組成，而代謝組分析則可檢測外泌體中的代謝產物，從而了解其功能特性。
研載生物科技（上海）有限公司提供從細胞培養、外泌體提取、鑒定、示蹤、測序、整體實驗等相關實驗服務，憑借豐富經驗，致力於為客戶提供高質量、高效率的解決方案。歡迎咨詢。
㈢ 外泌體標志物怎麼選擇鑒定
外泌體標志物的選擇鑒定是外泌體研究中的關鍵環節，以下從標志物類型及選擇依據、鑒定方法等方面進行介紹：
常見外泌體標志物類型
膜蛋白標志物
CD63：屬於四次跨膜蛋白超家族，在多種細胞來源的外泌體表面高度表達，常被用於外泌體的鑒定和分離。
CD81：也是四次跨膜蛋白，參與細胞間的相互作用和信號傳導，在不同細胞分泌的外泌體中廣泛存在。
CD9：同樣是四次跨膜蛋白家族成員，與外泌體的生物發生和功能調節有關，可作為外泌體的通用標志物。
細胞質蛋白標志物
GAPDH：作為一種糖酵解途徑中的關鍵酶，在細胞內廣泛存在且含量相對穩定，常被用作內參蛋白，也可作為外泌體的標志物之一。
熱休克蛋白（HSP）：如 HSP70、HSP90 等，參與蛋白質的折疊、轉運和降解，在應激條件下，外泌體中 HSP 的表達會發生變化，可作為外泌體的特徵性標志物。
脂質標志物
神經醯胺：是外泌體膜的重要組成成分，在維持外泌體膜的結構和功能方面發揮重要作用，其含量和組成可作為外泌體鑒定的指標之一。
磷脂醯絲氨酸（PS）：正常情況下位於細胞膜內側，在細胞凋亡或外泌體形成過程中，PS 會外翻到細胞膜外側，可作為外泌體的一個特徵性標志物。
選擇依據
特異性：理想的標志物應在目標外泌體來源的細胞或組織中特異性表達，而在其他細胞或組織中表達量極低或不表達，這樣可以准確地識別和鑒定目標外泌體。
穩定性：標志物在不同的生理和病理條件下，以及在不同的實驗處理過程中，都應具有良好的穩定性，能夠可靠地反映外泌體的存在和特徵。
豐度：標志物在目標外泌體中的表達量應相對較高，以便於檢測和分析。高豐度的標志物可以提高檢測的靈敏度和准確性，減少假陰性結果的出現。
功能相關性：選擇與外泌體的生物發生、分泌、攝取或功能相關的蛋白質作為標志物，不僅可以用於外泌體的鑒定，還可以為研究外泌體的生物學功能提供線索。
鑒定方法
免疫印跡法（Western blot）：利用抗原與抗體的特異性結合原理，通過電泳分離外泌體蛋白，然後與特異性抗體反應，檢測外泌體標志物的表達情況，可用於確定外泌體中是否存在特定的標志物蛋白。
酶聯免疫吸附試驗（ELISA）：將外泌體捕獲在固相載體上，然後與特異性抗體結合，通過酶標二抗檢測結合的抗體量，從而定量分析外泌體標志物的含量，具有較高的靈敏度和特異性。
流式細胞術：將外泌體與熒游標記的特異性抗體結合，通過流式細胞儀檢測外泌體表面標志物的表達情況，可對單個外泌體進行分析，快速、准確地鑒定外泌體及其亞群。
免疫電鏡：將外泌體樣品與特異性抗體結合，然後用電子顯微鏡觀察，可直觀地看到外泌體表面標志物的分布和定位，同時還能觀察外泌體的形態和大小。
㈣ 外泌體定量蛋白質組學服務
外泌體作為CNS核心期刊的熱門研究對象，其攜帶的膜蛋白尤其在臨床轉化中展現出重大價值。通過組織與血漿外泌體對比，它們被視為疾病標志物發現的黃金途徑。在復雜樣本如血漿/血清中，外泌體蛋白研究面臨脂蛋白乾擾的挑戰，華盈生物為此開發了一套高效技術方案。
華盈生物的外泌體蛋白質組服務採用了專門的提取方法，如超速離心、尺寸排阻和密度梯度離心，確保在樣本用量極低的情況下，如0.5mL血漿，仍能獲取高質量的蛋白質組數據。他們的技術平台在檢測外泌體蛋白數量上達到行業領先，已鑒定出超過2300種蛋白質，涵蓋了多種樣本類型，包括特殊樣本如胃液、腦脊液等。
純度是外泌體研究的關鍵，華盈生物的組織外泌體分離技術保證了高純度，符合頂級期刊的要求。華盈生物整合質譜和抗體晶元技術，質譜擅長新蛋白尤其是膜蛋白的鑒定，抗體晶元則憑借高靈敏度准確檢測分泌蛋白（可檢測500+種）。
以血漿外泌體S100-A9蛋白的研究為例，它被發現能激活NF-κB促進淋巴瘤復發，展示了外泌體蛋白的臨床潛力。通過客戶文獻，華盈生物的外泌體研究已應用於多個領域，包括腫瘤、肝炎、幹細胞治療、免疫療法等，揭示了外泌體在疾病診斷、預後和機制解析中的重要作用。
華盈生物的技術成果和豐富案例，為外泌體定量蛋白質組學研究提供了強大支持，幫助科研人員在探索疾病標志物和理解外泌體生物學作用的道路上取得了突破性進展。