檢測特定mrna是否存在用什麼方法

1. 檢測細胞中mRNA水平的方法有哪些

如果檢測一個或者少數mRNA的話，可以提取總RNA之後反轉錄，用熒光定量pcr檢測其表達量。如果需要檢測大量基因的表達的話，用基因晶元或者轉錄組測序會比較好

2. mrna檢測

先提取RNA,反轉錄成cDNA,然後根據目的基因設計PCR引物,通過半定量RT-PCR確定目的基因表達.
正因為檢測的是mRNA,所以要先反轉錄成cDNA才能PCR.

3. 檢測組織中某基因mrna定量的方法有哪些

所謂基因表達,就是從DNA到mRNA再到蛋白的一個過程,基因表達水平一般是通過該基因轉錄的mRNA的多少來衡量的.每個基因轉錄產生的mRNA的量,是受到時空等多種因素調控的,個體在不同的生長發育階段,或者不同的組織水平,基因轉錄出mRNA的量都是不一樣的.例如,當某種植物長期生長在高鹽的環境里,該植物體內與抗鹽相關的基因的表達量就會增加,以適應這種高鹽環境,是植物能夠生存下來,這時植物抗鹽相關的基因表達水平就相對高,希望我的回答能夠幫你弄清這個問題,

4. 請教：檢測mRNA方法

你好，HPVE6、E7mRNA是最新的檢測方法。優勢主要有：1；HPVE6、E7mRNA其臨床敏感性，陰性預測值與HPV——DNA相同，特異性顯著較高。2；可減少15——40%的假陽性。3；減少不必要的陰道鏡組織學判斷。4；為實現宮頸癌的標准篩查更近了一步。希望我的回答對你有幫助。

5. 檢測轉基因生物是否轉錄出mRNA，應通過何種分子雜交方法實現

檢測目的基因是否導入用的是DNA-DNA分子雜交，檢測是否轉錄用DNA-RNA分子雜交，檢測是否翻譯用抗原-抗體雜交。
前兩者都是通過一條被標記的DNA單鏈作為基因探針來實現的。這個探針具體的做法就是：用目的基因轉錄出的mRNA為模板，以被放射性同位素標記的脫氧核苷酸為原料，用逆轉錄的方法合成一條被標記的DNA，然後把模板的mRNA給水解掉，這樣就得到一條被標記的DNA單鏈，這就是探針。它的特點就是可以和目的基因轉錄的mRNA互補配對（即能形成雜交帶），所以把探針放在受體細胞中如果發現有雜交帶產生，就說明目的基因轉錄了。
另外，這個探針也可以用來做DNA-DNA分子雜交，即檢測目的基因是否導入，方法：先取出受體細胞中DNA然後高溫變性成單鏈，把探針放進去，然後降溫復性，如果形成雜交帶說明，這些DNA中有能和探針互補的DNA片段，即目的基因。因為這個探針本身就是由mRNA逆轉錄來的，它的鹼基序列與目的基因的一條鏈完全相同，當然就可以和另外一條鏈剛好互補了。
這樣可以嗎？

6. 目的mRNA如何檢測

先提取RNA，反轉錄成cDNA，然後根據目的基因設計PCR引物，通過半定量RT-PCR確定目的基因表達。

正因為檢測的是mRNA，所以要先反轉錄成cDNA才能PCR。

7. 檢測基因表達的方法

主要用探針檢測mRNA或用抗體檢測出表達的蛋白質(轉錄水平上對特異mRNA的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質的檢測)

一、外源基因轉錄水平的鑒定

基因表達分為轉錄及翻譯兩階段，轉錄是以DNA（基因）為模板生成mRNA的過程，翻譯是以mRNA為模板生成蛋白質的過程，檢測外源基因的表達就是檢測特異mRNA及特異蛋白質的生成。所以基因表達檢測分為兩個水平。

即轉錄水平上對特異mRNA的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質的檢測。轉錄水平上的檢測主要方法是Northern雜交，它是以DNA或RNA為探針，檢測RNA鏈。和Southern雜交相同，Northern雜交包括斑點雜交和印跡雜交。

也可用RT-PCR（reverse transcribed PCR）方法檢測外源DNA在植物體內的轉錄表達。其原理是以植物總RNA或mRNA為模板進行反轉錄，然後再經PCR擴增。

如果從細胞總RNA提取物中得到特異的cDNA擴增條帶，則表明外源基因實現了轉錄。此法簡單、快速，但對外源基因轉錄的最後決定，還需與Northern雜交的實驗結果結合。

二、外源基因表達蛋白的檢測

表達蛋白的檢測方法有三種：

1、生化反應檢測法：主要通過酶反應來檢測；

2、免疫學檢測法：通過目的蛋白（抗原）與其抗體的特異性結合進行檢測，具體方法有Western雜交、酶聯免疫吸附法（ELISA）及免疫沉澱法；

3、生物學活性的檢測。

Western雜交是將聚丙烯醯胺凝膠（SDS-PAGE）電泳分離抗原（Antigen）固定在固體支持物上（如硝酸纖維素膜，NC膜）。不同分子量大小的蛋白質在凝膠中遷移率不同，據此可確定特定的抗原存在與否以及相對豐度，或者蛋白質是否遭到降解等。

蛋白質電泳後轉到NC膜，放在蛋白質（如牛血清蛋白BSA）或奶粉溶液中，溫育，以封閉非特異性位點，然後用含有放射性標記或酶標記的特定抗體雜交，抗原-抗體結合，再通過放射性自顯影或顯色觀察。

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外顯子與內含子表達過程中的相對性 從內含子與外顯子的定義來看，兩者是不能混淆的，但是真核生物的外顯子也並非都「顯」（編碼氨基酸），除了tRNA基因和rRNA基因的外顯子完全「不顯」之外，幾乎全部的結構基因的首尾兩外顯子都只有部分核苷酸順序編碼氨基酸，還有完全不編碼基酸的外顯子，如人類G6PD基因的第一外顯子核苷酸順序。

已發現一個基因的外顯子可以是另一基因的內含子，所這亦然。以小鼠的澱粉酶基因為例，來源於肝的與來源於唾液腺的是同一基因。澱粉酶基因包括4個外顯子，肝生成的澱粉酶不保留外顯子1，而唾液腺中的澱粉酶則保留了外顯子1的50bp順序，但把外顯子2與前後兩段內含子一起剪切掉，經過這樣剪接，外顯子2就變成唾液澱粉酶基因中的內含子。

同一基因在不同組織能生成不同的基因產物來源於不同組織的類似蛋白，可以由同一基因編碼產生，這種現象首先是由於基因中的增強子等有組織特異性，它能與不同組織中的組織特異因子結合，故在不同組織中同一基因會產生不同的轉錄物與轉錄後加工作用。

此外真核生物基因可有一個以一的poly(A)位點，因此能在不同的細胞中產生具有不同3』末端的前mRNA，從而會有不同的剪接方式。由於大多數真核生物基因的轉錄物是先加poly(A)尾巴，然後再行剪接，因此不同組織、細胞中會有不同的因子干預多聚腺苷酸化作用，最後影響剪接模式。

8. 如何對目的基因進行檢測與鑒定

可以從三方面對目的基因進行鑒定：

1、直接測定：按照目的基因組成製作DNA分子探針進行配對。

2、mRNA測定：根據目的基因組得出其轉錄的mRNA組成，利用探針檢測。

3、蛋白測定：可應用PCR相應技術測定目的基因翻譯的相關蛋白，也可採用免疫化學法導入蛋白抗體檢測蛋白。

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對目的基因進行鑒定和檢測的多種方法：

基因鑒定技術是一項生物學檢測技術，人體細胞有總數約為30億個鹼基對的DNA，每個人的DNA都不完全相同，人與人之間不同的鹼基對數目達幾百萬之多，因此通過分子生物學方法顯示的DNA圖譜也因人而異，由此可以識別不同的人。

所謂「DNA指紋」，就是把DNA作為像指紋那樣的獨特特徵來識別不同的人。由於DNA是遺傳物質，因此通過對DNA鑒定還可以判斷兩個人之間的親緣關系。

基因鑒定的原理其實是DNA分子雜交，這種分子雜交是在緩沖液中進行的，由於DNA分子雜交時，兩個分子相遇的機會不是很大，所以就需要眾多的帶有目的基因的DNA與待測的DNA分子。

而PCR技術就是將目的基因進行擴增的一種技術手段，所以在進行基因鑒定時並不是直接進行鑒定的，而是先進行PCR技術將目的基因擴增再進行鑒定。

網路-對目的基因進行檢測與鑒定

9. 簡述檢測mRNA表達的PCR法原理，檢測mRNA時有哪些方法避免DNA對結果的影響

聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。它具有特異、敏感、產率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點；能在一個試管內將所要研究 的目的基因或某一DNA片段於數小時內擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的DNA供分析研 究和檢測鑒定。過去幾天幾星期才能做到的事情，用PCR幾小時便可完成。PCR技術是生物醫學領域中的一項革命性創舉和里程碑。
PCR技術簡史
PCR的最早設想 核酸研究已有100多年的歷史，本世紀60年代末、70年代初人們致力於研究基因的體外分離技術，Korana於1971年最早提出核酸體外擴增的設想：「經過DNA變性，與合適的引物雜交，用DNA聚合酶延伸引物，並不斷重復該過程便可克隆tRNA基因」。
PCR的實現 1985年美國PE-Cetus公司人類遺傳研究室的Mullis等發明了具有劃時代意義的聚合酶鏈反應。其原理類似於DNA的體內復制，只是在試管中給 DNA的體外合成提供以致一種合適的條件---摸板DNA，寡核苷酸引物，DNA聚合酶，合適的緩沖體系，DNA變性、復性及延伸的溫度與時間。
PCR的改進與完善 Mullis最初使用的DNA聚合酶是大腸桿菌DNA聚合酶I的 Klenow片段，其缺點是：①Klenow酶不耐高溫，90℃會變性失活，每次循環都要重新加。②引物鏈延伸反應在37℃下進行，容易發生模板和引物之 間的鹼基錯配，其PCR產物特異性較差，合成的DNA片段不均一。此種以Klenow酶催化的PCR技術雖較傳統的基因擴增具備許多突出的優點，但由於 Klenow酶不耐熱，在DNA模板進行熱變性時，會導致此酶鈍化，每加入一次酶只能完成一個擴增反應周期，給PCR技術操作程序添了不少困難。這使得 PCR技術在一段時間內沒能引起生物醫學界的足夠重視。1988年初，Keohanog改用T4 DNA聚合酶進行PCR，其擴增的DNA片段很均一，真實性也較高，只有所期望的一種DNA片段。但每循環一次，仍需加入新酶。1988年Saiki 等從溫泉中分離的一株水生嗜熱桿菌(thermus aquaticus) 中提取到一種耐熱DNA聚合酶。

10. 用什麼方法檢測產品是否含有DNA 和rna

DNA和RNA作為遺傳物質，本身都有自己的特性，用於檢測的方法也有很多，如下：

首先我們要知道：

DNA：為雙鏈結構，由A 、C 、G、T組成，鏈有外顯子和內含子區域，物質性質中A260/A280在1.8左右，在260nm出有最大吸收峰。

tRNA的二級和高級結構

1、抽提試劑盒分別抽提：將產品分成兩份，其中一份用來抽提DNA，此樣本加入RNA 酶，另一份用來抽提RNA，此樣本加入Dnase I，由此抽提出來的核酸進行瓊脂糖凝膠電泳或者aligent 4200/2100儀器檢測，考慮到DNA和RNA可能會降解，只有樣本完好時，才能輕易地辨別出來。

2、qPCR技術：如1中所示，用1中的樣本進行qPCR驗證，設計引物時DNA樣本跨外顯子區域，或者是單獨設計內含子區，加標准品對照，RNA正常設計即可，由此得出的結果可以根據擴增長度和兩個結果進行判定。

以上為兩個最基本的方法，操作簡單，成本可控，兩個結合起來結果准確，當然還有一些其他的方法，並設計對照試驗，採用控制變數法進行研究。