如何建立液相方法

Ⅰ 如何建立高效液相色譜法測定含量的方法

1色譜條件的確定專屬性是色譜條件建立的關鍵通常是採用在被測物對照品(或供試品)中加入適量的雜質或輔料以驗證所選色譜條件能否將各雜質與被測物分離檢出

Ⅱ 如何建立高效液相色譜法測定有關物質的方法

摘要 本文就如何建立TLC法測定有關物質的方法進行論述，系統地闡述了薄層色譜法各條件確定的原理，並列舉了質量標准制訂中存在的某些問題。
關鍵詞 薄層色譜法（TLC法） 有關物質 方法建立
有關物質是研究葯品中除主成分以外的雜質，它可能是原料葯合成過程中帶入的原料、中間體、試劑、降解物、副產物、聚合體、異構體以及不同晶型、旋光異構的物質，也可能是制劑過程中產生的降解物，或是在貯藏、運輸、使用過程中產生的降解物等[1]。這些雜質的存在直接反映葯品的有效性和安全性，故要對其進行研究，特別是在葯品申報的質量研究資料中需建立其檢測方法，並根據生產、穩定性考核等實際情況考慮是否在質量標准中制訂該檢查項，規定其限度。目前，有關物質的常用測定方法有高效液相色譜法(HPLC法)和薄層色譜法(TLC法)。
TLC的特點是快速、簡便，尤其是對無紫外吸收的雜質測定，更具有其應用價值。如能將TLC法與HPLC法有機地結合、或彼此間進行比對研究，便可得到更多、更為准確的有關雜質信息，做到兩方法間的相輔相成，相益得彰！本文將著重討論如何建立薄層色譜法測定有關物質的方法。
1．測定方法類型
常用的方法有雜質對照品法（適用於已知雜質）和自身（稀釋）對照法（適用於一般雜質檢查，雜質成分少且尚不能取得雜質對照品）。目前國內由於難以獲得雜質對照品、故一般均採用自身對照法。
2．展開劑的確定（即專屬性試驗）
專屬性的研究是提供被分析物在雜質和輔料存在時能被區分的證明，該點是色譜條件建立的關鍵。通常採用在被分析物的對照品或精製品中加入一定量的雜質或輔料，證明色譜條件可將各雜質與被分析物分離[1]。這里的關鍵是：將多少量的雜質加入到多少量的主成分中。正確的作法是將1%(w/w)濃度量的各雜質加入到100%濃度的主成分中，配製這樣的溶液來
驗證系統適用性。

Ⅲ 如何進行液相分析方法開發

如何進行液相分析方法開發
一、方法驗證簡介
分析方法開發與驗證是一個整體，在實際工作中，一般是先開發分析方法，經過適當的優化以後再做方法驗證。所謂方法驗證是指為了保證分析檢測結果准確、可靠，必須對所採用的分析方法的准確性、科學性和可行性進行驗證，以證明分析方法符合分析測試的目的和要求。方法驗證在質量控制上有重要的作用和意義，在建立產品質量標准時，分析方法需經驗證；在產品生產工藝變更、配方的組分變更、原分析方法進行修訂時，則質量標准分析方法也需進行驗證。

二、方法驗證內容包括
專屬性、線性、范圍、准確度、精密度、檢出限、定量限、耐用性等。

三、方法驗證成熟儀器項目
色譜類儀器：氣相色譜/質譜聯用儀GC/GC-MS、液相色譜/質譜聯用儀LC/LC-MS、三重四級桿串聯液質儀UPLC-MS-MS；
元素類儀器：電感耦合等離子發射光譜/質譜聯用儀ICP-OES、電感耦合等離子發射光譜/質譜聯用儀ICP-MS、離子色譜儀IC、原子吸收光譜儀AAS、原子熒光光譜儀AFS。

四、方法驗證成熟分析項目
鑒別試驗、雜質定量檢查或限度檢查、微量助劑（如增塑劑、抗氧劑等助劑）的測定、有效成分含量測定、溶劑殘留、元素測定、離子測定等。

Ⅳ 如何建立高效液相色譜法測定含量的方法

1 色譜條件的確定
專屬性是色譜條件建立的關鍵通常是採用
在被測物對照品(或供試品)中加入適量的雜質或輔
料以驗證所選色譜條件能否將各雜質與被測物
分離檢出
[2]
。應按1(w/w)被測物濃度的各雜質量
添加至被測物中模擬被測物中可能存在雜質的
狀態即有少量(約1)雜質存在時能否與被測物
達到完全分離(分離度大於1.5)以驗證系統適用
性。只有這樣才能較為客觀、科學地反映被測物的
實際情況。而不應將被測物與各雜質配製成相同濃
度的溶液因為實際檢測中不可能存在這種情況
且該濃度也不易確定。在實際檢測時由於被測物
濃度較大很易將相鄰雜質峰包含其中。另外還需
測定溶劑和輔料(檢測制劑時)是否有干擾。目前
美國葯典(USP)、英國葯典(BP)及許多進口產品的
質量標准中有關物質測定方法學的專屬性驗證均
採用此法。還須說明的是雜質與雜質峰間的分離
度達1.2即可而被測物與其相鄰雜質峰的分離度
必須大於1.5。
2 檢測波長的選擇
有關物質檢測的研究對象是雜質而非被測
物。但測定則是通過各自的峰面積來表達故波長
的選擇必須考慮被測物和各雜質在檢測波長下的校
正因子(f)是否相同。應分別制備相同濃度的被測
物與各雜質溶液經紫外掃描後以吸光度相近的波
長為檢測波長。在該檢測波長下分別進樣測定
由各峰面積計算校正因子。若f為0.81.2則表明
被測物與各雜質的f相同可消除f的影響。若f≤0.8
或f ≥1.2則應在計算時加入f。目前通常以被測物
的最大吸收波長為檢測波長、不加校正因子的計算
方法而未綜合考慮各雜質的f。
3 供試品溶液濃度的確定
供試品溶液濃度的確定也非常重要。雖然濃度
越高越能反映被測物中雜質存在的情況但若設定
過高會產生主峰嚴重拖尾、裂峰、柱超載和檢測器超載等情況若設定過低則靈敏度不夠無法
檢測雜質及其含量變化。
最低檢出濃度的測定可分為信噪比法和直接評
價法兩種
[3]
。後法是目前較為科學的做法即將儀
器的靈敏度調至較適宜的值(僅對靈敏度可調節的
儀器而言目前市場上主流品牌的液相色譜儀均已
設定了一個恆定、較為靈敏的值)然後將被測物
溶液不斷稀釋後進樣測定直至被測物峰面積無法
檢出為止此時的濃度即為最低檢出濃度。
最大進樣量則是採用不斷增加被測物溶液濃
度直至峰嚴重拖尾、裂峰、柱超載和檢測器超載
等情況出現。
根據最低檢出濃度採用「上推法」來確定
供試品溶液濃度如一般設定雜質總量小於1.0
對照液對照溶液的濃度至少應為最低檢出濃度的
2050倍供試品溶液濃度則應是最低檢出濃度的
20005000倍。同時還應考慮儀器、色譜柱等因
素對最低檢出濃度和最大進樣濃度的影響(即耐用
性因素)所以供試品溶液的濃度應在保證小於最
大進樣量的情況下適當設定得高些以保證該濃
度在任何試驗條件下均有足夠的檢測靈敏度。表
1為最低檢出濃度、最大進樣量、供試品溶液和對
照溶液間的比例關系(進樣量10µl規定雜質限度
1.0)。
4 線性試驗
在穩定性考察中如某雜質含量不斷增加
則說明被測物降解的途徑穩定、可循則有必要對
該雜質進行針對性地監控即採用該雜質對照品
(經確證結構後由人工合成獲得)以外標法准確測
定。此時與含量測定相似應進行線性試驗。
通常將雜質限度設定為該雜質的100濃度線性
驗證范圍10150(即相當於被測物測定濃度
表1 最低檢出量、最大進樣量、供試品溶液和對照
溶液間的比例關系
參數濃度/µg·ml
–
1
絕對量/ng相當於供試品
溶液濃度/與最低檢出
濃度的倍數
最大進樣量3000
最低檢出濃度0.110.02
供