脂質過氧化研究方法

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SOD對糖尿病患者的治療效果論證

一、糖尿病患者血清中SOD含量與血糖之間的關系

大量臨床醫學數據和糖尿病患者服用SOD含片後的血糖指標檢測表明，提高糖尿病患者體內SOD含量，可以有效降低血糖，緩減糖尿病及其並發症導致的身體不適感。同時，糖尿病患者血清中SOD含量在很多情況作為降糖葯對糖尿病患者是否有效的重要醫學指標。

糖尿病患者服用降糖葯或注射胰島素以後，可在患者體內提高SOD的活性，降低血糖。可加強抗氧化、達到清除自由基作用，提高對氧自由基的清除率，阻止脂質過氧化產物對血管內皮細胞的損傷以及組織損傷，來達到降糖的治療效果。

二、糖尿病患者血清中SOD含量與降糖葯功效評估

【數據資料來源1】

為獲得糖尿病患者體內SOD的活性變化情況，我們從科學文獻資料庫中收集了123個案例，所收集的醫學案例數據表明，隨著糖尿病患者血糖的升高，體內SOD含量逐漸降低，從臨床數據上獲得了提高患者體內SOD含量，能有效降低患者血糖的這樣一個結論。

【數據來源】 檢驗醫學與臨床;2016年10月第13卷第19期

【臨床資料】選取上海中醫葯大學附屬曙光醫院內分泌科和腎病科2014年1月至2015年12月123例II型糖尿病患者納入II型糖尿病組,均符合2007年版《中國2型糖尿病防治指南》制定的診斷標准,並排除合並惡性腫瘤、血液系統疾病,其他急慢性腎臟疾病、肝功能不全等,並根據美國糖尿病協會(ADA)對UACR（清蛋白尿）不同程度的劃分將123例II型糖尿病患者分為3組:正常清蛋白尿(輕微糖尿病)組(UACR<30mg/g)40例,微量清蛋白尿(中度糖尿病)組(UACR為30~<300mg/g)40例、大量清蛋白尿(嚴重糖尿病)組(UACR≥300mg/g)43例;同時以42例體檢健康者為對照組,均無急慢性感染、肝腎功能不全糖尿病糖尿病等疾病。

【檢測方法】所有研究對象均在清晨空腹狀態下抽血檢測。TBIL（總膽紅素）採用重氮法檢測,SOD（超氧化物歧化酶）採用膠乳鄰苯三酚比色法檢測。TNF-a（腫瘤壞死因子）採用化學發光法,通過 Immulite1000化學發光儀進行檢測。

2. 滇橄欖的栽培技術

種子採收
余甘子一般4～6月開花，種子於11～12月成熟，果皮變紅時就可采種，應選擇生長迅速、成年健壯、抗性強、無病蟲害的優良樹作為采種樹，果實採回後搗爛、搓洗凈後陰干，用麻袋或布袋貯藏。
苗地選擇
苗圃地應選擇坡度在8度以下的半陽坡地或平地，土質疏鬆、土壤肥沃、透氣良好、有灌溉條件、排水良好及交通方便的地方。育苗時，細致整地，做高床，苗床寬1m，長度依地形和管理方便為宜。床面要整平，土塊要敲細，床面的熟土應集干一旁作營養土的配料。
種子處理
⑴催芽 選擇排水良好、背陰的地方做沙床，用河沙作基質，用0.5%的高錳酸鉀溶液消毒後，將余甘子種子按l:2的比例與濕沙混合拌勻後置入沙床內，攤平，再蓋上一層濕沙，厚度以種子不裸露為宜，上面再蓋一層草席，每天澆少量水保濕，進行催芽處理，至種子露白即可播種。
⑵播種 將經過催芽處理的余甘子種子均勻撒播在苗床內，播種後覆蓋厚度為0.5cm左右的細土，最後蓋上草席，澆透水。播種後應每天澆水1次，使苗床保持濕潤。10～15d後，苗木開始出土，此時應逐步去掉草席；20d左右，苗木基本出齊，應及時移栽。
袋苗培育
⑴營養土配製及裝袋 採用2份已腐熟的農家肥和3份腐殖質土，再加4份苗圃地的熟土和1份細沙混勻，或在苗圃地的熟土中加入3%～5%的普鈣或l0%的農家肥拌勻，配製成營養土。然後，將營養土裝入營養袋，營養袋規格一般為l8cm×20cm，厚度6絲以上，裝滿後按每行l0袋擺放在苗床上，四周用土埋好（埋土與營養袋齊平為宜）。
⑵移苗 苗高達5～6cm，2片子葉打開而真葉又未長時，是移栽的最佳時節。此時移栽成活率可達95%。移栽應選擇陰天或晴天早晚進行。移栽前，應把苗床和營養袋澆濕；移栽時，小心取苗，盡量保持苗木根系的完好。移栽的方法是用削尖的小木棍在營養袋內戳一個圓孔，將苗木根系垂直植干圓孔內，深度以覆土至苗根部以上lcm為宜，用手指壓實空隙，澆透水即可。
⑶點播 培育余甘子幼苗也可直接在營養袋內點播（但點播成活率只達90%）。將經過催芽處理後的種子點播於營養袋中，蓋土厚度以1cm為宜，再用草席覆蓋。點種後，應加強水分管理；20d後，苗木基本出齊；此後，應做好查缺補苗工作。
苗木管理
⑴移苗後管理 移植的幼苗要蓋上遮蔭網，等幼苗成活並長高達10～15cm時，方可撤去。
⑵查缺補苗 苗木移栽後，可能還有5%～10%的空袋率，應及時補齊，後補的苗木應加強水分管理，防止再次缺水死亡。
⑶除草 發現雜草及時拔除，以「除早、除小、除了」為原則。
⑷水肥管理 幼苗長定後，應視情況澆水，以保持苗地及袋土的濕潤。整個幼苗期應施肥2～3次，可採用葉面噴施0.3%的尿素和磷酸二氫鉀，也可採用0.6%復合肥液進行根外追肥。la後，苗高30～40cm，即可出圃造林。 果實含鞣質，其中有葡萄糖沒食子鞣甙（glucogallin），沒食子酸（gallic acid），並沒食子酸（ellagic acid），鞣料雲實精（corilagin），原訶子酸（terchebin），訶黎勒酸（chebulagic acid），訶子酸（chebulinic acid），訶子次酸（chebulic acid），3，6-二沒食子醯葡萄糖（3，6-digalloylglucose），乾果含粘酸（mucic acid）4%-9%。果皮含沒食子酸，油柑酸（phyllemblic acid），余甘子酚（emblicol）。種子含固定油約26%，油中含亞麻酸（linolenic acid）8.8%，亞油酸（linoleic acid）44%，油酸（oleic acid）28.4 %，硬脂酸（stearic acid）2.2%，棕櫚酸（palmitic acid）3.0%，肉豆蔻酸（myristic acid）1%等。
1.2 黃酮類化合物
余甘子果實中含有黃酮類化合物，1994 年日本學者用甲醇和水提取余甘子果實，從中得到槲皮素，山 奈 酚-3-O-葡 萄 糖 甙(Kaempferol-3-0-glucoside)，槲 皮 素-3-O-葡 萄 糖 甙 (Quercetin-3-0-glucoside)，無色飛燕草素leucodelphinidin。
1.3 生物鹼類
1976年，Ram等從余甘子中分離出了生物鹼zeatin.
1.4 萜、甾醇和苷類
1978年，Ram等從余甘子中分離出二萜類成分，giberellinA-1, giberellinA-3,giberellinA-4, giberellinA-7, giberellinA-9。2001年，Zhang YJ 等從余甘子根部分離出了三種沒葯烷型倍半萜類成分，phyllaemblic acid B， phyllaemblic acid C，phyllaemblicin D及苷類：2-羧甲基酚-1-O--D-吡喃葡萄糖苷（2-carboxylmethylphenol 1-0-beta-D-gluranoside）及2，6-二甲氧基-4-（2-羥乙基）酚-1-O--D-吡喃葡萄糖苷(2,6-dimethoxy-4-(2-hydroxyethyl)phenol 1-0-beta-D-gluranoside)。余甘子中還含有甾醇類化合物β-谷甾醇（β-sitosterol）。
1.5 維生素
余甘子果實中含維生素C，維生素B1，維生素B2 ,胡蘿卜素，維生素A,維生素pp 等，尤其富含維生素C，其含量可達 0.6%～0.92%,春季果實含量最高，有時甚至可達 1.82%，該含量是蘋果維C 含量的 160 倍，同時也是柑橘含量的100倍,僅次於水果維生素C 之王的刺梨 。
1.6 氨基酸
余甘子果實中含 17 種氨基酸，包括了人體所需的 8 種氨基酸，其氨基酸總含量達 185mg/100g，主要有谷氨酸，脯氨酸，天冬氨酸，丙氨酸 賴氨酸。
1.7 微量元素
余甘子果實中含有多種微量元素，其含量比蘋果豐富，主要有硒、鋅、鈣、磷、鐵、鉀等。
1.8 脂肪酸
余甘子種子含脂肪酸26%，主要包括：亞麻酸，亞油酸，油酸，硬脂酸，棕櫚酸，肉豆蔻酸等。

成分特點
滇橄欖含有大量的Vc、VP、碳水化合物、有機酸、單寧，還含有蛋白質、脂肪、維生素B1、B2、A，胡蘿卜素、纖維素、果膠、生物鹼和鈣、磷、鐵、鉀、鈉等。特別是維生素C的含量高達每百克果肉540～1714mg，更具價值的是所含Vc在高溫下十分穩定，在加工中．以100℃4小時，8O℃8小時，60℃13小時的烘烤或日曬後．其維生素C仍保存7O%一93%。滇橄欖果實因含有17%以上的單寧，故酸澀味重，鮮食量十分有限，但通過加工，可以生產出不同的產品，可去除多餘的酸澀味，並保留其甘甜的回味。
醫學研究
國外學者對滇橄欖的研究認為．滇橄欖可治低血糖，有濾尿與降壓作用，有治肝炎及抗放射線損傷的作用。我國醫學界和科研部門經過反復試驗和不斷研究，證明滇橄欖具有明顯的抗衰老作用；對強致癌物N-亞硝基化合物在動物及人體內的合成有明顯的阻斷作用，阻斷率達90.11%以上。上海和福建兩家醫院用滇橄欖復方治療乙型肝炎，總有效率達89.9% ，治癒率達46.6% 。上海華東醫院運用滇橄欖汁治療高血壓和高血脂病，其有效率分別為82.4%和100%。
用連苯三酚自氧化法測定滇橄欖系列產品清除O2的活力，結果都比較高，尤以滇橄欖粉的活力最高，達25241u/g老年人飲用滇橄欖汁2個月後，血液中紅細胞超氧化歧化酶（SOD）活力提高1.3倍，血漿中脂質過氧化物（LPO）含量下降11%，小鼠皮夫試驗證明，滇橄欖中的有效物質能透過小鼠皮膚，清除皮膚內部的自由基，果蠅試驗表明，可延長壽命。 2.1 抗艾滋病逆轉錄酶(HIV-1 RT)作用
對 HIV-1 RT的抑製作用可以預防艾滋病，1995年日本學者對41種埃及草葯提取物測試抗HIV-IRT活性，在對余甘子的研究中，分離得到鞣質Putranjivain A對HIV-1RT有很強抑製作用，其ID50為3.9&micro;M。
2.2 防癌作用
余甘子果實提取物不論體內還是體外，均能夠阻斷強致癌物N-亞硝基化合物的合成，其阻斷率在 90%以上，比同濃度的Vc 高 3～5 倍，表明余甘子具有防癌作用。在體外余甘子的酚酸類成分能抑制人癌細胞株erythromyeloid K562, B-lymphoid Raji, T-lymphoid Jurkat, erythroleukemic HEL.的增生。
2.3 抗誘變、抗致畸作用
余甘子水提物能明顯減弱由重金屬鹽 Pb(NO3 )2和Al 2(SO4 )3.18H2O所引起的
小鼠骨髓細胞的細胞毒作用(400mg/Kg dry weight,P<0.001),水提物和Vc 有協同作用，共同飼養小鼠，可以降低有害物質氯化鋅，間胺黃和乙醯類殺蟲劑對小鼠骨髓細胞的全面破壞作用，可以抗鎳、鎘、銫等引起的誘變。
2.4 抗炎作用
余甘子能顯著抑制大鼠瓊脂性足跖腫脹和二甲苯所致小鼠耳緣腫脹，顯著抑制組胺所致的毛細血管通透性增強和白細胞游出。表明余甘子有顯著的抗炎和抗滲出作用。抗炎作用隨劑量增大而增強。余甘子能顯著抑制急性炎症的發展，改善和緩解炎性症狀，對慢性增生性炎症作用不明顯 。
2.5 降血脂及抗動脈粥樣硬化作用
余甘子是一種較好的天然降脂葯物，用於治療糖尿病脂代謝紊亂所引起的高血脂有良好的效果，其療效高於維生素E，對微血管病變和神經系統並發症也有一定的療效。由其鮮果汁精製而成的安摩樂口服液與膠囊有降脂降壓的作用，可治療高脂血症及單純性肥胖症，臨床檢測無毒副作用。
余甘子果汁可抗動脈粥樣硬化作用，對實驗性高膽固醇血症療效最好。余甘子能使飼喂高膽固醇動物的血清膽固醇，甘油三脂，磷脂及LDL水平分別降低 80%，66%，77%及 90%，還可明顯抑制主動脈內膜斑塊的形成，並能加速膽固醇及磷脂從糞便中排泄，說明其降脂作用可能與干擾膽固醇的吸收有關。
2.6 抗氧化作用
脂質過氧化（Lpo）損傷與腫瘤、衰老、心腦血管病、自身免疫疾病、休克、炎症、輻射損傷等的發生發展密切相關，汕頭大學學者參考Rieba HCB方法，建立Fe2+誘發脂蛋白PUFA 過氧化體系，用於評價余甘子果汁的AOA(抗氧
化性)，經檢測表明余甘子有抗氧化作用。通過測定余甘子果汁粉對實驗性高膽固醇血症家兔血脂、丙二醛水平、動脈粥樣斑塊形成及內皮素-1表達的影響，證明余甘子具有較強的抗脂質過氧化作用，能提高機體抗氧化能力，具有保護血管內皮功能的作用。
2.7 抗衰老作用
衰老的主要根源是自由基過多，而脂質過氧化物(LPO)含量增高，說明自由基反應增強；超氧化物岐化酶(SOD)有清除超氧自由基，保護細胞發揮其抗衰老作用。余甘子果實提取物能抑制連苯三酚和腎上腺素的自氧化作用，表明其中含有這一對人體有益的活性物質SOD，每克鮮果含SOD活力為482.14U。
用比較研究方法觀察不同濃度余甘子對大、小鼠紅細胞SOD、血清Lpo、Zn、Cu和體重量的影響，結果說明余甘子影響大、小鼠體內的自由基反應，降低Lpo含量，提高紅細胞 SOD 活性及相關的Zn,Cu水平。臨床研究表明余甘子使紅細胞SOD活力明顯增加，高於服用前(P<0.01)，上升率 100%，血漿中Lpo含量下降，下降率為 73%，表明余甘子可能具有延緩、拮抗衰老進程的作用。
2.8 保肝作用
余甘子的水提醇沉物對撲熱息痛、硫代乙醯胺所致的急性肝損傷具有預防作用，對 D-半乳糖胺所致的急性肝損傷具有明顯的保護作用，對四氯化碳引起的的慢性肝損傷具有保護肝細胞，減少肝損傷，抗肝纖維化作用。50%乙醇提取物余甘子能明顯降低血清 SGPT，膽固醇和脂質體(P<0.005)，從而達到保肝效果。
2.9 對胃腸道的作用
2.9.1 抗潰瘍作用
余甘子果實水提物的丁醇部分有抗潰瘍作用。余甘子丁醇部分對消炎痛所致實驗性胃粘膜損傷有明顯的保護作用，能使消炎痛所致的小鼠的潰瘍面胃粘膜分泌物及氨基己糖增多（P<0.001），其對胃粘膜的保護作用可能與其抗氧化作用有關。
2.9.2 抗腹瀉作用
余甘果汁合劑對小兒腹瀉具有良好的效果。其對部分病原菌有殺滅和抑製作用，尤其適用於小兒病毒性腸炎，對一般的細菌性腸炎有抗生素之效，治療組和對照組對比有極顯著意義（P<0.001），但對毒性較強的致病菌痢疾桿菌無效。因此，對一般的小兒腹瀉用余甘子治療頗為適宜。
2.10 免疫調節作用
2.10.1 對非特異性免疫功能的調節作用
余甘子能增強天然殺傷細胞的活性並有抗體依賴性細胞介導的細胞毒性（ADCC）效應。余甘子能增強接種了DLA腫瘤三天後小鼠脾臟的天然殺傷細胞（NK）的活性，其效果在接種後3，5，7，9天尤為顯著。其ADCC效應在用葯後3，7，9，11，13天表現突出。可見，余甘子能增強腫瘤動物的NK 細胞或K 細胞的活性。
余甘子還能誘生人白細胞干擾素。採用細胞病毒抑製法測 IFN-X效價，對照觀察余甘子促誘生人白細胞干擾素的作用，結果表明，不同含量余甘子液均有促誘生人白細胞干擾素的作用(P<0.05或0.01),含量為0.08g/ml 時，促誘生作用最強，提高率為45.9%，其強度比黃芪弱，比板藍根略強。
2.10.2 對特異性免疫功能的增強作用
余甘子在體外對人體淋巴細胞無誘發DNA和染色體損傷作用，有提高細胞免疫和抑制細胞增殖的作用。余甘子在一定劑量范圍內有促進人體細胞免疫功能的作用。細胞周期比率（尤其是第三周期比率）和增殖率指數反映了細胞有絲分裂的強弱，增殖能力的好壞。在一定劑量范圍內，細胞周期比率（尤其是第三周期比率）和增殖率指數均隨余甘子劑量增加而下降，並存在一定劑量-效應關系，說明余甘子對人體細胞的增殖能力有一定的抑製作用。
由此可見，余甘子能增強機體免疫功能，提高人體抗病能力。
2.11 解毒作用
余甘子有解金屬毒作用。《本草綱目》載「李旬曰：為末點湯服，解金石毒。宗爽曰：黃金得余甘則體柔，亦物類相感相伏也，故能解金石之毒。」重金屬離子能與人體內含巰基的酶類相結合而使其失去活性，致使人體代謝發生障礙而中毒。近代研究表明，余甘子對銅，鎳，鈣，鋅，銫，亞鐵等金屬有對抗作用，可以排除體內銅、鎳等有毒金屬。
其對抗作用可能與余甘子內含有的維生素C及沒食子酸，並沒食子酸，鞣質等成分有關。維生素C 是一種廣泛的抗癌，抗畸變，抗裂變的有效成分。同時也是一種抗氧化劑，可以抑制化學變異。並能使體內的氧化型谷胱甘肽（GSSG）還原成還原型的谷胱甘肽（GSH）。GSH可與重金屬離子結合而排出體外。沒食子酸，並沒食子酸，鞣質等成分具有酚酸性，易與某些金屬相結合而對該金屬起到清除作用。
2.12 其他作用
2.12.1 余甘子有抗菌作用
余甘子果實先用80%醇提取，再用醚提取，以鹽酸酸化處理後，對葡萄球菌，傷寒桿菌，副傷寒桿菌，大腸桿菌及痢疾桿菌均有抑製作用而對真菌無作用。
2.14 毒性
2.14.1 急性毒性：余甘子62.4g/kg，分4 次，24 小時內給完，觀察7 天，除前3 天內有3 只小鼠活動減少有豎毛現象外，其餘均無異常反應。
2.14.2 長期毒性：余甘子 3.6,7.2,10.8g/kg，灌胃大鼠，連續給葯 6 天，肝腎功能無異常，表明余甘子連續給葯對大鼠無任何明顯的毒副反應。
其它用途
滇橄欖極喜光，耐乾熱瘠薄環境，萌芽力強，根系發達，可保持水土，可作產區荒山荒地酸性土造林的先鋒樹種。樹姿優美，可作庭園風景樹，亦可栽培為果樹。葉曬干供枕芯用料。種子含油量16% ，供製肥皂。樹皮、葉、幼果可提制栲膠。木材棕紅褐色，堅硬，結構細致，有彈性，耐水濕，供農具和傢具用材，又為優良的薪炭柴。

3. 怎麼從基因表達水平看脂質過氧化

當人類基因體定序計劃的重要里程碑完成之後，生命科學正式邁入了一個後基因體時代，基因晶元(microarray)的出現讓研究人員得以宏觀的視野來探討分子機轉。不過分析是相當復雜的學問，正因為基因晶元成千上萬的信息使得分析數據量龐大，更需要應用到生物統計與生物信息相關軟體的協助。要取得一完整的數據結果，除了前端的實驗設計與操作的無暇外，如何以精確的分析取得可信數據，運籌帷幄於方寸之間，更是畫龍點睛的關鍵。�0�2基因晶元的應用基因晶元可以同時針對生物體內數以千計的基因進行表現量分析，對於科學研究者而言，不論是細胞的生命周期、生化調控路徑、蛋白質交互作用關系等等研究，或是葯物研發中對於葯物作用目標基因的篩選，到臨床的疾病診斷預測，都為基因晶元可以發揮功用的范疇。�0�2基因表現圖譜抓取了時間點當下所有的動態基因表現情形，將所有的探針所代表的基因與熒光強度轉換成基本數據(rawdata)後，仿如尚未解密前的達文西密碼，隱藏的奧秘由絲絲的線索串聯綿延，有待專家抽絲剝繭，如剝洋蔥般從外而內層層解析出數千數萬數據下的隱晦含義。�0�2要獲得有意義的分析結果，恐怕不能如潑墨畫般灑脫隨興所致。從rawdata取得後，需要一連貫的分析流程(圖一)，經過許多統計方法，才能條清理明的將rawdata整理出一初步的分析數據，當處理到取得實驗組除以對照組的對數值後(log2ratio)，大約完成初步的統計工作，可進展到下一步的進階分析階段。

4. 脂肪檢測的原理是什麼實驗操作流程

脂肪檢測方法可用索式提取法：

一、索式提取法（經典方法）

1、原理：

樣品經前處理後，放入圓筒濾紙內，將濾紙筒置於索式提取管中，利用乙醚或石油醚在水浴中加熱迴流，使樣品中的脂肪進入溶劑中，回收溶劑後所得到的殘留物，即為脂肪（粗脂肪）
採用這種方法測出遊離態脂，此外還含有磷脂、色素、蠟狀物、揮發油、糖脂等物質，所以用索氏提取法測得的脂肪為粗脂肪。

2、 適用范圍與特點

索氏提取法適用於脂類含量較高，結合態的脂類含量較少，能烘乾磨細，不宜吸濕結塊的樣品的測定。此法只能測定游離態脂肪，而結合態脂肪無法測出，要想測出結合態脂肪需在一定條件下水解後變成為游離態的脂肪方能測出。

另外此法是經典方法，對大多數樣品結果比較可靠，但需要周期長，溶劑量大。

二、實驗操作流程

1、濾紙筒的制備

將濾紙剪成長方形8×375px ，捲成圓筒，直徑為150px，將圓筒底部封好，最好放一些脫脂棉，避免向外漏樣。

2、稱取樣品，將樣品烘乾磨細，稱取一定量與紙筒封好上口，最好用測定水的樣品。

3、索式抽提器的准備

索氏抽提器由三部分組成，迴流冷凝管、提取管、提脂瓶組成。提脂瓶在使用前需烘乾並稱至恆重。其它要乾燥。

4、抽提

將裝好樣的紙筒放入抽提管 ， 倒入乙醚，乙醚的量從提取管加入，加入的量為提取瓶體積的2/3 接上冷凝裝置，在恆溫水浴中抽提，水浴溫度大約為55℃左右，可用濾紙檢驗，理論值抽提6-8小時，實際值3-4小時，但也根據樣品性質來決定。
5、回收乙醚

當乙醚在提取管內即將虹吸時立即取下提取管，將其下口放到乙醚回收瓶內，使之傾斜，然後將提取瓶放到100-150℃烘箱烘至恆重。

6、計算

脂肪%= (W2-W1)/W x 100

W2——瓶和樣品重（g）W1——瓶子重量（g） W——樣品重量（g）

或：脂肪%=（抽提後濾紙與樣品重量—抽提前濾紙重量）/樣品重量 × 100

濾紙筒應事先放入燒杯與100-105℃烘箱烘至恆重。

(4)脂質過氧化研究方法擴展閱讀：

索式提取法注意事項

（1）樣品應乾燥後研細，裝樣品的濾紙筒一定要緊密，不能往外漏樣品，否則重做。

（2）放入濾紙筒的高度不能超過迴流彎管，否則乙醚不易穿透樣品，使脂肪不能全部提出，造成誤差。

（3） 碰到含多糖及糊精的樣品要先以冷水處理，等其乾燥後連同濾紙一起放入提取器內。

（4） 提取時水浴溫度不能過高，一般使乙醚剛開始沸騰即可（約45℃左右），迴流速度以8-12次/時為宜。

（5） 所用乙醚必需是無水乙醚，如含有水分則可能將樣品中的糖以及無機物抽出，造成誤差。

（6） 若用干樣品測定脂肪，可按下式計算原來樣品脂肪的含量

脂肪（%）= （W1-W2）(100-A) / W

A— 100克樣品中水分的含量（g）

(7) 冷凝管上端最好連接一個氯化鈣乾燥管，這樣不僅可以防止空氣中水分進入，而且還可以避免乙醚揮發在空氣中。這樣可防止實驗室微小環境空氣的污染，如無此裝置，塞一團干脫脂棉球亦可。

（8）如果沒有無水乙醚可以自己制備，制備方法如下：在100ml乙醚中，加入無水石膏50克，振搖數次，靜止10小時以上，蒸餾，收集35℃以下的蒸餾液，即可應用。

（9）將提取瓶放在烘箱內乾燥時，瓶口向一側傾斜45度防止揮發物乙醚易與空氣形成對流，這樣乾燥迅速。

（10）如果沒有乙醚或無水乙醇時，可以用石油醚提取，石油醚沸點30-60℃為好。

（11）使用揮發乙醚或石油醚時，切忌直接用火源加熱，應用電熱套、電水浴、電燈泡等。

（12） 這里恆重的概念有區別，它表示最初達到的最低重量，即溶劑和水分完全揮發時的恆重，此後若在繼續加熱，則因油脂氧化等原因會導致重量增加。

（13） 在乾燥器中的冷卻時間一般要一致。

5. 中葯葯理作用研究的具體方法

1 血清葯理學方法學研究
在中葯葯理學研究中，有相當一部分葯理活性實驗和作用機理是在體外進行的，而利用中葯粗提物直接進行體外實驗，其結果的真實性和可靠性都受到很大影響。中葯血清葯理學研究方法是指給動物經口用葯後一定的時間采血，取含葯血清進行體外實驗的一種研究方法，該方法由日本學者田代真一提出，95年前後國內即陸續開展。國家自然科學基金委員會曾於1996年資助重點項目：中葯復方體外實驗的方法學研究，在含葯血清葯理作用強度與體內給葯的量效關系研究、給葯方案研究、反應體系中含葯物血清加入量的確定、采血時間的確定及時效關系研究、含葯血清低溫保存和血清滅活對效應的影響等方面做了大量卓有成效的工作。在以含頭風飲(川芎、天麻為主)葯物血清抗血小板釋放5-HT和阻滯內皮細胞鈣通 道作用為指標的實驗中證實：在一定范圍內，動物給葯量與吸收入血的葯物量及含葯血清的體外葯理效應呈正相關〔1〕；含葯血清的葯物濃度除與給葯劑量有關外，還與給葯方案 (如一日內給葯次數及給葯天數等)直接相關〔2〕；體外實驗體系中含葯血清加入量 的多少對葯理效應產生明顯的影響，因而對最佳反應體系的探索具有重要意義〔3〕 ；在採用血清葯理學方法進行實驗前，進行時效關系研究，找出給葯後最佳采血時間是十分 必要的〔4〕；含葯血清低溫保存和血清滅活可能對葯理效應產生明顯影響，應以使 用新鮮血清或保存時間較短的血清
為宜〔 5〕。鑒於目前多數中葯或復方有效成分尚不明確，成為制約中葯現代研究的瓶頸，近年 進行了中葯血清葯化學與血清葯理學協同研究的嘗試，以揭示產生葯效的物質基礎。提出在 建立血清化學成分指紋圖譜並測定相應含葯血清葯理效應強度後，進行葯物效應成分分析， 如果含葯血清的葯理效應強度與其血清指紋圖譜中某成分指紋峰大小相一致，則說明該成分 與所觀察葯理作用密切相關〔6〕。中葯血清葯理學針對中葯及其復方復雜多樣的化 學成分的特點，結合化學、微生物學、分子生物學等多學科的先進技術手段，將有可能成為 中葯葯理學研究的一種新的方法體系。
2 單味葯葯理研究
常用單味中葯葯理研究是中葯葯理研究的重要內容。近年仍以對整體動物 葯理效應觀察及對器官、組織、細胞的影響等為主，現代生物技術如分子生物學研究方法 也受到廣泛關注和應用。研究的葯味相對集中，以補益葯、活血化瘀葯居多，不少常用中葯 的新葯理作用機理被揭示。
研究發現黃芪對自然衰老大鼠腦皮質、海馬、紋狀體3個腦區降低的M膽鹼受體和M1亞型受體密度有顯著的上調作用，並可調節老年大鼠血漿環核苷酸含量〔7〕；衰老大鼠心肌 β受體密度及T3、T4、皮質醇含量均降低，黃芪、人參、枸杞子可 升高之〔8，9〕；對肝硬化大鼠存在的下丘腦血管加壓素系統異常有改善作用 〔10〕；可以明顯提高腎病綜合征大鼠血漿白蛋白水平，改善腎小球濾過率和尿鈉排泄 〔11〕；對環磷醯胺所致免疫功能抑制小鼠細胞毒活性有顯著增強作用，並可能
通過調控巨噬細胞C1q的分泌功能來增強免疫和抗腫瘤作用〔12，13〕；還發現 黃芪煎劑及含黃芪小鼠血清均對小鼠脾淋巴細胞增殖、混合淋巴細胞培養反應及IL-2的產生有促進作用〔14〕。冬蟲夏草水提液能降低正常心肌細胞內Ca2＋ 的濃度，減輕缺氧再給氧時細胞內Ca2＋超載現象，並明顯減輕缺氧再給氧時細胞 內脂質過氧化〔15，16〕。紅參在預防高血壓性視網膜動 脈硬化起重要作用，能使內皮細胞膜的光整性、細胞器的結構及內皮細胞分泌各種血管舒縮 物質保持正常，抑制平滑肌細胞的異常增生，還有擴張血管、減少外周阻力及調節血壓的作 用〔17〕。生地黃可明顯抑制皮質酮致「陰虛」模型小鼠巨噬細胞Ia抗原 的高水平表達，降低其提呈抗原能力，從而表現出一定的免疫抑製作用〔18〕。丹參注射液可明顯降低缺血再灌注引起的大鼠腦水腫，減少腦皮層及海馬組織丙二醛含量，提高過氧化氫酶、超氧化物歧化酶活性和還原型谷胱甘肽、三磷酸腺苷的含量〔19〕。
3 有效部位、有效單體葯理研究
隨著中葯化學成分提取、分離技術的進步，中葯葯理學與中葯化學學科結合更為密切， 中葯 有效部位、有效單體的葯理研究日益增多。近年研究涉及的有效部位和有效單體有數十種， 研究較多、較深入的有人參皂甙、雷公藤多甙、三七皂甙、淫羊藿總黃酮、川芎嗪、天花粉 蛋白、牛膝多糖、地黃多糖等。有效部位、有效單體葯理作用的深入研究，有助於揭示中葯 治療疾病的機理。研究發現，人參皂甙對輻射引起的細胞膜損傷有防護作用〔20〕 ；人參二醇皂甙對心肌缺血再灌注犬心臟功能具有保護作用〔21〕；人參根總皂甙 具有明顯抗DNA損傷及抗突變效應〔22〕；人參皂甙Rb1對應激性性行為低下有保護 作用，其機制可能與抑制應激動物血漿皮質酮升高和提高睾酮水平有關〔23〕。雷 公藤多甙具有抗炎和免疫抑製作用，能顯著降低人工晶體表面、虹膜和睫狀體的炎症反應 〔24，25〕；對哮喘豚鼠肺組織的磷脂酶A2有明顯抑製作用 〔26〕。三七總皂甙顯著提高心肌細胞內肌漿網膜鈣泵活性，減少心肌細胞Ca2 ＋〔27〕，對犬心肌缺血再灌注損傷有保護作用〔28〕。天花粉蛋白能 明顯抑制小鼠黑色素瘤細胞S期DNA合成，通過抑制瘤細胞分裂增殖以及誘導瘤細胞凋亡而 抗腫瘤〔29〕。
4 復方葯理研究
復方是中醫用葯的主要形式，以中醫葯理論為指導，運用現代科學手段，對古方和現代經驗方進行多指標的系統葯理研究，可以在更深的層次揭示方劑的治療原理，有效地指導臨床用葯和中葯新產品研創。近年來，中葯復方在葯效學、葯代動力學和分子葯理研究等方面取得了較好的進展。
近年古方的葯理研究有數十首，其中桂枝湯、六味地黃湯、四君子湯、四物湯、大承氣湯、 補中益氣湯、當歸補血湯等研究較多。在古方研究中較多地探討了方劑的作用機制，給方劑 的傳統功效描述賦予現代葯理學內容。如桂枝湯可能通過影響興奮胃腸運動的胃泌素、胃動素、P物質以及抑制胃腸運動的生長抑素、 血管活性腸肽等在下丘腦和胃腸道中的含量來調節胃腸運動〔30～33〕；桂枝湯 對與呼吸道感染有關的10株病毒致細胞病變均有不同程度的抑製作用，其含 葯血清能抑制單純皰疹病毒等4株病毒對Hep-2細胞的增殖〔34〕。當歸補血湯 含葯血清隨給葯劑量增加可使造血祖細胞集落數明顯增多〔35〕。將六味地黃湯 方視為一個整體，以活性評價為導向，從六味地黃湯中定向追蹤分離 ，獲得了具有調節免疫功能的活性部位，該部位對TH及TC的功能有調節 作用〔36〕。這些研究都在一定程度上說明了方劑的作用原理。經驗方的葯理研究 開展得更為廣泛，其研究內容多結合新葯研究的有關要求，著重於葯效及安全性評價，不少 方劑已經或即將開發為新葯。
配伍是中醫用葯的特點和優勢所在，用葯理研究方法觀察方劑配伍與葯理效應變化之間的關系，探討方劑的配伍規律，仍然是復方葯理研究的重要內容。近年雖然還是以方劑葯味加減 、正交設計等方法為主，但在應用中也有明顯提高，採用一些新方法來更好地分析方劑的配伍問題〔37〕。關於復方配伍規律的基礎研究99年納入國家自然科學基金重點研究 項目，強調運用高新技術手段探討方劑的物質基礎，綜合分析配伍-化學成分變化-葯理效 應三者之間的聯系，闡明配伍內涵，成為新的探索方向。生脈散復方化學動態變化與葯效關 系研究表明，各葯配伍後葯效的變化可能與產生新物質有關〔38〕。以方劑的物質 基礎研究為核心，注重方劑配伍理論與現代葯理交互作用理論結合，物質基礎分析與葯理效 應觀察相結合，從組成方劑的單味葯、方劑的化學部分以及化學成分三個層次探討方劑的配 伍與物質基礎的變化的關系，在整體動物、器官組織、細胞亞細胞及分子生物學四個水平上 探討方劑的配伍、物質基礎的變化與葯理效應間的聯系，已成為復方配伍研究的基本思路 〔39〕。
5 葯代動力學研究
葯代動力學研究機體對葯物的處理規律，對於深入了解葯物的作用機理，指導臨床合理用葯 ，制定適宜的用葯方案等均有重要意義。中葯葯代動力學尤其是方劑的葯代動力學研究尚 無很好的方法和手段，目前主要採用體內葯物濃度法、葯物累積法(動物急性死亡率法)、葯理效應法、微生物指標法等，但因受到諸多因素的制約，尚待進一步完善。近年進行了黃 芩 甙、葛根素、苦參鹼、芸香甙、綠原酸、鉤藤鹼、馬錢子鹼、千金藤素等成分在動物體內的 葯代動力學研究，但單一有效成分的葯代參數顯然還難以反映含有該成分的單味中葯或復方 的葯代動力學過程。1991年黃熙等提出復方效應成分動力學假說，將中葯復方看作是一個整 體的葯物，研究方劑效應成分在體內的命運。認為所謂「復方效應成分」可以是母方中的原 形單體，也可以是母方中不含有的新成分，既可能是一個，也可能是多個化學成分(組成)； 「效應」既可以是活性效應，也可以是毒性效應〔40〕。有人提出綜合運用中葯有 效成分葯動學-葯效學同步分析統一模型、血清葯理學方法及高效毛細管電泳、二維及三維 高效液相色譜法、液質聯用或質質聯用技術等，進行中葯及復方的葯代動力學研究〔4 1〕。

6. 膜脂質過氧化進一步分解膜磷脂為什麼可以增加自由基生成

答
情況參與代謝氧數與氫結合水4－5％氧酶所催化形超氧陰離者形氧化氫都屬於自由基自由基種,氧自由基羥自由基 ,指些外層電軌道含配電原、離或自由基具高度氧化性極穩定,性極高,攻擊細胞膜、線粒體膜,與膜飽脂肪酸反應造脂質氧化增強脂質氧化產物（mda等)解更自由基引起自由基連鎖反應膜結構完整性受破壞引起肌肉、肝細胞、線粒體、DNA、RNA等廣泛損傷引起各種疾病,諸炎症、癌症 、擴張性肌病、性白內障、 哮喘等疾患 故自由基體疾病、衰死亡直接參與製造者 聽說抗氧化劑體健康著密切關系根據醫研究維命、礦物質及酵素具保護身體、防止自由基（free radicals）形功能者稱作抗氧化劑 我身體自產自由基清除者抑制自由基形外身體自製造酵素自由基除些酵素我由飲食攝取抗氧化劑例 ：維命A、C、E及硒協助體內清除自由基體系統自由基充斥自產自由基清除者應付健康亮起紅燈平應通飲食攝取抗氧化劑或服用些補充品協助身體破壞自由基號稱第六命元素殼寡糖完全凈化自由基使自由基失性達抵禦疾病延緩衰作用1991際術議美歐等許家科家致殼寡糖與蛋白質、脂肪、糖類、維素、礦物質並列譽體第六命要素殼寡糖能降血脂、降血壓、能抗癌現代文明病驚防治作用殼寡糖機體清道夫能排除體內自由基提高機體免疫力減肥美膚延緩衰 ============================ 健康壽殺手--氧自由基 我富含氧氣空氣離氧氣我命能存氧氣體害面候能殺死健康細胞甚至致於死直接殺死細胞並氧氣本身由產種叫氧自由基害物質體代謝產物造物膜系統損傷及細胞內氧化磷酸化障礙體疾病、衰死亡直接參與者體健康壽危害非 我知道細胞經呼吸獲取氧其98％與細胞器內葡萄糖脂肪相結合轉化能量滿足細胞需要另外2％氧則轉化氧自由基由於種物質非躍幾乎與各種物質發作用引起系列細胞具破壞性連鎖反應 般情況細胞遭種殺手殺害我體細胞存著量氧自由基剋星——抗氧化劑比脂溶性維素E、水溶性維素C及些酶類等等些抗氧化劑能夠與氧自由基發氧化原反應使氧自由基徹底清除某些情況氧自由基才致細胞甚至肌體於死 體遭受外傷、毒或者手術流血等重創候組織處於缺氧狀態能量代謝發障礙細胞色素氧化酶力氧原水便氧原奪電由害氧變具殺傷力性氧自由基氧自由基氧化殺傷主要破壞細胞膜結構功能破壞線粒體斷絕細胞能源毀壞溶酶體使細胞自溶同體非細胞結構危害作用使血管壁粘合劑遭受破壞使完整密封血管變千瘡百孔發漏血、滲液進導致水腫紫癜等等同供應臟血液冠狀脈突發痙攣候肌細胞由於缺氧發系列代謝改變肌細胞內抗氧化劑含量減少使氧自由基化反應由於缺氧相加快冠狀脈痙攣切除剎肌細胞突重新血液灌注隨量氧轉化氧自由基同由於抗氧化劑相足能夠清除氧自由基結使具高度殺傷性氧自由基嚴重損傷肌細胞膜量離由肌細胞內溢者擾亂控制臟搏電流信號引起室顫導致死亡 氧自由基使體衰呢近研究發現氧自由基化性質躍能夠攻擊細胞膜脂肪酸產氧化物些物質毒性強種物質侵害體內核酸、蛋白質等等引起系列細胞破壞作用體內氧自由基積累越衰進程越快我見臉壽斑由於脂類受氧自由基氧化解作用形丙二醛所致 氧自由基與衰關且許衰關疾病關系比脈硬化症、高血壓、骨關節炎、白內障及帕金森氏病等等 至於付氧自由基辦目前已經發現許氧自由基剋星氧自由清除劑或者抑制劑其作用機理直接提供電使氧自由基原增強抗氧化酶性迅速消滅自由基比超氧化物岐化酶氧化氫酶存於體組織清除氧自由基重要酶系統另外谷胱甘肽、別嘌呤醇維素C、E等都具清除或者抑制氧自由基作用 根據營養流行病研究發現經食用新鮮蔬菜與水延緩衰作用降低腫瘤特別消化道腫瘤發病率蔬菜清除氧自由基主要前身產物超氧負離超氧負離減少氧自由基相應減少由延緩衰營養家研究發現水、蔬菜數都具清除超氧負離蔬菜薺菜、青菜、蒜、黃芽菜強另外經吃富含維素A花菜、胡蘿卜、菠菜、甘薯富含維素C葡萄、桔、青椒含維素E檸檬、豌豆、未加工麥胚芽、葵花籽油含硒卷菜、洋蔥、燕麥片、海產品等等都幫助

7. 影紅細胞是什麼

影紅細胞一般指紅細胞影，它是一種研究生物膜的脂質過氧化，影泡的成分遠比脂質體復雜的方法。生物體在病理過戳例如化學中毒、大氣污染的毒害、輻射損傷、化學致癌、溶血性貧血、抽煙等和正常的生理過程，例如吞噬作用、衰老等，都會產生脂質過氧化。

脂質過氧化作用主要發生在生物膜的類脂中,因為它含有多量的不飽和脂肪酸。完整的細胞含有胞質、核、亞細胞器，成分復雜，影響生物膜脂質過氧化的因素很多。近年來，研究生物膜結構和功能，大多選用紅細胞影泡為材料。

(7)脂質過氧化研究方法擴展閱讀

紅細胞影存在有抗氧化劑系統，因而只有低水平的、自發的化學發光，即低水平的脂質過氧化，

H_2O_2能激烈地刺激影泡的脂質過氧化,破壞抗氧化劑體系，增強化學發光。受激的化學發光強度與影泡的濃度成正比。一萬拉特以上的γ射線照射，可以加速影泡的脂質過氧化，表現出化學發光明顯增強化。

化學發光的增強與照射劑量成正比，而與劑量率成反比。超氧化物歧化酶可明顯地抑制脂質過氧化，從而明顯地降低化學發光的強度。