抗體的分析方法

1. 免疫學的檢測方法

免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫。

2. 抗體的制備有哪些

（1）多克隆抗體的制備。

①免疫方法：對多克隆抗體，免疫方法一般有皮下或肌肉免疫法、皮內免疫法、淋巴結免疫法和混合法等。一般來說，皮下或肌肉免疫法產生的抗體比較多；皮內免疫法所需的抗原量少，在抗原寶貴時特別適用，但與之相對的，它產生的抗體量也不多。混合免疫法的優點是抗原用量小，產生抗體速度快。

②多克隆抗體的制備：將抗原免疫動物（常用的動物為兔、羊、狗等），分離出抗血清並純化抗體。多克隆抗體的均一性較差，其特異性相對較低，因此，多克隆抗體在農葯殘留速測技術中的應用受到一定的限制。但近年來有學者恰恰利用了多抗的交叉反應高的特點，通過制備出具有某類（或某幾種）農葯的「共性結構」的半抗原或者通過制備出含多個抗原決定簇的人工抗原來制備「寬譜特異性」抗體，進行農葯多殘留分析研究。

（2）單克隆抗體的制備。單克隆抗體制備技術最初是由K鰄ler和Milstein（1975）利用B淋巴細胞雜交瘤技術創立的。目前該技術已廣泛應用於疾病診斷及生物、醫學研究、環境和食品安全檢測（監測）等方面。單抗均一性高，只和抗原某一決定簇結合，有更高的特異性，而且，產生抗體的單克隆細胞可在體外傳代繁殖，不受動物免疫時間限制生產抗體。只要管理和培養技術正確，抗體就可無限量的產生。基本過程是動物免疫、細胞融合、克隆篩選、單克隆抗體性質鑒定、腹水誘發、收集和純化等。

（3）重組抗體的制備。近年來，隨著蛋白質技術及DNA重組技術的發展，人們通過對抗體產生的基因本質、基因重組抗體篩選技術和直接定位誘導基因操縱技術的研究，獲得用於指定空間位置並具有各種特異性、親和性，能忍受一定溫度、pH和有機溶劑的人工重組抗體。一般是將抗原免疫小鼠，一定時間後無菌條件下取出小鼠脾臟，提取脾細胞總RNA，以RNA逆轉錄合成的cDNA為模板，PCR擴增抗體，將抗體中的輕鏈、重鏈連接成ScFv（single-chainvariablefragment）。酶切經PCR擴增的ScFv片段，並與噬菌體載體連接，然後以常規方法轉化入大腸桿菌或其他生物體中。人工培養帶有噬菌體抗體的大腸桿菌，即得到重組抗體。該方法生產抗體速度快，可通過誘變改變抗體特性，使抗體的特異性更強，而且，利用這項技術獲得的噬菌體抗體庫，能同時識別多種農葯，可用於農葯多殘留免疫速測技術的研究。

3. 群體反應性抗體的檢測方法

PRA的常用方法：①ELISA-PRA：酶標板用純化的包括當地人種絕大部分的HLA特異性抗原預先包被，檢測時將待檢血清加入並孵育一定時間後，加入酶標記的抗人IgG或IgM的人單克隆抗體，再加入酶作用的底物顯色，根據顏色的深淺，可測定出HLA抗體的特異性和滴度。②CDC-PRA：在預先用淋巴細胞（含當地人種絕大部分的HLA特異性抗原）包被的微孔板中加入受者血清和補體，反應一定時間後用染料染色，計數死細胞（被染色的細胞）百分率，並由此判斷PRA陽性或陰性。

4. 酶聯免疫檢測的幾種方法及其原理

（1）酶聯免疫吸附試驗（enzyme
linked
immunosorbent
assay,ELISA）：是將抗原或抗體吸附在固相載體表面。使抗原抗體反應在固相載體表面進行。可用間接法、雙抗體夾心法或競爭法測定抗原或抗體。
（2）夾心法（sandwich
assay）:將已知的特異抗體包裝在固相載體（塑料板凹孔或紙片上），加入待檢標本，標本中的抗原即可與載體上的抗原結合，洗去未結合的材料後加入該抗原的酶標記抗體，洗去未結合的酶標抗體，加底物顯色，用酶免疫檢測儀測量顏色的光密度，可定量測定抗原。
間接法（indirecr
ELISA）常用於檢查特異抗體。先將已知特異抗原包被固相載體，加入待檢標本（可能含有相應抗體），再加入酶標抗Ig的抗全（即第二抗體），經加底物顯色後，根據顏色的光密度計算出標本中抗體的含量。
（3）BAS-ELISA：近年來對酶免設分析法的改進是使用生物素-親合素-過氧化物酶復合物作為指示劑，組成一新的生物放大系統進一步提高檢測的敏感度。可用來檢測多種抗原抗體系統如細菌、病毒、腫瘤細胞表面抗原等。一個親合素（avidin）分子可以結合4個生物素分子（biotin）。結合非常穩定。親合素和生物素都可與抗全、酶、熒光素等分子結合，而不影響後者的生物活性。一個抗體分子可偶聯90個生物素分子，通過生物素又可連接多個親合素。因此大提高檢測的敏感度。目前應用生物-酶標親合素系統（biotinavidin
system-
ELISA,BAS-ELISA），它是通過生物素標記抗體連接免疫反應系統，同時藉助生物素化酶或酶標親合素引入酶與底物反應系統。

5. 抗原抗體反應分為那四種類型各自有哪些常見的檢測方法

根據抗原和抗體性質的不同和反應條件的差別,抗原抗體反應表現為不同的形式.顆粒性抗原表現為凝集反應；可溶性抗原表現為沉澱反應；補體參與下細菌抗原表現為溶菌反應,紅細胞抗原表現為溶血反應；毒素抗原表現為中和反應等.

6. 抗體效價的檢測方法

多采免疫雙向擴散法
【基本原理】
*指抗原和抗體在同一凝膠內都擴散，彼此相遇後形成特異性的沉澱線。
-將抗原與抗體分別加入同一凝膠板中兩個相隔一定間距的小孔內，使兩者進行相互擴散，當抗原抗體濃度之比相適宜時，彼此相遇形成一白色弧狀沉澱線。
*優缺點：簡便，但敏感性較低，易出現假陰性結果。
免疫雙向擴散法的操作步驟
*將玻璃板用水洗凈後用75%乙醇沖洗，晾乾後放在水平台上備用。
*將1%agar 融化後，置56℃水浴。
*在玻璃板上鋪膠，約1.5mm 厚，凝固後打孔(直徑 3rnm)，孔間距10mm。
l 抗血清(抗體預先作系列倍比稀釋即ml 抗原樣品，周圍孔內每孔加5m*中心孔加5 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。
*凝膠板置濕盒內，室溫擴散24h。
*觀察結果。
凝聚胺法測定孕婦血清IgG抗-A（抗-B）效價的方法待檢血清與0.2 mol/L 2?硫基乙醇(2?Me)在試管內等量混合，放入37℃水浴1 h以破壞血清中的IgM抗體，吸取處理後的血清用生理鹽水倍比稀釋，稀釋度分別為2、4、8、16、32、64、128、256、512、1 024，然後每管加入相應的3%～5%紅細胞懸液，置37℃水浴30 min，觀察是否凝集，不凝集者用生理鹽水洗滌3次，然後加入低離子鹽水介質(LIM液)，混勻，滴入2滴凝聚胺，混勻後3 000 r/min離心30 s，扣搖肉眼可見明顯的凝集(無凝集者須重做)，再加入2滴重懸液，輕搖，觀察凝集是否消失，凝集1 min內不消失者表示受檢者血清中含有IgG型抗?A(抗?B)。
抗體效價檢測的其它方法
*環狀沉澱試驗，需較多的抗血清，現已很少用；
*對流免疫電泳，比瓊脂免疫雙擴散法敏感，較簡便、實用；
*酶聯免疫吸附試驗 (ELISA)。
通常抗體效價低於1：128是沒有問題的，有些孕婦高達1：256以上，而且抗體效價最好1個月查上一次，有時候會有所變化。

7. ELISA實驗檢測抗體的實驗步驟

操作步驟：
（1）將特異性抗原與固相載體聯結，形成固相抗原。洗滌除去未結合的抗原及雜質。
（2）加稀釋的受檢血清，保溫反應。血清中的特異抗體與固相抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌後，固相載體上只留下特異性抗體，血清中的其他成份在洗滌過程中被洗去。
（3）加酶標抗抗體,主要根據你的一抗來確定二抗用什麼。可用酶標抗人Ig以檢測總抗體，但一般多用酶標抗人IgG檢測IgG抗體。固相免疫復合物中的抗體與酶標抗體抗體結合，從而間接地標記上酶。洗滌後，固相載體上的酶量與標本中受檢抗體的量正相關。
（4）加底物顯色

間接法由於採用的酶標二抗是針對一類免疫球蛋白分子(如抗人IgG),因此該法只需要換固相抗原，即可用一種酶標二抗檢測各種與抗原相應的抗體，具有更廣泛的通用性。

本法主要用於對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。間接法的優點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗抗體建立檢測相應抗體的方法。

如果有其他問題，可以聯系我，呵呵！

8. 自身抗體的檢測方法有哪些

1、抗核抗體檢測

抗核抗體是一組將自身真核細胞的各種細胞核成分作為靶抗原的自身抗體的總稱，主要是IgG，其次是IgM和IgA，無器官和種屬特異性。ANA在大多數自身免疫性疾病中均可呈陽性，正常老年人也可有低滴度的ANA。ANA檢測在臨床自身免疫病診斷與鑒別診斷中是一個重要的篩查試驗。

2、類風濕因子

類風濕因子是變性lgG刺激機體產生的一種自身抗體，主要存在於類風濕關節炎患者的血清和關節液內。主要為lgM型，也有lgG、lgA、lgD和IgE型。

3、抗中性粒細胞胞漿抗體

抗中性粒細胞胞漿抗體是指與中性粒細胞及單核細胞胞漿成分發生反應的抗體。當中性粒細胞受抗原刺激後，胞漿中的α-顆粒釋放蛋白酶-3、髓過氧化物酶等物質，刺激機體而產生ANCA。

(8)抗體的分析方法擴展閱讀

自身抗體的產生原因：

人體的生長、發育和生存有完整的自身免疫耐受機制的維持，正常的免疫反應有保護性防禦作用，即對自身組織、成分不發生反應。—旦自身耐受的完整性遭到破壞，則機體視自身組織、成分為「異物」，而發生自身免疫反應，產生自身抗體。

正常人體血液中可以有低滴度的自身抗體，但不會發生疾病，但如果自身抗體的滴度超過某—水平，就可能對身體產生損傷，誘發疾病。自身免疫性疾病中有許多自身抗體，其中最重要的是抗核抗體。

9. ABO血型抗體有哪兩種它們的檢測方法分別是什麼

ABO血型抗體
一般分為二類；"天然"抗體和免疫抗體，都是通過免疫產生的。

一般天然抗體是IgM,免疫抗體是IgG

ABO血型抗體為天然的IgM，不能通過胎盤。而O型血的媽媽有可能由於食物或外來物質在體內產生了抗A或B的抗體，而這個抗體是IgG，可以通過胎盤。
ABO血型鑒定
ABO
blood
groups
取靜脈血少許，放入生理鹽水中混勻，配成2%紅細胞原液
【正常參考值】
根據紅細胞膜上的A、B凝集原和血清內抗A、抗B凝集素的不同，將紅細胞血型分為O、A、B、AB四型。
【異常結果分析】
用標准血清及標准紅細胞鑒定ABO血型結果
AB型
ABO血型交叉配合試驗
ABO
blood
groups
cross-matching
靜脈血3ml
【正常參考值】
同型交叉配血主側和次側均無凝集、無溶血。
【異常結果分析】
同型配血，主側和次側均無凝集、無溶血，表示無輸血禁忌，可以輸血。否則會導致嚴重或致命的輸血反應。在此系統中還有若干種亞型，在定血型和交叉配血時應予注意。
Rh血型鑒定
Rh
blood
group
取靜脈血少許，放入生理鹽水中混勻，配成2%紅細胞原液
【正常參考值】
我國人Rh陽性>99％、Rh陰性＜l％。
【異常結果分析】
Rh血型是一個比較復雜的血型系統，人類紅細胞表面的Rh抗原主要有D、C、E、c、e等，其中D抗原性最強。因此一般臨床上只做D抗原的鑒定。受檢紅細胞與抗D血清發生凝集者為陽性，反之為陰性。測定Rh血型對於溶血性輸血反應和新生兒Rh溶血症極有價值。
溶血性輸血反應：Rh陰性者接受Rh陽性者血液，則Rh陽性血液中的抗原將刺激Rh陰性人體產生Rh抗體。如果再次輸入Rh陽性血液，即可導致溶血性輸血反應。
新生兒溶血症：Rh陰性母親懷Rh陽性胎兒，第一胎時，母體受胎兒抗原致敏產生抗體，但抗體效價較低一般不易發生溶血；若懷第二胎時仍為Rh陽性胎兒，則抗體通過胎盤進入胎兒體內可導致新生兒溶血病發生。Rh陰性母親在孕前曾接受Rh陽性者血液，則第一胎時即可引起Rh陽性胎兒的新生兒溶血病。
ABO血型鑒定的原理
ABO血型鑒定的原理是根據紅細胞上有或無A抗原或／和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型四種。可利用紅細胞凝集試驗，通過正（血清試驗）反（細胞試驗）定型准確鑒定ABO血型。
所謂正定型是用已知抗A和抗B分型血清來測定紅細胞上有無相應的A抗原或／和B抗原，所謂反定型是用已知A細胞和B細胞來測定血清中有無相應的抗A或抗B。