1. 請問真菌的分子生物學鑒定一般方法步驟
給你個論文，希望對你有幫助
現代真菌鑒定分型方法
北京大學第一醫院(100434) 王端禮
真菌 的 鑒 定不僅是臨床的需要，在植物病理學、生物退化、生物技術和環境的研究都很重要。許多真菌已經鑒定到種，但是分類學家仍在忙於新種的描述和其分類的研究。有些菌種由於經濟學的關系或是病理學的重要性，有深人的研究，其他則需要現代手段來進行研究。
一 、 形 態學
用表 型 特 征來進行分類鑒定，是過去和現在都普遍應用的方法。致病真菌的鑒定，需要光鏡，現在更加上熒光顯微鏡和細胞化學，還有各種染色法，如子囊泡子染色法。真菌在宿主體內鑒定比較困難，如菌絲只能看到有無分隔，有無色素。需要培養來鑒定菌種。某些病例用種特異性抗體探針非常有用，但此種技術尚未在醫真菌學領域內作為常規技術使用。合適的培養基培養鑒定菌種，是常用的方法。
醫學 真 菌 學家常見到的是半知菌，要看抱子形態和抱子發生，看產抱細胞，即分生抱子梗。有兩種型，一是芽生抱子發生，在產抱細胞上有一小點產生分生抱子，另一是葉狀抱子發生，整個細胞是產抱細胞，分成一至數個細胞。基於超微結構觀察，有許多詞語，但未能普遍應用。有的真菌沒有分生抱子，但仍有一些特徵，如菌核(sclerotia)、厚壁抱子和一些特殊的菌絲結構，如皮膚癬菌。在少數情況下，一些機會真菌產生有性結構，有許多特點用於菌種鑒定，如子囊菌、擔子菌和結合菌。
電鏡 ， T EM是觀察菌的斷面，子囊菌酵母和擔子菌酵母的橫隔不同，SEM在實際應用有許多發現，如子囊菌的表面結構可以鑒定到種。
現 代 形 態學技術，如自動成像分析、電子顆粒體積、分數幾何學分析形態學的特點。
由於 表 型 各種詞語沒有一定的標准，有很大的主觀性，某些表型特徵也不穩定，受環境影響，有的不能在人工培養基上生長，有一些真菌尚未分類，分類概念有待近一步建立。
二 、分 子 生物學
表型 分 類 受限，生理生化技術在絲狀真菌鑒定方面，或是費時費事或是結果不準。分子生物學非常適用。有兩種技術，第一，PCR技術，可以分析少量真菌細胞，甚至單個真菌抱子。第二，選擇通用寡核昔酸對真菌種特異性引物，測定其核昔酸序列。分子生物學的研究目的由於生物多樣性有四個目的。I)系統發生研究。2)分類學的研究，在屬、種水平。3)鑒定應用，即決定明確的分類名稱。4)流行病學和群體的遺傳學研究。具體方法不再詳述。
三 、其 他 :
I，生 理 學 和生物化學
在純 培 養 上真菌生長比較快，可以使用生理、生化方法來鑒定菌種。如黑酵母的鑒定。不同的生長溫度也用於鑒定。有性和無性是一個輔助工具。在一定的培養基上，有對照，其生長速度也可用於鑒定，如青黴。AP[系統也用於絲狀真菌的鑒定。
2. 次 級 代謝產物
次級 代 謝 產物既不是為了生長需要，也不是介導基本代謝，常常發現它是一個與分了有關的混合物，有特殊的和極罕見的化學結構。常見的是固醇、菇、類鹼、香豆素等，某些是真菌毒素。將小量從培養皿切下來的標本，直接進行層析色譜法檢查，比傳統濃縮抽取提純法簡單易行。此法用於地衣的鑒定較好。很少用於真菌分類，由於對環境有一定影響，而且比較難，較少應用，但有人用於子囊菌的分類。
3. 泛 酉昆 系統
是一 種 初 級代謝產物，起重要作用。泛釀即輔酶Q，是呼吸系統電子傳播鏈的攜帶者。一些異戊二烯(isoprene)接觸醒核各有不同，對鑒定到屬或屬以下水平很有幫助。主要鑒定細菌和酵母，也用於黑酵母和絲狀真菌。
(Ya ma da Y ,e tal. In t.J.Genet 1989;5 6:309 Y ag uchiJ > e tal .M ycoscience 1996;3 7:55)0
4. 脂 肪 酸組成
此法 在 細 菌學方面是常規應用的。一是成分，二是相對濃度。極少用於真菌分類。使用熱解氣相色譜法、熱解塊狀光譜儀、氣相色譜儀、隔膜水相聚合物雙相系統等，主要應用這些方法。近來應用氣相色譜法合並多變數統計分析方法，成功地用於絲狀真菌，包括卵菌、擔子菌、結合菌、甚至只有菌絲的真菌。用於種間水平。應注意許多變化，如培養狀態和溫度是最主要的。
5. 細 胞 壁組成
子 囊 菌 和擔子菌含有幾丁質和葡萄糖，結合菌含有脫乙酞幾丁質(chitosen)和葡聚糖醛酸。不同的皮膚癬菌含有不同的糖分，醉母細胞壁或是缺乏或是含有少量其他多糖(如岩藻搪、乳糖、鼠李糖、木搪等)。
6. 蛋 白 質組成
用 電 泳 方法可以產生同工酶，可鑒定到屬或種。電泳、免疫學方法、蛋白質分析等可解決種間特性。同工酶分析是一個經濟和實用技術。等位基因酶(allozyme)通常用於系統發生的研究。