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適合的菌系的研究方法有哪些

發布時間:2025-07-02 16:15:24

1. 細菌學有哪些檢驗方法

直接塗片檢查:取混勻新鮮尿塗片,健康人的尿塗片無細菌。若每個油鏡視野下可見1條或以上的細菌,提示為菌尿。並可行革蘭氏染色,初步確定尿路感染細菌是陽性球菌或陰性桿菌。細菌培養:目前多採用定量接種環法,培養24h,計數菌落。陰性桿菌分裂快,菌落數>l〇5cfo/ml,提示菌尿,菌落數104〜105cfo/ml為可疑。陽性球菌分裂慢,菌落數>103cfU/ml為菌尿。結核菌檢查:尿結核菌檢查是確定有無泌尿系結核的重要方法,尿沉渣塗片抗酸染色較簡單,陽性率為50%〜70%;清晨第1次尿送檢則陽性率高。尿結核菌培養陽性率可達90%,但結核菌生長緩慢。使用改良羅氏培養基,一般需4〜8周始能報告結果。近年常用聚合酶鏈反應(PCR)方法,使含微量結核菌DNA擴增,40條結核菌即可有陽性結果,此法特異性強,2d可有結果,但時有假陽性或假陰性的情況。菌尿的輔助檢查亞硝酸鹽試驗:革蘭陰性桿菌如大腸、副大腸桿菌能將尿中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,而球菌和結核菌無還原硝酸鹽的能力,因此亞硝酸鹽試驗陽性,提示革蘭陰性桿菌的感染。氯化三苯四氮唑試驗(TTC試驗);大部分革蘭陰性活桿菌能將無色TTC還原為紅色的三苯甲替,而球菌及變形桿菌則呈陰性。故可用以初步判定是哪一類細菌感染。尿抗體包裹細菌(ACB):腎盂腎炎為腎實質感染,在細菌抗原作用下,機體可產生相應抗體,抗體將致病菌包裹,在熒光鏡下觀察用熒光素標記的抗人體蛋白抗體處理的尿細菌,若表面有熒光抗體包裹則大多屬腎盂腎炎,膀胱炎為黏膜淺表感染,故細菌表面無熒光抗體包裹。用ACB法有助於上、下尿路感染的定位診斷。但在前列腺炎患者,其ACB試驗亦呈陽性,應注意鑒別。其他:另外還有過氧化物酶試驗、葡萄糖氧化酶試驗、鱟試驗及尿氧壓測定均可幫助診斷尿路感染,但目前臨床上應用較少。

2. 怎樣去觀察細菌呢其觀察方法是什麼是誰發明了觀察細菌的方法

觀察細菌通常有以下方法。首先是顯微鏡觀察法,由於細菌個體微小,需藉助顯微鏡。一般要先製作細菌塗片,經過固定、染色等步驟,常用的染色方法有革蘭氏染色,能將細菌分為革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌,便於在顯微鏡下觀察其形態(如球狀、桿狀、螺旋狀等)和結構。其次是培養觀察法,將細菌接種在合適的培養基上,在適宜的溫度、濕度等條件下培養,觀察細菌的菌落特徵,包括菌落的大小、形狀、顏色、邊緣、質地等,以此初步判斷細菌的種類。

觀察細菌方法的發明者是羅伯特·科赫。他是德國著名的醫生和細菌學家。19世紀,科赫通過不懈研究,發明了固體培養基劃線分離純種法等一系列細菌研究方法,還成功分離出炭疽芽孢桿菌、結核分枝桿菌等多種病原菌。他的貢獻不僅在於發明了觀察細菌的方法,更推動了整個微生物學領域的發展,為現代醫學和傳染病防治奠定了堅實基礎 。

3. 病原微生物中細菌常見檢測方法有哪些

1、快速測試片技術法

快速測試片是指以紙片、紙膜、膠片等作為培養基載體,將特定的培養基和顯色物質附著在上面,通過微生物在上面的生長、顯色來測定食品中微生物的方法。

細菌總數檢測紙片的研製始於 20 世紀 80 年代,其主要優點是簡便、實用、經濟、操作性強。近年來以濾紙和美國某公司的 Petrifilm 為載體的測試片已開始被廣泛應用。

2、生物電化學方法

生物電化學方法是指通過電極測定微生物產生或消耗的電荷,從而提供分析信號的方法。微生物在滋生代謝過程中,培養基的電化學性質如電流、電位、電阻和電導等會發生變化,所以可以通過檢測分析這些電化學參量的變化來實現對微生物的快速測定。

常見的有:阻抗分析法、電位分析法、電流分析法等。生物電化學方法具有測量快速、直觀、操作簡單、測量設備成本低和信號的可控性等特點。

3、微菌落技術

微菌落是指細菌生長繁殖早期在固相載體上所形成的只能藉助於顯微鏡觀察的微小菌落。微菌落技術具有快速、經濟、實用的特點,其研究始於 20 世紀50年代,定量測定技術從 20 世紀 70 年代開始,國外已有報道將該法應用於水、食品中細菌總數的快速檢測。

4、氣相色譜法

氣相色譜應用到微生物的檢測中,主要是依據不同微生物的化學組成或其產生的代謝產物各異,利用上述色譜檢測可直接分析各種體液中的細菌代謝產物、細胞中的脂肪酸、蛋白質、氨基酸、多肽、多糖等,以確定病原微生物的特異性化學標志成分,協助病原診斷和檢測。

5、高效液相色譜法

利用高效液相色譜檢測可分析各種體液中的細菌代謝產物、病原微生物等,以確定病原微生物的特異性化學標志成分,協助病原診斷和檢測。

4. 真菌鑒定的種類有幾種

現代真菌鑒定分型方法

北京大學第一醫院(100434) 王端禮

真菌 的 鑒 定不僅是臨床的需要,在植物病理學、生物退化、生物技術和環境的研究都很重要。許多真菌已經鑒定到種,但是分類學家仍在忙於新種的描述和其分類的研究。有些菌種由於經濟學的關系或是病理學的重要性,有深人的研究,其他則需要現代手段來進行研究。
一 、 形 態學
用表 型 特 征來進行分類鑒定,是過去和現在都普遍應用的方法。致病真菌的鑒定,需要光鏡,現在更加上熒光顯微鏡和細胞化學,還有各種染色法,如子囊泡子染色法。真菌在宿主體內鑒定比較困難,如菌絲只能看到有無分隔,有無色素。需要培養來鑒定菌種。某些病例用種特異性抗體探針非常有用,但此種技術尚未在醫真菌學領域內作為常規技術使用。合適的培養基培養鑒定菌種,是常用的方法。
醫學 真 菌 學家常見到的是半知菌,要看抱子形態和抱子發生,看產抱細胞,即分生抱子梗。有兩種型,一是芽生抱子發生,在產抱細胞上有一小點產生分生抱子,另一是葉狀抱子發生,整個細胞是產抱細胞,分成一至數個細胞。基於超微結構觀察,有許多詞語,但未能普遍應用。有的真菌沒有分生抱子,但仍有一些特徵,如菌核(sclerotia)、厚壁抱子和一些特殊的菌絲結構,如皮膚癬菌。在少數情況下,一些機會真菌產生有性結構,有許多特點用於菌種鑒定,如子囊菌、擔子菌和結合菌。
電鏡 , T EM是觀察菌的斷面,子囊菌酵母和擔子菌酵母的橫隔不同,SEM在實際應用有許多發現,如子囊菌的表面結構可以鑒定到種。
現 代 形 態學技術,如自動成像分析、電子顆粒體積、分數幾何學分析形態學的特點。
由於 表 型 各種詞語沒有一定的標准,有很大的主觀性,某些表型特徵也不穩定,受環境影響,有的不能在人工培養基上生長,有一些真菌尚未分類,分類概念有待近一步建立。
二 、分 子 生物學
表型 分 類 受限,生理生化技術在絲狀真菌鑒定方面,或是費時費事或是結果不準。分子生物學非常適用。有兩種技術,第一,PCR技術,可以分析少量真菌細胞,甚至單個真菌抱子。第二,選擇通用寡核昔酸對真菌種特異性引物,測定其核昔酸序列。分子生物學的研究目的由於生物多樣性有四個目的。I)系統發生研究。2)分類學的研究,在屬、種水平。3)鑒定應用,即決定明確的分類名稱。4)流行病學和群體的遺傳學研究。具體方法不再詳述。
三 、其 他 :
I,生 理 學 和生物化學
在純 培 養 上真菌生長比較快,可以使用生理、生化方法來鑒定菌種。如黑酵母的鑒定。不同的生長溫度也用於鑒定。有性和無性是一個輔助工具。在一定的培養基上,有對照,其生長速度也可用於鑒定,如青黴。AP[系統也用於絲狀真菌的鑒定。
2. 次 級 代謝產物
次級 代 謝 產物既不是為了生長需要,也不是介導基本代謝,常常發現它是一個與分了有關的混合物,有特殊的和極罕見的化學結構。常見的是固醇、菇、類鹼、香豆素等,某些是真菌毒素。將小量從培養皿切下來的標本,直接進行層析色譜法檢查,比傳統濃縮抽取提純法簡單易行。此法用於地衣的鑒定較好。很少用於真菌分類,由於對環境有一定影響,而且比較難,較少應用,但有人用於子囊菌的分類。
3. 泛 酉昆 系統
是一 種 初 級代謝產物,起重要作用。泛釀即輔酶Q,是呼吸系統電子傳播鏈的攜帶者。一些異戊二烯(isoprene)接觸醒核各有不同,對鑒定到屬或屬以下水平很有幫助。主要鑒定細菌和酵母,也用於黑酵母和絲狀真菌。
(Ya ma da Y ,e tal. In t.J.Genet 1989;5 6:309 Y ag uchiJ > e tal .M ycoscience 1996;3 7:55)0
4. 脂 肪 酸組成
此法 在 細 菌學方面是常規應用的。一是成分,二是相對濃度。極少用於真菌分類。使用熱解氣相色譜法、熱解塊狀光譜儀、氣相色譜儀、隔膜水相聚合物雙相系統等,主要應用這些方法。近來應用氣相色譜法合並多變數統計分析方法,成功地用於絲狀真菌,包括卵菌、擔子菌、結合菌、甚至只有菌絲的真菌。用於種間水平。應注意許多變化,如培養狀態和溫度是最主要的。
5. 細 胞 壁組成
子 囊 菌 和擔子菌含有幾丁質和葡萄糖,結合菌含有脫乙酞幾丁質(chitosen)和葡聚糖醛酸。不同的皮膚癬菌含有不同的糖分,醉母細胞壁或是缺乏或是含有少量其他多糖(如岩藻搪、乳糖、鼠李糖、木搪等)。
6. 蛋 白 質組成
用 電 泳 方法可以產生同工酶,可鑒定到屬或種。電泳、免疫學方法、蛋白質分析等可解決種間特性。同工酶分析是一個經濟和實用技術。等位基因酶(allozyme)通常用於系統發生的研究。

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