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用什麼方法提dna好

發布時間:2025-01-12 13:08:48

1. DNA怎麼提取

dna提取的幾種方法
(1).濃鹽法
利用rnp和dnp在電解溶液中溶解度不同,將二者分離,常用的方法是用1m

納提取化鈉抽提,得到的dnp粘液與含有少量辛醇的
氯仿一起搖盪,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間,而dna位於上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將dna
鈉鹽沉澱出來.
也可用0.15
mnacl液反復洗滌細胞破碎液除去rnp,再以1mnacl提取脫氧核糖蛋白,再按氯仿---異醇法除去蛋白.
兩種方法比較,後種方法使核酸降解可能少一些.
以稀鹽酸溶液提取dna
時,加入適量去污劑,如sds可有助於蛋白質與dna
的分離。在提取過程中為抑制組織中的dnase對dna
的降解作用,在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15mnacl,0.015m檸檬鈉,並稱ssc溶液,提取dna.
(2).陰離子去污劑法:
用sds或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質變性,可以直接從生物材料中提取dna
.由於細胞中dna與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合,因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去污劑提取dna.
(3).苯酚抽提法:
苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了dnase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由於蛋白與dna
聯結鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶於酚相,而dna溶於水相。離心分層後取出水層,多次重復操作,再合並含dna
的水相,利用核酸不溶於醇的性質,用乙醇沉澱dna
。此時dna是十分粘稠的物質,可用玻璃漫漫繞成一團,取出。此法的特點是使提取的dna保持天然狀態
.

4).水抽提法:
利用核酸溶解於水的性質,將組織細胞破碎後,用低鹽溶液除去rna,然後將沉澱溶於水中,使dna充分溶解於水中,離心後收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6m.加入2倍體積95%乙醇,立即用攪拌法攪出.然後分別用66%
٠80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,最後在空氣中乾燥,既得dna樣品.此法提取的dna中蛋白質含量較高,故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良,在提取過程中加入sds.

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