研究細胞常用技術方法

⑴ 細胞工程有哪些技術

【植物細胞工程】
常用技術手段：植物組織培養，植物體細胞雜交。
理論基礎：植物細胞的全能性。
【動物細胞工程】
常用的技術手段：動物細胞培養、動物細胞融合、單克隆抗體、胚胎移植、核移植等

⑵ 細胞生物學的研究方法

細胞生物學廣泛地利用相鄰學科的成就，在技術方法上是博採眾長，凡是能夠解決問題的都會被使用。例如用分子生物學的方法研究基因的結構，用生物化學、分子生物學的方法研究染色體上的各種非組蛋白和它們對基因活動的調節和控制或者利用免疫學的方法研究細胞骨架的各種蛋白（微管蛋白、微絲蛋白、各種中等纖維蛋白）在細胞中的分布以及在生命活動中的變化。起源於分子遺傳學的重組DNA技術和起源於免疫學的產生單克隆抗體的雜交瘤技術，也成了細胞生物學的有力工具。顯然，一種方法所解決的問題不一定屬於原來建立這一方法的學科。例如用分子生物學的方法解決了核小體的結構，嚴格地說這應是形態學的范疇。這樣的例子並不少見，在這里學科的界限也被抹掉了。也許可以說細胞核移植、微量注射和細胞融合是細胞生物學自身發展起來的方法，但是用這些方法進行的實驗往往也需要其他方法配合來做進一步分析。 細胞生物學與其說是一個學科，倒不如說它是一個領域。這可以從兩個方面來理解：一是它的核心問題的性質──把發育與遺傳在細胞水平結合起來，這就不局限於一個學科的范圍。二是它和許多學科都有交叉，甚至界限難分。例如，就研究材料而言，單細胞的原生動物既是最簡單的動物，也是最復雜的細胞，因為它們集許多功能於一身；尤其是其中的纖毛蟲，不僅對於研究某些問題，例如纖毛和鞭毛的運動，特別有利，關於發育和遺傳的研究也積累了大量有價值的資料。但是這類研究也可以列入原生動物學的范疇。其次，就研究的問題而言，免疫性是細胞的重要功能之一，細胞免疫應屬細胞生物學的范疇，但這也是免疫學的基本問題。
由於廣泛的學科交叉，細胞生物學雖然范圍廣闊，卻不能像有些學科那樣再劃分一些分支學科──如象細胞學那樣，根據從哪個角度研究細胞而分為細胞形態學、細胞化學等。如果要把它的內容再適當地劃分，可以首先分為兩個方面：一是研究細胞的各種組分的結構和功能（按具體的研究對象），這應是進一步研究的基礎，把它們羅列出來，例如基因組和基因表達、染色質和染色體、各種細胞器、細胞的表面膜和膜系、細胞骨架、細胞外間質等等。其次是根據研究細胞的哪些生命活動劃分，例如細胞分裂、生長、運動、興奮性、分化、衰老與病變等，研究細胞在這些過程中的變化，產生這些過程的機制等。
當然這僅是人為地劃分，這些方面都不是各自孤立的，而是相互有關連的。從細胞的各個組分講，例如表面膜與細胞外間質有密切關系，表面膜又不是簡單地覆蓋著細胞質的一層膜，而是通過一些細微結構──已經知道其中之一是肌動蛋白分子，這又聯繫到細胞骨架了──與細胞質密切相連。這樣，表面膜才能和細胞內部息息相關。另一方面，從研究的問題出發，研究分裂、分化等生命現象，離不開結構的基礎。例如研究細胞分裂就涉及到染色質怎樣包紮成染色體，染色體的分裂和運動，細胞骨架的變化包括微管蛋白的聚合和解聚，與表面膜有關的分裂溝的形成，還有細胞分裂的調節與控制。再如研究細胞分化除去要了解某種細胞在分化過程中細胞器的變化、它們所特有的結構蛋白質的變化，主要地還要了解導致分化的物質基礎以及這些物質怎樣作用於基因調控的水平，導致有關的基因被激活。可見研究的重點盡管可以人為地劃分，但一定要把細胞作為一個整體看待，一定要把生命過程和細胞組分的結構和功能聯系起來。 既然細胞生物學的主要任務是把發育和遺傳聯系起來，細胞分化這個問題的重要性就不言而喻。因為就整個有機體而言，遺傳特點不僅顯示在長成的個體，而是在整個生命過程不斷地顯示出來。在細胞水平，細胞的分化也就是顯示遺傳特徵的過程，例如鳥類、爬行類的水晶體，其中所含的晶體蛋白是α、β、δ三種，不同於哺乳類，後者含有α、β、γ三種。在鳥類的晶體分化中首先出現大量的δ晶體蛋白，但是在哺乳類晶體分化中卻找不到這種蛋白。可見某種細胞的分化特徵的出現，也就是它們的遺傳特徵的出現。但是這僅是在細胞水平就一種生化性狀（特異的蛋白質）在一種特化細胞中的出現而言，情況當然還比較簡單，如果涉及到一個由多細胞組成的形態學性狀，情況會復雜得多，但是性狀發生的過程仍然是遺傳表現的過程。
像晶體細胞分化這樣的例子，細胞生物學的術語稱之為終末分化，也就是走向成熟的分化，其分化的產物就是這種細胞的終末產物。由於取材方便，產物比較單一易於分析等原因，細胞分化的研究中關於終末分化的研究占很大的比重，研究得比較多的是紅細胞、肌細胞、胰臟細胞、晶體細胞、黑色素細胞、軟骨細胞等。
一個經常被引用的例子是紅細胞中血紅素的轉換。人類胚胎早期的紅細胞中首先出現胚期血紅素，後來逐漸被胎兒期血紅素所代替，胎兒三個月之後，後者又被成體型血紅素所代替。關於這些血紅素已經有很多研究。例如它們各自由那些肽鏈組成，這些肽鏈在個體發育中交互出現的情況，它們各自的氨基酸組成和排列順序，各個肽鏈的基因位點，以至基因的結構都已比較清楚，工作可以說是相當深入了。
但是，追根到底有些問題依然沒有得到明確的解答，甚至沒有解答──這也適用於關於其他細胞的終末分化的研究。例如，為什麼胚期血紅素會在紅細胞而不在其他細胞中出現？為什麼會發生血紅素的轉換？關於前一問題，有人曾分別地從雞的輸卵管細胞（不產生血紅素）和紅細胞（產生血紅素）提取染色質，用酶來切割，觀察到兩種來源的染色質對酶的抵抗力不同。來自紅細胞的易於受到酶的攻擊，推測這可能由於核小體的構型不同。紅細胞中含有珠蛋白基因段落的核小體構型較鬆弛，因而易於受到影響；構型較鬆弛也就為RNA聚合酶在上面轉錄產生信使RNA提供了條件。但是如果追問下去，為什麼單單在紅細胞里核小體的構型比較鬆弛？RNA聚合酶怎樣識別出這樣的段落？這些問題還需進一步研究。其次，關於胚期血紅素向胎兒期血紅素的轉換。用兩種熒光染料標記兩種免疫抗體，觀察到在同一紅細胞中有兩種血紅素的存在，說明轉換不是由於出現不同的細胞，而是由於同一細胞相繼地產生了不同的血紅素。是什麼原因使得血細胞停止生產原有的而產生出新的血紅素？也許可以說是發育的「程序」，但還要回答發育程序得以實現的物質基礎是什麼。所有這些問題的解答，將使我們對基因選擇性表達的認識有極大的邁進。 實現了終末分化的細胞，已經失去了轉變為其他細胞類型的潛能，只能向一個方面分化。例如紅細胞，雖然發生血紅素的轉換，但不能轉變為其他類型的正常細胞，與胚胎細胞相比，它們的情況要簡單些，因為胚胎細胞在尚未獲得決定的時候是具有廣泛潛能的。拿中胚層細胞來說，它們既可以分化為肌細胞，也可以分化為前腎細胞、血細胞、間質細胞等。已經初步知道，外界因素可以影響中胚層細胞向肌細胞或紅細胞的方向分化，但是這因素是什麼，怎樣作用，都一無所知。在這里，首先要使中胚層細胞向某一方向分化，然後那一方向（例如紅細胞）所特有的一套終末分化的步驟才得以進行下去。形象化地說，中胚層細胞中似乎存在著向不同方向分化的開關，打開某一個開關（例如紅細胞的），才能進行那一方向的分化，這當然比終末分化更復雜些，對此還一無所知。

⑶ 要研究細胞內各種細胞器的結構和功能，需要將這些細胞器分離出來。常用的方法是什麼

答案是差速離心法
研究細胞內各種細胞器的組成成分和功能,需要將這些細胞器分離出來,常用的方法是差速離心法.差速離心法是將細胞膜破壞後,形成由各種細胞器和細胞中其他物質組成的勻漿;將勻漿放入離心管,用高速離心機在不同的轉速下進行離心,利用不同的離心速度所產生的不同離心力,就能將各種細胞器分離開。
ps：密度離心法應用於dna半保留復制驗證實驗中輕鏈帶(離心管上部),雜合鏈帶(位置居中)和重鏈帶(最靠近離心管底部)在氯化銫溶液中的位置定位.
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⑷ 細胞生物學研究的常用技術有哪些····

1.顯微技術：包括顯微觀察，顯微操作。
2細胞組分分析技術：離心分離技術，生物大分子定位技術，定量細胞化學分析技術。
3.細胞工程：細胞培養

⑸ 研究活細胞或組織最好的方法是

1(常用光鏡標本制備技術

切片標本的制備。這是最常用的方法。應用光學顯微鏡觀察機體各部的微細結構時，首先應把所有要觀察的材料製成薄片，最基本的就是切片方法，其中石蠟切片更為常用。其制備程序大致如下:

(1)取材與固定。將所要觀察的人體或動物的新鮮材料切成適當的小塊，立即浸入固定液(如甲醛溶液等)中進行固定，防止離體後結構發生變化，使其盡可能保持活體時的結構狀態。

(2)脫水與包埋。為了使石蠟能浸入組織內，把固定好的材料用乙醇等脫水，經二甲苯透明後，再浸入加溫溶化的石蠟中浸透包埋使組織塊變硬。

(3)切片與染色。將包埋的組織蠟塊，用切片機切成5-10μm左右的薄片，貼在載玻片上，脫蠟後進行染色。最常用的染色法是蘇木精和伊紅染色，簡稱HE染色。

(4)封固。在切片上滴加中性樹膠，用蓋玻片進行封固，保存備用。

在製作較硬組織(如骨組織等)或較大組織器官(如眼球)等切片，可用火棉膠代替石蠟進行浸透包埋，再進行染色。為了較好地保存細胞內酶的活性 ，可選用冰凍切片，將組織在低溫條件下快速凍結，直接切片，進行染色。

2(塗片、鋪片、磨片標本的制備

血液等液體材料，可直接在玻片上塗片，乾燥後再進行固定和染色。疏鬆結締組織和腸系膜等薄層組織，可在玻片撕開展平，製成鋪片，待乾燥後進行固定和染色。骨和牙等堅硬組織除用酸(稀硝酸等)脫鈣後再按常規製成切片外，還可直接研磨成薄的磨片進行染色觀察。

3(組織化學和免疫組織化學方法

組織化學與細胞化學是應用物理、化學和免疫學方法，對組織、細胞內某些化學成分的定性、定位和定量進行研究，從而探討與其相關的機能活動。

(1)組織化學。其原理是在組織切片上或被取材料上，加某種試劑，使它與組織或細胞內某些物質起化學反應，形成最終反應產物。光鏡組織化學要求其最終產物是有色的沉著物;電鏡細胞化學要求其最終產物是重金屬沉著物。觀察其沉著物的顏色、深淺或電子密度，可對某種物質進行定性、定位和定量。

(2)免疫細胞化學。是將免疫學基本理論與細胞化學技術相結合而建立起來的新技術。主要是應用抗原與抗體特異性結合的特點，檢測細胞內某些肽類和蛋白質等大分子物質的分布。肽類和蛋白質種類繁多，均具抗原性。提取動物的某些肽類和蛋白質，作為抗原注入另一種動物體內，則產生與抗原相應的特異性抗體(免疫球蛋白)，從血清中制備該抗體。如使抗體與熒光素結合，則形成熒游標記抗體。常用的熒光素為異硫氰酸熒光素(FITC)，當用該熒光素標記抗體處理組織切片時，則與組織內相應抗原發生特異結合，在熒光顯微鏡下呈黃綠色熒光部分，即為抗原抗體復合物，稱此為熒游標記抗體法。如抗體與辣根過氧化物酶(HRP)等酶標記，與抗原結合後呈棕紅色，可在光鏡或電鏡下觀察，此即酶標抗體法。

4(組織培養

組織培養或細胞培養是在體外研究活組織或活細胞的形態結構和生理功能動態變化的一種很有價值的研究手段，已廣泛應用於生物醫學的各個領域。組織培養是在無菌條件下進行，從機體取得的活組織或活細胞，或者長期傳代培養的細胞株，放入盛有營養液的培養基

⑹ 細胞生物學的研究方法有哪些

生物學的一些基本研究方法——觀察描述的方法、比較的方法和實驗的方法等是在生物學發展進程中逐步形成的。在生物學的發展史上，這些方法依次興起，成為一定時期的主要研究手段。這些方法綜合而成現代生物學研究方法體系和研究框架。18世紀下半葉

⑺ 細胞工程的研究對象及方法有哪些

細胞工程是生物工程的一個重要方面。總的來說，它是應用細胞生物學和分子生物學的理論和方法，按照人們的設計藍圖，進行在細胞水平上的遺傳操作及進行大規模的細胞和組織培養。當前細胞工程所涉及的主要技術領域有細胞培養、細胞融合、細胞拆合、染色體操作及基因轉移等方面。通過細胞工程可以生產有用的生物產品或培養有價值的植株，並可以產生新的物種或品系。
細胞工程(Cell engineering)：

是指應用現代細胞生物學、發育生物學、遺傳學和分子生物學的理論與方法，按照人們的需要和設計，在細胞水平上的遺傳操作，重組細胞結構和內含物，以改變生物的結構和功能，即通過細胞融合、核質移植、染色體或基因移植以及組織和細胞培養等方法，快速繁殖和培養出人們所需要的新物種的生物工程技術。

細胞工程與基因工程一起代表著生物技術最新的發展前沿，伴隨著試管植物、試管動物、轉基因生物反應器等相繼問世，細胞工程在生命科學、農業、醫葯、食品、環境保護等領域發揮著越來越重要的作用。

21世紀合成生物學的發展，採用計算機輔助設計、DNA或基因合成技術，人工設計細胞的信號傳導與基因表達調控網路，乃至整個基因組與細胞的人工設計與合成，從而刷新了基因工程與細胞工程技術，並將帶來生物計算機、細胞制葯廠、生物煉制石油等技術與產業革命。

⑻ 細胞生物學研究的主要技術與手段

a.觀察細胞顯微結構的光學顯微鏡技術； b.探索細胞超微結構的電子顯微鏡技術； c.研究蛋白質和核酸等生物大分子結構的X射線衍射技術； d.用於分離細胞內不同大小細胞器的離心技術； e.用於培養具有新性狀細胞的細胞融合和雜交技術； f.使機體細胞能在體外長期生長繁殖的細胞培養技術； g.能對不同類型細胞進行分類並測其體積、DNA含量等數據的流式細胞術； h.利用放射性同位素對細胞中的DNA、RNA或蛋白質進行定位的放射自顯影技術； i.用於探測基因組中英雄模範種基因是否存在，是否表達以及拷貝數多少的核酸分子雜交技術； j.能將細胞中的特定蛋白質或梳酸分子進行分離純化的層析技術和電泳技術； k.對細胞化學定性、定量分析的顯微分光光度術，顯微熒光光度術，核磁共振技術。