1. 男物耗擾什麼意思
耗擾,是騷擾的意思,源自 後漢書
2. 生化分析儀的儀器分類
自動生化分析儀有多種分類方法,最常用的是按其反應裝置的結構進行分類。按此法可將自動生化分析儀分為流動式和分立式兩大類。
流動式自動生化分析儀是指測定項目相同的各待測樣品與試劑混合後的化學反應在同一管道流動的過程中完成。這是第一代自動生化分析儀。過去說得多少通道的生化分析儀指的就是這一類。存在較嚴重的交叉污染,結果不太准確,現已淘汰。
分立式自動生化分析儀與流動式的主要差別是每個待測樣品與試劑混合間的化學反應都是分別在各自的反應皿中完成的,不易出現交叉污染,結果可靠。 空氣分段系統
這種分析儀的特點是通過比例定量泵擠壓彈性樣品管、空氣管和試劑管(通稱「泵管」),將樣品依次連續地吸入並沿樣品管輸送,另一方面由空氣管吸入的氣泡將由同樣原理吸入並在試劑管道中連續流動的試劑分成均勻的節段,樣品流和試劑流在連續向前流動的過程中相遇、混合、透吸(必要時)、保溫、反應及被測定。整個分析過程是液流在管道中連續流動的過程中完成的。
非分段系統
非分段系統是靠試劑空白或緩沖液來間隔每個樣品的反應液,這樣,在管道中連續流動的液體不被分段。非分段系統可再分為流動注入系統和間隙系統。
1、流動注入系統:該系統的組成與空氣分段系統相似,但某些結構和工作原理有所不同,空氣分段系統是利用氣泡分段來防止管道中各反應液在流動過程中的交叉污染,而流動注入系統則是通過將樣品依次注入連續流動的試劑流管道中來達到防止交叉污染的目的的。
2、間隙系統:該系統的結構、組成和工作原理與流動注入系統相似,但其特點是每一次進樣都必須在前一樣品的分析過程結束後(包括管道的清洗)才能開始,而不能連續地依次進樣,每次進樣間有一時間間隙,故有人稱為不連續流動式分析儀。 分立式為第二代自動生化分析儀,它與流動式的主要差別是每個待測樣品與試劑混合間的化學反應都是分別在各自的反應皿中完成的。
稱為第三代自動生化分析儀的離心式自動生化分析儀,也應屬於分立式。因為在離心式分析儀中,每個待測樣品都是在離心力作用下,在各自的反應槽內與試劑混合,並完成化學反應,繼而被測定的。離心式分析儀屬於「同步分析」,在離心力的作用下,各待測樣品幾乎同時與試劑混合、反應並被測定後打出報告;而其它分析儀是「順序分析」,即各待測樣品依次與試劑混合、反應先後被測定。
袋式自動生化分析儀也應屬於分立式,它是用試劑袋代替反應管和比色皿,測定時每個待測樣品在各自的試劑袋內進行反應並被檢測。還有一種稱為「乾式自動生化分析儀」也屬於分立式。它的主要特點是採用固相化學技術,即將試劑固相於膠片或濾紙小片等載體上。測定時使一定量的待測樣品分布於一張試紙片上,一定時間後用反射光度計測定。
分立式自動生化分析儀,是目前各實驗室普遍使用的自動生化分析儀,一般都可以任意選擇測定項目,故稱為任選式自動生化分析儀。下面將重點介紹任選式自動生化分析儀。 加樣系統
1、樣品轉盤:可放置小型樣品杯數十隻。有的分析儀可直接用盛樣本的試管,有的還附有條形碼閱讀裝置,能識別樣本試管上的條形碼信息,不需給樣本編號,也不必輸入病人資料即可列印出該病人的化驗報告。
2、試劑室(倉):不同的分析儀試劑室可容納的試劑盒數量不同,一般可容納20多種試劑。有的試劑室帶有冷藏裝置,帶有條形碼識別裝置的試劑室試劑可以任意放置試劑盒位置。
3、取樣裝置:有的分析儀取樣本和取試劑公用同一采樣針,由內部的分流閥控製取樣本和取試劑;有的儀器有兩套取樣裝置,分別取樣本和取試劑。采樣針前端有液面感測器防止空吸或采樣針外壁液體掛淋,采樣臂中有預溫裝置。如果採用多試劑分析方法,將佔用試劑室中試劑盒位置,會減少測定項目。
樣本系統
1、樣本庫:有65個樣本位,可放置多種原始采血管、試管及微量樣本杯。並有兩個樣本盤,可任意交換使用。
2、樣本量:2.5ul~40ul,項目編制時確定,儀器自動取樣,0.05ul遞增。
3、樣本針:具有液面自動檢測和防碰撞安全保護功能。
4、樣本針清洗:除專用的清洗液對樣本針的內外表面沖洗外,還用溫的蒸餾水沖洗樣品針的外表面,熱風吹乾。
操作系統
1、軟體操作系統:Windows XP
2、數據處理:儲存,輸出各種檢測數據和圖表(包括項目的計算結果)沒有時間和儲存量的限制。
比色系統
1、光源:大多數分析儀使用鹵素鎢絲燈,工作波長325~800nm。有的分析儀使用氙燈,工作波長285~750nm。
2、比色杯:有分立式比色杯、分立式轉盤式比色杯、離心式比色盤、流動池。乾式生化儀不需要比色杯,袋式生化儀由試劑袋經擠壓自動形成比色杯。比色杯光徑6-7mm,少數為10mm。
比色杯中的反應液需要恆溫,有37℃、30℃、25℃三檔可選擇,有的固定為37℃。多數用吹入恆溫空氣的方式,也有用恆溫水浴或半導體溫控裝置的。
為了保證比色杯中反應液有±0.1℃的精確度,分析儀的環境溫度必需保持18~30℃,室溫波動不宜超過2℃。
3、單色器:(1)干涉濾光片(2)光柵
4、檢測器:(1)光電倍增管,已很少用。(2)列陣固態光敏二極體。
供排水系統
自動生化分析儀中有很多供水管道與電磁閥。只讀存儲器中軟體參數控制電磁閥與輸液泵供給各個部件的沖洗與吸液,最後排出機外。隨機存儲器內的分析參數控制電磁閥與注射器的步進電機,供應樣本、試劑和稀釋用水。有的生化儀還能自動沖洗比色杯供反復使用。
數據處理系統
每個項目的檢測結果暫時儲存在隨機存儲器中,待某個樣本所需的項目全部檢測完畢,由微機匯總列印出綜合報告單。微機的存儲器中可以存儲相當數量的病人數據與逐日的室內質控數據,隨時可以按指令調出,在熒光屏上顯示或列印,也可存儲在軟盤中長期保存,隨時調閱。
分析順序
每份樣品可以任選試劑室內預置試劑盒的一項或全部項目的檢測。微機按輸入的指令,安排項目檢測次序,一般先做孵育時間長的終點法,後做監測時間短的速率法,以便恆速列印綜合報告單。當指定樣本進入待測位置時,微機指令試劑盒進入試劑取樣位置,按所測項目的參數由加樣系統定量取樣,同時比色杯按微機的指令到達指定位置加樣。生化儀的分析速度與儀器加樣周期的時間有關。加樣周期的時間越短分析儀的速度越快。雙試劑法佔用兩個加樣周期,分析速度減半。
分析參數
1、試驗代號 14、連續監測時間
2、試驗名稱 15、標准液數量
3、試驗方法 16、標准液濃度
4、試驗類型 17、重復校標次數
5、溫度 18、計算因子(F值)
6、波長:可選擇主波長和次波長。 19、計量單位
7、反應類型 20、小數點位數
8、終點法零點讀數 21、底物耗盡
9、樣本量與稀釋水量 22、線性度
10、試劑量與稀釋水量 23、試劑吸光度上限與下限
11、樣本空白 24、線性范圍
12、孵育時間 25、參考范圍
13、延遲時間
分析參數的使用
(一)儀器廠家提供的測定項目
1、著名儀器公司自己生產常用項目試劑盒、定標液(定值血清型標准液)與定值質控血清,提供30種左右常用項目的分析參數,供用戶直接使用。另外還有數十個空白項目參數表,由用戶自己開發新項目。
2、有的著名儀器公司自己不提供試劑盒,但有合作的試劑公司,由合作試劑公司提供分析參數。因此,在購買儀器時必須購買一定數量指定試劑公司的試劑盒(包括定標液與定值質控血清)。
3、小型儀器公司既不生產試劑盒,也沒有合作試劑公司,分析參數表是空的,需要用戶自己設計分析參數,因此難度很大。不過國內代理商一般提供他們的設計參數,往往個別參數不恰當,用戶自己應逐條核實。
(二)最好使用廠家的原裝參數
1、原裝分析參數不應修改,僅計量單位要選用我國法定單位。用原公司指定的試劑盒、定標液與定值質控血清作室內質量控制,除非分析儀沒有調試好或有故障,一般能一次通過。
2、不同公司的定標液在定值時所用原始標準的來源不同,其定值可以稍有差異。方法學相同的試劑盒配方也有差異,所以其它公司的定標液或用水劑標准液作儀器定標,使用非指定試劑盒作質控,測得的數值與質控血清的的預計值會有差異,這種情況不表示原裝分析參數不合適。
3、國產試劑盒的產品質量已大有提高,可選擇方法學相同的優質國產試劑盒與原公司指定試劑盒作並行檢測,實驗樣品應包括低值和高值,結果作相關分析。符合要求的可以使用。少數項目的方法學沒有符合要求的國產試劑盒,只有另行安排該項目的國產試劑分析參數。但原參數要保留或備份,等待合格的國產試劑盒出現。
4、不論用原公司或國產試劑盒,原分析參數不應隨意修改,尤其是主要參數;如血清試劑比(包括稀釋水量)、孵育時間、延遲時間、檢測時間,因為這些參數一旦改變,線性范圍和各種限額參數都將發生改變,嚴重影響測定結果的准確性。
5、雙試劑兩步法的方法學有很多優點,如果分析儀為雙試劑式,最好用雙試劑兩步法。
6、底物耗盡參數不能刪去,否則高濃度結果出現低值;線性范圍如果刪去,高濃度結果也會偏低;試劑吸光度上下限如被刪去,分析儀將接受變質試劑。
(三)自己設計分析參數的原則
如果儀器公司不提供分析參數或測定項目的方法學不同,可以自己設置分析參數。主要設計以下幾個參數。
1、樣本試劑比例。 6、計算因子。
2、孵育時間。 7、底物耗盡限額。
3、延遲時間。 8、線性度。
4、監測時間。 9、線性范圍。
5、試劑吸光度上下限。
以上這些參數試劑盒說明書一般都會提供,可按此填入分析參數表,定標後即可進行日常工作,有些參數在以後的工作中逐步修正。
3. 總膽紅素偏高
1.谷丙是1?穀草和其他肝功項目結果是多少?谷丙這么低的比較少,要警惕谷丙過高時發生底物耗盡而假性降低(這是試驗方法學問題,如果檢驗醫生沒有經驗就發現不了)
2.你有肝區痛或有病毒性肝炎或肝B超異常的話,建議你在去大醫院復查,
3.如果以上異常都沒有,可以休息幾天,正常飲食,不要過度勞累,在復查,可能是誤差
4. 什麼是電子漏,什麼是線粒體電子漏
對線粒體質子漏(proton leak)和電子漏(electron leak)的研究,是從20世紀70年代以來才在生物力能學(Bioenergetics)和自由基生物與醫學(Free Radical Biology and Medicine)領域內開始進行的。生物力能學家通過大量實驗發現,質子漏對機體的基礎代謝率、能量轉移過程的調節和能量分配可能起著重要作用〔1,2〕。自由基生物學家發現線粒體電子傳遞過程中電子漏所產生的氧自由基,是一類活性極強的物質,對組織、細胞具有較強的損傷性。它在生物衰老、疾病發生發展(如腫瘤、心肌梗塞、炎症等)及細胞程序死亡中起著極為重要的作用〔3,5〕。對質子漏及電子漏的研究在其它學科尤其是運動科學中尚未涉及。所以研究運動與線粒體質子漏及電子漏之間的關系,是一個很值得探討的課題。
1 線粒體質子漏
1.1 質子漏的發現與概念
Nicolls於1974年在觀察鼠肝線粒體的ΔP(質子電化學勢能)與4態呼吸(線粒體呼吸底物耗盡時緩慢攝氧)速度的關系時發現:在ΔP達到一定數值以後,呼吸速度與ΔP之間呈非線性關系。4態呼吸對ΔP建立的貢獻,在高ΔP時遠小於低ΔP時。從而提示,在高ΔP時,有相當一部分已建立的ΔP被消耗掉了〔6〕。Nicolls認為,在高ΔP時,線粒體內膜的質子導性(proton conction)增加了。內膜在此時表現為非歐姆特性的導體。也就是說,在高ΔP條件下,線粒體內膜允許已被質子泵泵出的質子以某種特殊的機制重新返回基質,而發生質子漏現象,因此使線粒體電子傳遞產生的質子電化學勢能,在此時被質子漏所消耗。
在目前的文獻報道中,已將靜息呼吸狀態(態4)的線粒體內膜在高ΔP時質子導性增加的現象稱為質子漏。Murphy(1989)給質子漏下了這樣的定義:「質子漏是指質子不通過F0F1-ATPase進行ATP合成,而直接通過線粒體內膜回到基質的過程,其結果導致貯存在ΔP中的自由能被消耗」〔2〕。
1.2 質子漏的可能機制
加解偶聯劑到線粒體中可產生典型的質子漏〔7〕,其原因被認為是這些解偶聯劑增加了線粒體內膜的質子導性。在生理條件下,在棕色脂肪組織線粒體中發現了一種增加其線粒體內膜質子導性的解偶聯蛋白或稱產熱蛋白。這種蛋白質與線粒體內膜結合後可轉變為有效的質子漏,這個漏可能是個氫離子通道〔8〕。上述過程可以消耗由游離脂肪酸氧化所產生的ΔP,並以熱的形式釋放自由能。解偶聯蛋白通道的開通可使線粒體內膜的質子導性增加20倍。不過,這種解偶聯蛋白在其它組織的線粒體中並未被發現。
除了上述解偶聯蛋白可形成質子漏外,研究者還提出了氫鍵鏈模型〔9〕,電擊穿模型〔10〕,質子移位體理論〔11〕等來解釋質子跨越脂膜漏回基質的機制。我國學者劉樹森提出線粒體態4呼吸中的電子漏產生的超氧陰離子可能作為內源性載體,即電子漏引起質子漏〔12〕。
總之,高膜電位時質子導性增強,質子漏回基質現象的發生,可籠統地解釋為是由於高ΔP改變了質子跨膜勢能障礙所致,但其分子機制並不清楚。
1.3 質子漏的生理意義
Nobes(1990)等人在完整肝細胞中觀察了質子漏在總細胞耗氧所佔的比例。他們測出約20~25%的細胞耗氧(或25~30%的線粒體耗氧),用於驅動線粒體質子漏而產熱,質子漏的耗氧量占線粒體總耗氧量的1/4~1/3〔13〕。
從能量轉換的意義上來看,ΔP與4態呼吸速率之間的非線性關系,在由底物自由能轉化為ΔP後,在低ΔP與高ΔP時是不同的,高ΔP時的能量耗散高於低ΔP。在3態呼吸時,能量從ΔP到ΔG(磷酸化勢能)的轉換增加,有利於更多的氧耗被用於ATP的合成。Ernster(1963)發現,增加己糖激酶的量,加快ATP的轉運,也會增加ADP/O比〔14〕,因為加快ATP→ADP的轉化,其結果同樣可以降低ΔP。
較高的ΔP更利於引發質子漏,導致貯於ΔP的自由能以熱的形式釋放。應該認為,在生物體內,這種釋放熱能的形式並非能量的浪費,而可能是具有重要的生理意義:產熱、保持體溫、維持基礎代謝。Brand認為:人體90%的靜態熱產生是來源於只佔體重8%的內臟(如:肝、腎、心臟、脾、腸等),而這些內臟的熱產生可能是來源於其線粒體伴隨氧化磷酸化過程中的質子回漏〔1〕。
雖然直到目前質子漏的生理意義尚未被肯定下來,不過很多的研究者發現,在生理條件下,線粒體質子漏的發生,會使氧化磷酸化得到最優的偶聯系數,並使產熱和氧化磷酸化這兩個對機體十分重要的過程之間達到精確的平衡〔1,2,15〕。
2 線粒體電子漏
2.1 電子漏的概念及發現
體內大部分的氧耗發生在線粒體細胞色素氧化酶上。一個氧分子在此接受由呼吸鏈傳遞來的4個電子後被還原,並與4個H+作用生成2個分子水,但在呼吸過程中,線粒體電子傳遞鏈會「漏出」少量的電子直接與氧結合形成超氧自由基(superoxide radical,),這一現象被稱為線粒體電子漏(electron leak)〔16〕。
隨著對生物體內氧自由基檢測手段的提高,如電子順磁共振(ESR)的應用,人們逐漸發現了線粒體電子漏出的部位、數量及其在各種生理病理條件下的變化〔17,18〕。Loschen(1971)首先證明了線粒體呼吸鏈產生氧自由基〔19〕。Turrens等人(1980)發現線粒體中H2O2主要來自的歧化〔20〕。不同組織分離的線粒體在代謝過程中,都不同程度地檢測到有的存在,因此線粒體已被肯定地認為是產生的重要場所〔18〕。
2.2 電子漏的可能部位
線粒體內膜呼吸鏈上的4個復合物中,復合物Ⅰ和Ⅲ被認為是電子漏產生的主要部位〔20〕。在生理條件下,復合物Ⅰ產生電子漏總量的2/3,復合物Ⅲ產生總量的1/3〔17,20〕。一般認為,細胞色素氧化酶能夠將反應過程中產生的氧的中間產物——氧自由基牢固地結合在蛋白質上,而不游離到周圍的環境中〔16〕。不過,在特定的條件下,如Ksenzenko(1992)用ESR檢測發現,在H2O2存在時,細胞色素氧化酶可能催化H2O2產生〔21〕。徐建興(1995)觀察到外加H2O2濃度低於10-7M(接近生理濃度)時,仍可觀察到電子通過細胞色素C直接傳遞給H2O2的現象。認為在細胞色素C處也存在一個電子漏,這個電子漏可能起著生理上清除和H2O2的作用〔22〕。
電子是如何從呼吸鏈漏出的,機制尚不清楚。有人認為從泛半醌(Ubisemiquione,QH*)自氧化生成〔23〕,也有人認為由還原性細胞色素的自氧化產生電子漏〔24〕。無論電子漏是由於泛半醌,還是由於還原型細胞色素的自氧化形成的,這兩個電子傳遞體都具有較高的還原勢能,都位於線粒體內膜的胞漿一側。因此,從它們對產生的貢獻來看,其機制可能是相似的。
2.3 電子漏的生理意義
目前,對於電子漏現象產生的在線粒體中的作用,報道最多的是關於它對生物體的損傷作用,如的進一步轉化導致脂膜的過氧化,蛋白質的交聯,核酸的破壞等等〔16〕。而對產生與存在的生理意義報道極少。但已有人觀察到炎症反應時在中性白細胞中產生的有抵抗細菌、病毒的生理作用〔25〕。這些在細胞水平上觀察到的的生理意義提示我們,在線粒體中,經長期進化後,依然有少量可躲避SOD的作用而存在著,勢必有其特殊的意義。
3 電子漏與質子漏的相互作用
劉樹森等(1995)提出了電子漏導致質子漏的假想模型〔12,26〕,其理論為:電子漏與質子漏是線粒體電子流與質子流這一能量轉換基本反應相伴隨的過程,電子傳遞和質子轉移相偶聯建立ΔΨ和ΔpH,ΔΨ的高電位可能是導致電子漏產生的條件,從而緩沖由於高ΔΨ所造成的電子傳遞障礙;而ΔpH的建立使膜表面pH下降,與質子結合形成易透膜的HO2*。HO2*可能作為體內的質子移位體,通過pH依賴的質子轉運過程,將質子從內膜外側轉移到內側,從而為質子漏提供條件以維持態4呼吸再循環,二者共同分配和調節ΔP以保持ATP合成與ΔP耗能產熱之間的平衡。
4 運動與質子漏、電子漏的關系
按照Mitchell的化學滲透學說,線粒體通過電子傳遞和耗氧,建立跨線粒體內膜的質子電化學梯度,用於驅動ATP合成〔27〕。當高能質子由F0F1-ATPase復合體重新進入線粒體基質時,能量轉化合成ATP。若線粒體內膜通透性改變時,質子可由非特異性部位滲漏回基質,即形成質子漏時,ADP/O將降低〔28〕。有假說認為:在運動時,由於體溫升高,將增加質子通過線粒體內膜的特異性滲漏〔29〕。Brooks等人(1971)發現在寡黴素(質子通過F0F1-ATPase復合體的阻滯劑)存在的情況下,溫度升高,線粒體態4呼吸耗氧也增加〔30〕。Kozlowski等人(1985)〔31〕報道高熱可降低運動狗的能量態(energy state)。ATP需求一定時,能量態降低說明化學滲透質子環中存在短循環(質子漏)〔28〕。Willis等人(1994)觀察到當溫度從37℃升高到40℃時,線粒體ADP/O比下降10%〔29〕。朱麗萍等人也觀察到隨溫度升高質子漏增加,30℃以上時增加更快〔32〕。
Klug等人(1980)觀察到大鼠耗竭性跑台跑後,以琥珀酸為底物啟動的肝臟線粒體態4呼吸明顯增加,這直接表明耗竭運動可導致肝臟質子漏增多〔33〕。其原因除了溫度影響之外,運動性內源自由基及線粒體鈣反常應該起著很重要的作用。
運動可導致自由基生成增多及線粒體鈣反常〔34,35〕。自由基及其引發的脂質過氧化反應可對線粒體膜造成多方面的損傷,如攻擊膜蛋白和脂類,改變多種膜蛋白的脂微環境,使膜流動性下降,通透性增加〔36〕,這顯然會導致非特異性質子滲漏的增多。線粒體鈣反常也會損傷線粒體膜,如Ca2+可激活PLA2,使膜脂降解〔37〕,其產物FFA、溶血磷脂又會產生類似去垢劑樣作用,從而使線粒體內膜通透性改變,推測也會導致質子漏形成。
雖然有大量實驗結果表明運動後線粒體膜受到損害,但仍缺乏足夠證據說明質子漏形成增加是運動後線粒體ADP/O比降低,ATP合成減少的原因。
從Davies等人(1982)〔38〕首次用ESR捕捉到急性耗竭運動大鼠肝臟、骨骼肌的自由基信號後,運動性內源自由基生成增多已為國內外大量研究所證實。運動性內源自由基的產生目前認為有兩條途徑:黃嘌呤氧化酶途徑和線粒體呼吸鏈途徑〔39〕。電子傳遞過程中電子漏形成的是自由基的重要來源。由於運動時耗氧劇增,而超氧自由基生成與線粒體氧利用率成正比〔23〕,故推測電子漏所形成的自由基在運動性內源自由基中應占相當比例。從目前對運動後自由基的ESR檢測來看,都是觀察肌肉或肝臟勻漿,沒有能夠對線粒體直接觀察,所以,在對運動性內源自由基形成的貢獻上兩條途徑孰重孰輕,尚需進一步研究。
由於缺血—再灌注損傷與運動性脂質過氧化損傷機制相似,因此有關缺血—再灌注的研究或許對運動導致線粒體損傷的問題有所裨益。張樺等(1993)觀察到心肌缺血—再灌注後質子轉位發生變化,呼吸鏈復合物Ⅰ和Ⅲ復合物的H+/2e比下降〔40〕。H+/2e直接反映了線粒體能量轉換的情況〔41〕。H+/2e下降說明缺血—再灌注的鼠心肌線粒體能量轉換的偶聯程度下降。其原因可能是由於質子回漏增加或電子傳遞與質子泵出發生脫偶聯所導致的。劉樹森的研究表明這種偶聯下降可能是由於電子漏產生的引起的〔12〕。
綜上所述,線粒體質子漏與電子漏可能通過對線粒體能量轉換過程及膜結構的影響,而在運動性線粒體功能下降中起著重要作用。但迄今為止,仍缺乏直接的實驗證據。此外,運動中線粒體質子漏、電子漏的產生是否還有其它積極的生理意義,如質子漏是否可通過調節產熱和氧化磷酸化平衡,起到保護性抑製作用等等,都值得進一步的研究。
5. 自動生化分析儀的任選式自動生化分析儀分析參數的使用
1、著名儀器公司自己生產常用項目試劑盒、定標液(定值血清型標准液)與定值質控血清,提供30種左右常用項目的分析參數,供用戶直接使用。另外還有數十個空白項目參數表,由用戶自己開發新項目。
2、有的著名儀器公司自己不提供試劑盒,但有合作的試劑公司,由合作試劑公司提供分析參數。因此,在購買儀器時必須購買一定數量指定試劑公司的試劑盒(包括定標液與定值質控血清)。
3、小型儀器公司既不生產試劑盒,也沒有合作試劑公司,分析參數表是空的,需要用戶自己設計分析參數,因此難度很大。不過國內代理商一般提供他們的設計參數,往往個別參數不恰當,用戶自己應逐條核實。 1、原裝分析參數不應修改,僅計量單位要選用我國法定單位。用原公司指定的試劑盒、定標液與定值質控血清作室內質量控制,除非分析儀沒有調試好或有故障,一般能一次通過。
2、不同公司的定標液在定值時所用原始標準的來源不同,其定值可以稍有差異。方法學相同的試劑盒配方也有差異,所以其它公司的定標液或用水劑標准液作儀器定標,使用非指定試劑盒作質控,測得的數值與質控血清的的預計值會有差異,這種情況不表示原裝分析參數不合適。
3、國產試劑盒的產品質量已大有提高,可選擇方法學相同的優質國產試劑盒與原公司指定試劑盒作並行檢測,實驗樣品應包括低值和高值,結果作相關分析。符合要求的可以使用。少數項目的方法學沒有符合要求的國產試劑盒,只有另行安排該項目的國產試劑分析參數。但原參數要保留或備份,等待合格的國產試劑盒出現。
4、不論用原公司或國產試劑盒,原分析參數不應隨意修改,尤其是主要參數;如血清試劑比(包括稀釋水量)、孵育時間、延遲時間、檢測時間,因為這些參數一旦改變,線性范圍和各種限額參數都將發生改變,嚴重影響測定結果的准確性。
5、雙試劑兩步法的方法學有很多優點,如果分析儀為雙試劑式,最好用雙試劑兩步法。
6、底物耗盡參數不能刪去,否則高濃度結果出現低值;線性范圍如果刪去,高濃度結果也會偏低;試劑吸光度上下限如被刪去,分析儀將接受變質試劑。 如果儀器公司不提供分析參數或測定項目的方法學不同,可以自己設置分析參數。主要設計以下幾個參數。
1、樣本試劑比例。 6、計算因子。
2、孵育時間。 7、底物耗盡限額。
3、延遲時間。 8、線性度。
4、監測時間。 9、線性范圍。
5、試劑吸光度上下限。
以上這些參數試劑盒說明書一般都會提供,可按此填入分析參數表M249602[1],定標後即可進行日常工作,有些參數在以後的工作中逐步修正。
6. 邁瑞生化BA-88A能測幾項,哪幾項
邁瑞BA-88A半自動生化分析儀
廣泛適用於醫療機構定量分析血清、血漿等樣本的臨床化學成份,如肝功能、腎功能、血脂、心肌酶、無機離子等生化項目的檢測
內置高速計算機和實驗室管理軟體,精確控制進樣、保溫、比色分析、計算結果、校準及質控等過程
可進行比色法及比濁法測定,支持單\雙試劑和單\雙波長;具有線性和非線性校準;具有測試全過程自動聲音及文字報警功能
Windows中文操作軟體,列印中文包括病人完整信息的生化檢驗報告單
全開放系統,測試項目及參數可按需增加或修改,支持國產或進口合格試劑
一體化半導體溫控系統,升溫快而穩定;光源燈具自動休眠功能,使用壽命長
儲存兩年以上的中文生化檢驗結果,支持統計、查詢和列印檢驗報告
Teflon內塗層不粘附管道系統,減少攜帶污染,且日常維護工作極少
功能全面:分析項目按肝功、血脂、腎功、離子、心肌酶類等分類排列可用於常規生化分析、特種蛋白及葯物濃度等測定。
高效實用:獨特的實驗室管理系統
測試項目可任意增加或修改,並可永久儲存
自動實時監測分析過程(如氣泡、底物耗盡等)並報警,可重新測定
自動審核檢測結果,自動對比該病人歷史數據,動態監控
能儲存十萬份以上的中文檢驗報告及各種標准曲線、質控結果,隨時查詢,並能統計任意時間段的工作量及檢測收入
主要技術指標
主要配置:分析儀主機、PC計算機、列印機、實驗室數據管理系統
操作語言:中文Windows
光源:OSPAM石英鹵素燈12V/20W,可設置為分析時啟用
波長范圍:304-700nm,已內置7個波長的干涉濾光片(340nm、405 nm、492 nm、510 nm、546 nm、578 nm、630 nm)
波譜寬度:80-12nm
波長精度:±2nm
吸光度:0.000-2.500ABS
解析度:0.001ABS
漂移:0.002ABS/H
比色池:不銹鋼/石英窗流動式32μl,光徑10mm
溫度精度:±0.1℃
交叉污染:<2.0%
雜散光:<1%(340nm)
進樣量:200μl-2000μl可調
分析方法:動態法、終點法、初速率法、線性和非線性測定等
測試項目:模式化全開放程序設計,由用戶自行編制測試項目,可任意擴展
質控功能:L-J圖,X、SD、CV%
操作控制:電腦實時控制,主機內置大容量硬碟驅動器及USB介面
顯示器:15」高解析度彩色顯示器
輸出:RS232,外接標准PC計算機
環境溫度:15-30℃
濕度:20%-85%
電源:220VAC±10% 50/60Hz
常用生化測試項目
肝功
ALT/GPT谷丙轉氨酶
AST/GOT穀草轉氨酶
ALP鹼性磷酸酶
GGT谷氨醯轉移酶
T.BILI總膽紅素
D.BILI直接膽紅素
TP總蛋白
CHE膽鹼脂酶
血脂
CHOL膽固醇
TRG甘油三脂
HDL-CH高密度脂蛋白膽固醇
APOAI載脂蛋白A
APOB載脂蛋白B
GLU葡萄糖
心肌酶
CK肌酸激酶
CK-MB肌酸激酶同工酶
LDH乳酸脫氫酶
α-HBDHα-羥丁酸脫氫酶
腎功
CO2二氧化碳
BUN尿素氮
Cr肌酐
UA尿酸
離子
Ca2+鈣
P磷
Mg2+鎂
其它
AMS澱粉酶
LPS脂肪酶
β-HBβ-羥基丁酸
7. 怎麼審核生化檢驗報告單
看質控是否在控
看結果和之前的結果相差大不大,這種差異是否能合理解釋。
出現危急值,先復查並且查看標本狀態是否有凝塊等,結果一致就報危急值。
一些項目過很高是注意是否有底物耗盡,注意結果是否在儀器線性范圍類。
特殊標本要標注標本狀態,比如脂血,溶血,黃疸等。
8. 自動生化參數的選擇線性范圍
自動生化分析儀參數設置
自動生化分析儀是一種把生化分析中的取樣、加試劑、去干擾物、混合、恆溫反應、自動監測、數據處理以及實驗後清洗等步驟進行自動化操作的儀器,它完全模仿並代替了手工操作,目前已經成為醫療機構進行臨床診斷所必可不少的儀器之一。它的應用大大提高了生化檢驗的准確性、精密度和工作效率,適應了臨床醫學發展對檢驗醫學的要求,然而這一切不僅需要生化分析儀的技術基礎,也需要儀器內每個項目都有一組最優化的分析參數。並且目前大多數生化分析儀為開放式,封閉式的儀器一般也會另外留一些檢測項目的空白通道由用戶自己設定分析參數,因此我們有必要了解生化分析儀各個分析參數的基本含義以及設置方法。
1.試驗名稱常以項目的英文縮寫來設置,如總蛋白設置為TP,白蛋白設置為ALB等。 2.方法類型生化分析儀常用的方法有終點法、連續監測法、比濁法等,根據被檢物質的檢測原理等選擇其中一種分析方法。
2.1終點法又稱為平衡法,是基於反應達到平衡時反應產物的吸收光譜特徵及其對光吸收強度的大小對物質進行定量分析的一類方法,有一點終點法和兩點終點法兩類。一點終點法的特點是使用一種或兩種試劑,當待測物與試劑反應達到終點時,測定混合溶液的吸光度來計算待測物的濃度,該法常用的有總蛋白雙縮脲法、白蛋白溴甲酚綠法、葡萄糖氧化酶法等,手工操作的大多數方法都是一點終點法。兩點終點法也稱固定時間法,如果是單試劑分析,當測定波長同干擾物質的吸收光譜有重疊時,通過選用兩點終點法可消除樣品空白引起的干擾,其分析過程是在樣品與試劑混合後經過一段延滯期讀取一個點A1,一定時間後再讀取A2,然後比較標准和測定的ΔA(ΔA=A2-A1)值,求得待測物的濃度。肌酐苦味酸法就是一個典型的單試劑兩點法的例子。如果是雙試劑分析,選用二點終點分析法除了可消除樣品空白引起的干擾外,還可消除內源性干擾物質的干擾,其分析過程是加入試劑1後讀取A1,加入試劑2後讀取A2,A1相當於讀出樣品空白值,A2才是實際呈色反應,然後比較標准和測定的ΔA(ΔA=A2-A1)值,求得待測物的濃度。為了提高終點法檢測的准確性,選擇該法時應設置終點法零點讀數、樣品空白等兩個分析參數,前者是在反應前即開始讀數,可以扣除反應前試劑和樣品混合液的空白讀數;後者是樣品加空白試劑所得到的吸光度,反應需要佔用一個比色杯。
2.2連續監測法又稱動態分析法、速率法等,基本原理是在酶促反應的最適條件下,用物理、化學或酶促反應的分析方法,在反應速度恆定期(零級反應期)內連續觀察和記錄一定反應時間內底物或產物量的變化,以單位時間酶反應初速度計算出酶活力的大小和代謝物的濃度。具體方法有兩點速率法和多點速率法:兩點速率法是通過觀察在零級反應期內兩個時間點的吸光度,用兩個點的吸光度的差值(ΔA)除以時間(分),計算出每分鍾的吸光度變化值;多點速率法是在零級反應期內每隔一定時間(2-30s)進行一次監測,連續監測多次,求出單位時間內的反應速度,這種方法又可分為最小二乘法、多點δ法、回歸法、帶速率時間法等。該法具有明顯的優點就是大大提高了分析速度和准確性,主要適用於酶活性及其代謝產物的測定。在連續監測法過程中,即使不加樣品,試劑中的底物也會自動降解得到一個結果,因此應設置試劑空白速率,不同批號試劑的試劑空白速率不一樣,其值為以水代樣品測得的項目結果,樣品測定結果應扣除試劑空白速率的數值。
2.3比濁法自動生化分析儀一般只能做透射免疫比濁分析,當光線通過一定體積的含免疫復合物的溶液時,由於溶液中存在的抗原-抗體復合物粒子對光線的反射和吸收,引起透射光的減少,測定的光通量和抗原抗體復合物的量成反比。它常用於終點法測定,目前主要用於血清特種蛋白的檢測,如載脂蛋白、微量蛋白、急性時相反應蛋白、免疫球蛋白以及某些葯物監測等。但是如果樣品中待測抗原濃度過高,抗原與抗體形成的免疫復合物分子將會
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變小,而且易發生解離,使濁度反而下降,因此免疫比濁分析過程中必須設置前區檢查,比較分析過程中後兩個讀數點的差別,如果後一點比前一點的吸光度低,則表示抗原已過剩,應將樣品稀釋後重測。
3.反應溫度自動生化分析儀通過溫度控制系統保持溫度恆定,以保證反應的正常進行,其保持恆溫的方式有三種:乾式恆溫器加熱、水浴式循環加熱、恆溫器循環間接加熱。恆溫控制器可以對25℃、30℃、37℃三種溫度進行恆溫,根據需要可以任意選擇,半自動生化分析儀恆溫器屬於這種。全自動生化分析儀的溫度控制器一般只能控制37℃一種溫度,少數也可以控制30℃和37℃兩種溫度。
4.反應波長當測定體系中只有一種組分或混合溶液中待測組分的吸收峰與其他共存物質的吸收波長無重疊時,可選用單波長,如果待測物質有幾個吸收峰,可選用吸光度最大的一個波長,或者選擇在吸收峰處吸光度隨波長變化較小的某個波長。當被檢溶液混濁或存在較多的干擾物質時,測定過程中會出現光散射和非特異性光吸收,從而影響測定結果的准確性,此時可用雙波長甚至多波長測定,以提高測定結果的准確性,而在實際應用中選擇輔助波長主要用於消除脂血、溶血、黃疸的干擾。由於脂質、血紅蛋白、膽紅素在較寬的波長范圍內有較強的光吸收,常常同測定波長有重疊,此時測得的吸光度包含待測物質的吸光度和干擾物質的吸光度,因此必須選用合適的輔助波長來消除干擾物質的吸光度。輔助波長的設置原則是根據測定波長選擇輔助波長,要求干擾物質在測定波長同輔助波長有相同的吸光度。
5.反應方向有正向反應和負向反應兩種,反應過程中吸光度增加為正向反應,吸光度下降為負向反應。
6.樣品量與試劑量樣品與試劑量的確定一般按照試劑說明書上的比例,並結合儀器的特性進行設置,亦可根據手工法按比例縮減或重新設計,但要考慮到檢測靈敏度、線性范圍,盡可能將樣品稀釋倍數大些,以降低樣品中其他成分的影響。在樣品與試劑量的設置過程中主要應注意以下幾個方面:①稀釋水量,添加樣品稀釋水的是為了洗出粘附在采樣針內壁上的微量血清,減少加樣誤差,添加試劑稀釋水是為了避免試劑間的交叉污染,兩種稀釋水的量應在復溶試劑時按比例扣除。如果採用液體試劑盒時因不再用水,無法扣除稀釋水量,所以兩種稀釋水應盡量減少,以免試劑被過量稀釋。②最小樣品量,即分析儀進樣針能在規定的誤差范圍內吸取的最小樣品量,隨著技術的不斷改進,儀器的最小樣品量逐漸減小,目前有少至1.6μl的。在樣品含高濃度代謝產物或高活性酶濃度的情況下往往需採用分析儀的最小樣品量作為減量參數,從而使儀器的檢測范圍上限得以擴大。③總反應容量,在不同的分析儀有一個不同的規定范圍,在設置的時候樣品量和試劑量之和不能超過這一范圍。該值受儀器的光路系統所影響,直射式光路由於光束較寬,難於減少所測試反應液體積,集束式光路則是通過一個透鏡使光束變窄,可檢測低至180μl的反應液混合體,近年來又出現了點光源技術,它的光束更小,照射到樣品杯時僅為一個點,可使反應液的量降至120μl.④試劑量/樣品量比值,不要為節省試劑而過分地減少試劑用量,因為在終點比色法中,縮小試劑量/樣品量比值會降低線性范圍,遇高濃度樣本會因試劑量不足而使結果偏低。
7.分析時間分析時間包括孵育時間、延遲時間、監測時間等,選擇不同的分析方法應選擇相應的分析時間。
7.1孵育時間選擇終點法時設置,在一點終點法是樣品與試劑混勻開始至反應終點為止的時間,在兩點終點法是第一個吸光度選擇點開始至第二個吸光度選擇點為止的時間。在設置孵育時間時,有些分析方法要特別注意,如選擇溴甲酚綠法測定血清白蛋白時,由於血清中α1-球蛋白、轉鐵蛋白等也可與溴甲酚綠呈色,盡管其反應速率較白蛋白為慢,但是實際上當血清與白蛋白混合時,「慢反應」已經發生,因此為減少非特異性結合反應,應在溴甲酚綠與血清混合後30s讀取吸光度。當選擇酶法的Trinder反應測定葡萄糖、總膽固醇、甘
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油三酯時,由於37℃酶反應較慢,因此必須測定這些酶試劑反應達到終點的時間,自動分析儀用試劑盒一般可以在全部加樣後5分鍾內反應完全,所以應選擇分析儀的最大反應時間。
7.2延遲時間選擇連續監測法或兩點終點法時設置,即在樣品與反應試劑(第二試劑)混勻開始至第一個吸光度選擇點之間的時間。在連續監測法過程中,當酶與底物混合後需要一定的時間讓酶激活,直至線性反應期才能開始監測,有的項目需要用工具酶將內源性代謝產物耗盡,消除干擾。一般單試劑法只需要30s,常用項目中谷氨酸氨基轉移酶、天冬氨酸氨基轉移酶需要特別注意,但是對於雙底物反應或需要輔酶參與者,通常為1-3min.7.3監測時間酶促反應延滯期後,在過量底物的存在下,反應速率加快並達到穩定的階段,即酶促反應以恆定的速率進行,不受底物濃度的影響,這段時間稱為線性反應期或零級反應期,自動生化分析儀的監測時間即為此期。連續監測法在零級反應期至少應監測90-120s或至少4點(3個ΔA),少於3個ΔA不能稱為連續監測法,因為不能計算線性度;監測時間過長則容易發生底物耗盡,可測范圍變窄。醫學教育網搜集整理。
8.計算因子(F值)和實測F值用連續監測法進行酶活性測定時,不需作標准管或標准曲線,根據摩爾吸光系數很容易進行酶活性濃度的計算。先測定在線性范圍內每分鍾吸光度的變化(ΔA/min),以U/L代表酶活性濃度時,則可按下式進行計算: U/L,t℃=△A/min×F==△A/min×V×106/(ε×V×L)
式中V:反應體系總體積(ml);106:將mol換算成μmol;ε:摩爾吸光系數(cm2/mol);v:樣品體積(ml);L:比色杯光徑(cm)。當條件固定時,從理論上講V、v和L均為固定值,ε值為常數,所以F值是恆定的。F值對酶的測定十分重要,過高雖然測定的線性較寬,但重復性差,反之精密度雖好,但檢測線性窄,因此應根據實際情況進行合理的設置和應用。但是在臨床實際工作中,儀器諸多因素如波長的准確性、半波寬的大小、比色杯光徑及磨損與清潔度、溫控的准確性、加樣系統狀況等若不符合要求或發生變化都會影響指示物的ε值或上述公式中的相關項,因此應在具體儀器條件下,定期檢查和實際測定指示物的實測ε值和F值。因為純NAD(P)H溶液不穩定,所以NAD(P)H的ε值需用葡萄糖己糖激酶法實測,實際操作為將某一濃度的葡萄糖溶液重復5-10次測定,得到相應的一組吸光度A值,求出Aˉ±s,注意s必須低於規定的批內允許值,再根據下面兩個公式分別計算出NAD(P)H的實測ε值和F值:
式中C為標准液濃度(mol/L)。其他一些色素源指示物在不同的介質環境中,其ε值會發生程度不等的變化,對5-硫代-2-硝基苯甲酸、對硝基苯酚、對硝基苯胺等這些可得到高純而穩定的指示物,可將其配製在一定的介質中,按臨床標本用的現場試劑和儀器測定吸光度求實測ε值及F值。
9.線性度是非線性比率的界線,常用%表示,其計算公式為,式中:k1為連續監測時間2/3內前讀數時間的斜率,k2為後2/3讀數時間的斜率,k3為總的斜率,一般設置為15%.對一些酶活性項目,可以適當放寬,當不需要設置檢查界限時,設置其為0.線性百分數大,說明Δk之間已不成線性;超過極限值說明底物不足,檢測結果會變低,應稀釋後重測。 10.底物耗盡限額選擇連續監測法或兩點終點法時設置,不同型號分析儀的設計不一樣,有的為零點與監測第一點吸光度的差額,有的為吸光度上升或下降至指定吸光度(MAX-OD/MIN-OD)的數值。超過限額說明樣品的酶活性非常高,底物消耗太快,在儀器程序規定的線性反應期內吸光度的變化往往不代表真正的酶活力,導致結果偏低,該樣品應稀釋一定的倍數重新測定。
9. 生化分析儀測試質控品和標准品都超線性范圍是怎麼回事
1:檢查設置的項目和試劑說明書上的添加量,反應時間,波長等是否相符。有時候時間長了,試劑批次更換多次之後試劑廠家有改進的時候這些可能會有改變。
2:檢查反應曲線是否正常如果反應過早結束有可能是底物耗盡,適當增加試劑量或者減少測量的反應時間會有所改善。
3:儀器有污染或者故障,請排除。
10. 底物耗盡是什麼意思
連續監測法或固定時間法中,在測定時間內吸光度一點或多點超過設定的底物耗盡值,稱為底物耗盡。如邁瑞生化儀谷丙底物耗盡限為0.6.