1. 脂肪的鉴定设计实验 脂肪的鉴定可以不用显微镜,应如何设计实验
[思路分析]
化学方法:取一粒花生(或向日葵,蓖麻)种子,剥去红色的种皮,用一片叶子做徒手切片,挑选最薄一片,置载玻片上,滴加苏丹III溶液,移至酒精灯上加热,促进着色,制成临时装片,置显微镜下观察,可见到花生子叶细胞内含有桔红色的圆球形的颗粒,即为油滴,因为苏丹III溶液与脂肪作用,呈桔红色反应,注意细胞内油滴的含量和分布情况.
[解题过程]
物理方法:烘烤花生种子后,把子叶放在白纸上用手指挤压,白纸上会出现透明的油迹,说明子叶中含有脂肪
2. 高中生物如何对脂肪进行检测
1、材料的选取:
含脂肪量越高的组织越好,如花生的子叶。
2、步骤:
制作切片(切片越薄越好)将最薄的花生切片放在载玻片中央。
染色(滴苏丹Ⅲ染液2~3滴切片上→2~3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精)。
制作装片(滴1~2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片)。
镜检鉴定(显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒)。
3. 如何检测生物组织中的糖类,脂肪,和蛋白质
一.实验目的:尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质
二.实验原理:某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物,产生特定的颜色反应.
1.可溶性还原糖(如葡萄糖、果糖、麦芽糖)与斐林试剂发生作用,可生成砖红色的Cu 2O沉淀.即Cu ( OH ) 2被还原成Cu 2O,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸.
2.脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色(或被苏丹Ⅳ染液染成红色).
3.蛋白质与双缩脲试剂发生作用,产生紫色反应.(蛋白质分子中含有很多肽键,在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用,产生紫色反应.)
4.淀粉遇碘变蓝色.
三.实验材料
1.做可溶性还原性糖鉴定实验,应选含糖高,颜色为白色的植物组织,如苹果、梨.(因为组织的颜色较浅,易于观察.)
2.做脂肪的鉴定实验.应选富含脂肪的种子,以花生种子为最好,实验前一般要浸泡3-4小时(也可用蓖麻种子).
3.做蛋白质的鉴定实验,可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清.
四、实验试剂
斐林试剂(包括甲液:质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液:质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液)、苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、双缩脲试剂(包括A液:质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和B液:质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液)、体积分数为50%的酒精溶液,碘液、蒸馏水.
五、方法步骤:
(一) 可溶性糖的鉴定
1.制备组织样液.
苹果或梨组织液必须临时制备,因苹果多酚氧化酶含量高,组织液很易被氧化成褐色,将产生的颜色掩盖.
2.注入2mL组织样液.
3.注入1mL新制的斐林试剂,振荡.
(现配现用、先混后加)
应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存,使用前才将甲、
乙液等量混匀成斐林试剂;切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测.
斐林试剂很不稳定,甲、乙液混合保存时,生成的Cu ( OH ) 2在70-900C下分解成黑色CuO和水;甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应,无
Cu ( OH ) 2生成.
4.水浴加热:试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中,加热约2分钟,观察到溶液颜色:浅蓝色 → 棕色 → 砖红色(沉淀)
最好用试管夹夹住试管上部,使试管底部不触及烧杯底部,试管口不朝向实验者.
也可用酒精灯对试管直接加热.
防止试管内的溶液冲出试管,造成烫伤;
缩短实验时间.
(二)脂肪的鉴定
取材、切片、制片:花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片,将薄片放在载玻片的水滴中,用吸水纸吸去装片中的水.
干种子要浸泡3-4小时,新花生的浸泡时间可缩短.
浸泡时间短,不易切片,浸泡时间过长,组织较软,切下的薄片不易成形.切片要尽可能薄些,便于观察.
染色:在子叶薄片上滴2-3滴苏丹Ⅲ(染色3分钟)或苏丹Ⅳ染液(染色1分钟).
染色时间不宜过长.
漂洗:用吸水纸吸去薄片周围染液,用50%酒精洗去浮色,吸去酒精.
酒精用于洗去浮色,不洗去浮色,会影响对橘黄色脂肪滴的观察.同时,酒精是脂溶性溶剂,可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴.
用吸水纸吸去薄片周围酒精,滴上1-2滴蒸馏水,盖上盖玻片.
滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡.
镜检:先低后高(高倍镜用法:移物换器时针反),低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处,可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒.
装片不宜久放.
时间一长,油滴会溶解在乙醇中.
三、蛋白质的鉴定
制备组织样液.(浸泡、去皮研磨、过滤.)黄豆浸泡1至2天,容易研磨成浆,也可购新鲜豆浆以节约实验时间.加样液约2ml于试管中,加入双缩脲试剂A,摇匀;再加入双缩脲试剂B液3-4滴,摇匀,溶液变紫色.
A液和B液也要分开配制,储存.鉴定时先加A液后加B液.
CuSO4溶液不能多加.
先加NaOH溶液,为Cu2+与蛋白质反应提
供一个碱性的环境.A、B液混装或同时加入,会导致Cu2+变成Cu ( OH ) 2沉淀,而失效.
否则CuSO4蓝色会遮盖反应的真实颜色.可用蛋清代替豆浆.蛋清要先稀释.
如果稀释不够,在实验中蛋清粘在试管壁,与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上,使反应不容易彻底,并且试管也不易洗干净.
附:淀粉的检测和观察用试管取2ml待测组织样液,向试管内滴加2滴碘液,观察颜色变化.碘液不要滴太多,以免影响颜色观察
4. 如何测定乳脂肪的含量
乳脂肪含量的测定是根据其特性决定的。由于乳脂肪的乳浊状态相当稳定,所以测定乳脂肪时,首先应把脂肪球膜加以破坏,这一点可借助于醇、酸、碱等化学处理方法来实现。常用的测定方法有盖尔别尔(Gerber)法和巴布考克法(Babcocks)。
采用盖尔别尔测定脂肪的具体操作方法如下:
(1)于乳脂计中加入10毫升硫酸(比重为1.82~1.825)。
(2)用11毫升专用牛奶吸管吸取11毫升混合均匀的奶样,慢慢注入到乳脂计内,使奶于硫酸液面上(切勿混合或将奶样沾到乳脂计颈部)
(3)用1毫升自动吸管吸取1毫升异戊醇小心注入到乳脂计内。
(4)塞紧乳脂计胶塞并用湿毛巾将乳脂计包好,以拇指压住胶塞,塞端向下,使细部硫酸流到乳脂计膨大部,用力多次摇动使内容物充分混合,待蛋白质完全溶解,内容物变成褐色后,将乳脂计的塞端向下放入65~70℃水浴锅中4~5分钟。
(5)取出后置于离心机中,以800~1200转/分离心5分钟。
(6)在置于65~70℃水浴中4~5分钟取出后即读数。
Gerber乳脂计颈部一般有8个大刻度(每刻度容积为0.125毫升,总计1毫升),每个大刻度有10个小刻度,共计80个小刻度。牛奶吸管11毫升,当奶注入到乳脂计后吸管壁要沾留0.1毫升奶,因此加入到乳脂计的奶量为10.9毫升。
巴布考克法测定的具体操作方法如下:
(1)用专用牛用吸管吸取17.6毫升奶注入到巴氏乳脂瓶中,加17.5毫升硫酸(比重1.82~1.825)。
(2)摇动乳脂瓶使奶和硫酸混合,内容物成棕黑色后继续摇动2~3分钟。
(3)将乳脂瓶置于离心机中以700~1000转/分离心5分钟。
(4)取出加65℃水至瓶的颈部,再离心2分钟。
(5)取出加热水至刻度“4”处再离心1分钟。
(6)取出置于65℃水浴中保温5分钟。
(7)取出后即读数。
5. 怎样检测生物组织中的糖类,脂肪和蛋白质
糖类中还原糖(例葡萄糖、果糖、麦芽糖等)可用斐林试剂检测。先准备组织样液,再准备0·1g/ml的氢氧化钠溶液、0.05g/ml硫酸铜溶液。方法步骤:1.(1)取2ml组织样液加入1支洁净的试管。
(2)再另取2支试管,分别加入2mlNaOH与硫酸铜溶液,再把硫酸铜溶液倒入氢氧化钠溶液的试管,振荡混合均匀,即为斐林试剂。
(3)把新配制的斐林试剂与组织样液,等体积混合,振荡摇匀,然后放入50~60度水浴中保温,观察颜色变化。如出现砖红色沉淀,即说明有还原糖。
非还原糖(淀粉用碘液检测即可)碘遇淀粉变蓝。
脂肪用苏丹三或苏丹四检测,材料可用浸泡过"的花生种子,先制成临时装片,再用显微镜观察。或者把试剂滴加到组织样液中,观察颜色变化。
临时装片制作:用刀片先在花子叶切开,然后做徒手切片,放在清水中,然后用毛笔蘸取最薄的一片放在载玻片中央,滴加苏丹三溶液染色3到5分钟,用吸水纸吸取多余染液,再用体积分数为50%酒精洗去浮色,盖上盖玻片。放在显微镜下观察。脂肪粒被苏丹三染成橘黄色、苏丹四染成红色。(上述徒手切片做不好,可在花生子叶上
刮取少量粉末,直接涂在载玻片上来替代。
蛋白质用双缩脲试剂来检测。双缩脲是由A液(0.1g/ml的氢氧化钠)、B液(O.01g/mL的硫酸铜溶液组成。)
使用时取组织样液(用蛋清稀释液或豆浆)一2mL加入洁净试管,然后先滴加1mLA液,振荡试管摇匀,再滴加3~4滴硫酸铜溶液,摇匀。蛋白质遇双缩脲生成紫色。
6. 鉴定脂肪的实验步骤
脂肪可以被苏丹3染成橘黄色或被苏丹4染成红色。可以根据这些化学试剂所产生的颜色反应,鉴定生物组织的脂肪的存在。
脂肪是由甘油和脂肪酸组成的三酰甘油酯,其中甘油的分子比较简单,而脂肪酸的种类和长短却不相同。脂肪酸分三大类:饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸。
(6)怎么检测脂肪用化学方法扩展阅读:
脂肪的生物合成包括三个方面:饱和脂肪酸的从头合成,脂肪酸碳链的延长和不饱和脂肪酸的生成。脂肪酸从头合成的场所是细胞液,需要CO2和柠檬酸的参与,C2供体是糖代谢产生的乙酰CoA。反应有二个酶系参与,分别是乙酰CoA羧化酶系和脂肪酸合成酶系。
首先,乙酰CoA在乙酰CoA羧化酶催化下生成,然后在脂肪酸合成酶系的催化下,以ACP作酰基载体,乙酰CoA为C2受体,丙二酸单酰CoA为C2供体,经过缩合、还原、脱水、再还原几个反应步骤,先生成含4个碳原子的丁酰ACP,每次延伸循环消耗一分子丙二酸单酰CoA、两分子NADPH,直至生成软脂酰ACP。
产物再活化成软脂酰CoA,参与脂肪合成或在微粒体系统或线粒体系统延长成C18、C20和少量碳链更长的脂肪酸。在真核细胞内,饱和脂肪酸在O2的参与和专一的去饱和酶系统催化下,进一步生成各种不饱和脂肪酸。高等动物不能合成亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸,必须依赖食物供给。
7. 脂肪检测方法
体内脂肪的方法,脂肪含量越来越受到重视,所以脂肪检测非常重要,如果脂肪含量高,一定要通过严格控制饮食以及适量的运动,将体重控制在正常范围,脂肪增多容易患心脑血管疾病。
常规的脂肪检测方法,需要到医院做脂肪肝的检查,可以做肝脏的超声,脂肪肝的患者往往脂肪都是增多的,通过肝脏的超声可以判断是轻度脂肪肝,重度脂肪肝还是中度脂肪肝,重度脂肪肝的人往往体内脂肪是很多的。
脂肪检测方法可用索式提取法:
一、索式提取法(经典方法)
1、原理:
样品经前处理后,放入圆筒滤纸内,将滤纸筒置于索式提取管中,利用乙醚或石油醚在水浴中加热回流,使样品中的脂肪进入溶剂中,回收溶剂后所得到的残留物,即为脂肪(粗脂肪)
采用这种方法测出游离态脂,此外还含有磷脂、色素、蜡状物、挥发油、糖脂等物质,所以用索氏提取法测得的脂肪为粗脂肪。
2、 适用范围与特点
索氏提取法适用于脂类含量较高,结合态的脂类含量较少,能烘干磨细,不宜吸湿结块的样品的测定。此法只能测定游离态脂肪,而结合态脂肪无法测出,要想测出结合态脂肪需在一定条件下水解后变成为游离态的脂肪方能测出。
另外此法是经典方法,对大多数样品结果比较可靠,但需要周期长,溶剂量大。
8. 脂肪可用什么试剂来检测检测过程是什么
用苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液
步骤:
1:首先取一粒浸泡过的花生种子,右手持刀片,将子叶削去一片,形成一个平面。
2、用滴管在花生子叶薄片上滴上几滴苏丹3染液,染色两到三分钟。
3、用吸水纸吸去薄片周围多余的染液,滴上1到2滴酒精溶液,洗去浮色。
4、制成临时装片。
5、用高倍镜观察。
注意事项:
①切片要薄,如厚薄不均就会导致观察时有的地方清晰,有的地方模糊。
②酒精的作用是:洗去浮色
③使用显微镜观察
④使用不同的染色剂染色时间不同
9. 脂肪可用什么试剂来检测检测过程是什么
用苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液
步骤:
1:首先取一粒浸泡过的花生种子,右手持刀片,将子叶削去一片,形成一个平面。
2、用滴管在花生子叶薄片上滴上几滴苏丹3染液,染色两到三分钟。
3、用吸水纸吸去薄片周围多余的染液,滴上1到2滴酒精溶液,洗去浮色。
4、制成临时装片。
5、用高倍镜观察。
注意事项:
①切片要薄,如厚薄不均就会导致观察时有的地方清晰,有的地方模糊。
②酒精的作用是:洗去浮色
③使用显微镜观察
④使用不同的染色剂染色时间不同
10. 脂肪的辨别方法
脂肪可以被苏丹3染成橘黄色或被苏丹4染成红色。可以根据这些化学试剂所产生的颜色反应,鉴定生物组织的脂肪的存在。
脂肪是由甘油和脂肪酸组成的三酰甘油酯,其中甘油的分子比较简单,而脂肪酸的种类和长短却不相同。脂肪酸分三大类:饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸。
(10)怎么检测脂肪用化学方法扩展阅读:
脂肪的生物合成包括饱和脂肪酸的从头合成、脂肪酸碳链的延伸和不饱和脂肪酸的生成三个方面。脂肪酸的从头合成在细胞液中发生,需要CO2和柠檬酸的参与,C2供体是葡萄糖代谢产生的乙酰辅酶a。反应涉及两种酶系:乙酰辅酶a羧化酶系和脂肪酸合酶系。
首先,乙酰辅酶a乙酰辅酶a羧化酶催化下生成的,然后系脂肪酸合酶的催化下,酰基载体ACP、乙酰辅酶a的C2受体,丙二酸酰基辅酶a为C2捐赠,通过缩合、还原、脱水;
然后恢复几个反应步骤,正如奥丁酰ACP包含四个碳原子,每个扩展循环消费分子丙二酸酰基辅酶a,NADPH的两个分子,直到生成软脂酰机场核心计划。
产物活化为softenyl辅酶a,参与脂肪合成或扩展为C18、C20和微粒体系统或线粒体系统中少量碳链较长的脂肪酸。在真核细胞中,饱和脂肪酸在O2和特定的去饱和酶系统的催化下进一步生成各种不饱和脂肪酸。高等动物不能合成亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸,必须依靠食物供应。