A. 溶菌酶 lysozyme 耐热吗
溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬细胞合成并分泌的一种小分子粘性蛋白，属乙酰多糖酶。存在于唾液、、泪液和鼻及气管等分泌物中，能溶解革兰氏阳性细菌。由于它的高等电点( pH11.0 )，使它能与细菌牢固结合，并水解细菌细胞壁肽聚糖，使细菌裂解死亡。 本实验在平板上进行唾液…
溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬细胞合成并分泌的一种小分子粘性蛋白，属乙酰多糖酶。存在于唾液、、泪液和鼻及气管等分泌物中，能溶解革兰氏阳性细菌。由于它的高等电点( pH11.0 )，使它能与细菌牢固结合，并水解细菌细胞壁肽聚糖，使细菌裂解死亡。
本实验在平板上进行唾液酶的测定。溶菌酶与枯草芽胞杆菌( Bacillus subtilis )作用后，可使该菌因细胞壁破坏而溶解，致使琼脂板加样孔周围出现溶菌环。溶菌环直径与样品中溶菌酶含量的对数呈直线关系。
【材料】
1? 无菌 PBS ( pH6.4 ， 1/15mol/L )， 5mol/LKOH ， 3%PBS 琼脂，溶菌酶标准品，受验者唾液。
2? 枯草芽胞杆菌 12 小时培养物。
3? 10×100 试管，试管架，无菌平皿，打孔器，微量加样器。
4? 分光光度计，水浴箱，温箱等。
【方法】
菌液配制：将 PBS 加入枯草芽胞杆菌斜面，置室温 5-10 分钟后制成菌悬液；在波长 640nm 处，测定菌悬液的浓度，并将菌液浓度调至透光率 30-40% 。
2. 溶菌酶标准液配制：称取溶菌酶标准品，用 PBS 配成 1000 m g/ml ，置冰箱冻存，临用时再稀释成 100 、 50 、 25 和 10 m g/ml 。
3. 收集唾液标本：待检测者用清水漱口后，将唾液收集于消毒平皿内待用。
4. 加热融化 3% 琼脂，冷至 60 -70℃ ，与预热好的枯草芽胞杆菌菌悬液等体积混合，到平板。用打孔器在平板上打孔，孔间距约 1.5cm , 每平板可打孔 8-9 个。
5. 各孔内依次加溶菌酶标准品和唾液样品，每孔 20 m l 。
6. 置于 24 -26 ℃ 12-18 小时后测量溶菌环直径。
【结果判断】
记录溶菌环的直径( mm )于下表，绘制标准曲线，并从标准曲线上查出所测样品的溶菌酶含量。
B. 溶菌酶存在于人体哪些场所
溶菌酶为正常机体免疫防御机制的组成部分，具有溶解细菌细胞壁的作用。在人体内，它存在于中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞内；也存在于黏膜分泌液中，成为体表防御因素之一。正常人尿中无溶菌酶。某些疾病患者血清或体液内的溶菌酶活性值有显着差别，故测定溶菌酶活性日益受到临床重视。
检查过程：抽血，抽血检查一般采静脉血，由医生或护士抽血。抽血量的多少是根据化验内容的不同及项目的多少来决定的，抽血量一般在2-20毫升，最多不会超过50毫升，然后由医生用显微镜观察红细胞大小。
血清：5-30mg/L(琼脂平板法);9.6-14mg/L(比浊测定法)。
脑脊液：0mg/L(琼脂平板法)。
唾液：30-70mg/L(比浊测定法)。
尿液：0mg/L(琼脂平板法);1-3mg/L(比浊测定法)。
由于方法与实验条件不同，测定结果有所差别，故各实验室应建立自己的正常值标准。
血清溶菌酶测定对鉴别各型急性白血病有一定意义，急粒与急单血清溶菌酶升高；而急淋、急性红白血病降低或正常；经化疗奏效病情缓解后，溶菌酶水平可恢复。
血清溶菌酶测定可作为判断局限性肠炎活动性的一个有用的指标，并且有助于判断临床过程的严重程度和对治疗的反应。
尿液溶菌酶含量增高的原因有：
①肾小管损害;
②高溶菌酶血症;
③肾组织破坏。
临床上测定尿液溶菌酶主要是作为肾小管损害的一个指标，各种原因的肾小管损害都可引起尿溶菌酶含量增高。肾移植患者定期检查尿溶菌酶活性十分必要。如移植肾接受良好，则溶菌酶活性在7天内恢复正常；若尿中过多的溶菌酶持续存在，必须疑及排斥反应的发生。
细菌性脑膜炎患者脑脊液(CSF)溶菌酶含量远较病毒性脑膜炎患者的含量高。因此，用溶菌酶测定对二者的鉴别有重要意义。此外，CSF溶菌酶测定对中枢神经系统的原发性或继发性肿瘤有一定辅助诊断价值。
慢性支气管炎患者痰液中溶菌酶含量降低；重症肺结核、泌尿系统感染患者血清或尿液中溶菌酶活性均可显着升高。
C. 请教用溶菌酶裂解细菌的配方
溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬细胞合成并分泌的一种小分子粘性蛋白，属乙酰多糖酶。存在于唾液、乳汁、泪液和鼻及气管等分泌物中，能溶解革兰氏阳性细菌。由于它的高等电点( pH11.0 )，使它能与细菌牢固结合，并水解细菌细胞壁肽聚糖，使细菌裂解死亡。 本实验在平板上进行唾液…
溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬细胞合成并分泌的一种小分子粘性蛋白，属乙酰多糖酶。存在于唾液、乳汁、泪液和鼻及气管等分泌物中，能溶解革兰氏阳性细菌。由于它的高等电点( pH11.0 )，使它能与细菌牢固结合，并水解细菌细胞壁肽聚糖，使细菌裂解死亡。
本实验在平板上进行唾液酶的测定。溶菌酶与枯草芽胞杆菌( Bacillus subtilis )作用后，可使该菌因细胞壁破坏而溶解，致使琼脂板加样孔周围出现溶菌环。溶菌环直径与样品中溶菌酶含量的对数呈直线关系。
【材料】
1• 无菌 PBS ( pH6.4 ， 1/15mol/L )， 5mol/LKOH ， 3%PBS 琼脂，溶菌酶标准品，受验者唾液。
2• 枯草芽胞杆菌 12 小时培养物。
3• 10×100 试管，试管架，无菌平皿，打孔器，微量加样器。
4• 分光光度计，水浴箱，温箱等。
【方法】
1. 菌液配制：将 PBS 加入枯草芽胞杆菌斜面，置室温 5-10 分钟后制成菌悬液；在波长 640nm 处，测定菌悬液的浓度，并将菌液浓度调至透光率 30-40% 。
2. 溶菌酶标准液配制：称取溶菌酶标准品，用 PBS 配成 1000 m g/ml ，置冰箱冻存，临用时再稀释成 100 、 50 、 25 和 10 m g/ml 。
3. 收集唾液标本：待检测者用清水漱口后，将唾液收集于消毒平皿内待用。
4. 加热融化 3% 琼脂，冷至 60 -70℃ ，与预热好的枯草芽胞杆菌菌悬液等体积混合，到平板。用打孔器在平板上打孔，孔间距约 1.5cm , 每平板可打孔 8-9 个。
5. 各孔内依次加溶菌酶标准品和唾液样品，每孔 20 m l 。
6. 置于 24 -26 ℃ 12-18 小时后测量溶菌环直径。
【结果判断】
记录溶菌环的直径( mm )于下表，绘制标准曲线，并从标准曲线上查出所测样品的溶菌酶含量。
D. 如何从细菌中得到纯化的特异性不同的酶，大概步骤
1、确定你的目的酶
2、根据酶的性质，采用相应的方法条件、检测方法
大概如下：
a 细菌培养，采用最适条件，使目的酶尽量富集
b 根据酶的性质，采用低温条件下，使用溶菌酶、超声波、冻融等方法得到匀浆液
c 粗提
d 盐析
e 透析
f 浓缩
g 柱层析（阴离子层析、阳离子层析、分子筛层析、疏水层析、亲和层析等）
h 电泳检测（每一步都要做）
i 酶活性检测
j 酶结晶等进一步纯化措施
E. 溶菌酶活性检测比浊法及其不稳定，请教原因
我们也遇到了这种情况，数据不稳定，平行对照之间的差值就很大，而且对照和测定之间很的差值为负值。
F. 跪求有关溶菌酶的GB检测标准
FAO，WHO，1992；盐酸溶菌酶（做食品添加剂用）。
1.水分（GT-32-1） ≤6%，
2.砷（GT-3-2，试样3g) ≤1mg/kg，
3.重金属（GT-16-2，试样2g) ≤10mg/kg，
4.灼烧残渣（GT-27） ≤1.5%，
5.含氮量（凯氏法） 16.8～17.8，
6.氯化物含量 3.2%～4.2%，
7.钠含量 ≤0.6%，
8.杂菌数（GB4789.2-94) ≤5×104/g ，
9.沙门氏菌（GB4789.4-94) 检不出/25g，
10.金黄色葡萄球菌（GB4789.10-94) 检不出/g，
11.大肠菌群（GB4789.3-94） 检不出/g。
呵呵 仅找到一项用途，希望对你有用
G. 免疫学的检测方法
免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫。
H. 在溶菌酶的粗提取实验中,为什么将蛋清缓冲液PH调到4.7后又调到8.0
因为卵清蛋白的等电点是4.7，为了提纯溶菌酶，要将卵清蛋白沉淀，所以要把PH调到4.7，至于8.0，这是溶菌酶的最适PH值。
提取溶菌酶的方法：
树脂预处理：干树脂清水浸泡，使其充分膨胀并除去细小颗粒和较大杂质； 1 mol/L 的HCl浸泡2 h，去离子水洗3次至至近中性；抽滤收集树脂,1 mol/L 的NaOH溶液浸泡2 h，去离子水洗3次至近中性；抽滤收集树脂,加0.15 mol/L、pH 值为6．5的磷酸缓冲液平衡过夜待用。
蛋清制备：将3个新鲜鸡蛋洗净干燥，小端敲一个小洞，大端打一个小孔进气，分离得鸡蛋清，用1 mol/L HCl调节PH到7。过滤前称量烧杯重48.7g，缓慢搅拌用灭菌的两层纱布过滤除去脐带块和碎蛋壳等，蛋清与烧杯总重207.5g，蛋清净重158.8g。用1 mol/L 的HCl 溶液调pH 值至7.0，量蛋清体积为100 ml。在调节PH时蛋清中出现少量白色沉淀，可能为部分蛋白由于局部过酸而变性。
吸附：蛋清在不断搅拌下加入抽滤好的724树脂25g（相当蛋清四分之一体积的树脂），冰水浴中磁力搅拌器缓慢搅拌（使树脂全部悬浮在鸡蛋清中，搅拌不能起泡）吸附2.5 h，4℃静置1.5h。然后3000r/min离心15min分层，收集树脂，回收蛋清（留样A）。
去除杂蛋白：收集树脂用去离子水振荡水洗直至洗液澄清（至无白沫为止），吸管轻吸去洗液，以去除杂蛋白。（每洗1次，离心1次，总共3次）冰浴中用等体积的0.15mol/L、pH =6.5的磷酸缓冲液搅拌洗涤15min，抽滤，重复洗三次，注意防止树脂流失。最后一次抽滤滤除树脂水分至干燥。
洗脱溶菌酶：树脂中加入35ml（等体积）的10％（NH4）2SO4溶液搅拌洗脱30 min，抽滤,使溶菌酶从树脂上洗脱下来，重复两次，合并收集洗脱液（留样），洗脱液过滤后，准确量取体积100ml。（留样B）
盐析:每83mL洗脱液加32g磨细的固体（NH4）2SO4，本实验中总量为38.55g。缓慢加入（NH4）2SO4搅拌待完全溶解后保鲜膜封口，置于4℃冰箱盐析过夜。
透析:待白色沉淀析出，3000r/min离心15 min，收集沉淀，用去离子水将沉淀洗下并全部溶解（4.5ml去离子水），装于透析袋中，于去离子水中透析（冰浴），期间2次更换去离子水，直至用BaCl2检测透析完全。透析装置中加入磁子，于磁力搅拌器中搅拌加快透析速度。
去杂质蛋白：取出透析袋中的透析液，用0.1mol/L HCl调整pH4.6，产生少量白色沉淀（留样D），可能为杂蛋白。3000r/min离心10min，收集上清液（留样C 20ul）。
浓缩：用PEG-20000浓缩上清液至1.5ml（留样E，20ul，加loading buffer,出现黄色（可能为浓缩时透析袋中渗入了PEG-20000）。[5][6]
I. 溶菌酶溶菌环大小不同的原因，影响直径因素
溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬细胞合成并分泌的一种小分子粘性蛋白，属乙酰多糖酶。存在于唾液、、泪液和鼻及气管等分泌物中，能溶解革兰氏阳性细菌。由于它的高等电点( pH11.0 )，使它能与细菌牢固结合，并水解细菌细胞壁肽聚糖，使细菌裂解死亡。 本实验在平板上进行唾液…
溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬细胞合成并分泌的一种小分子粘性蛋白，属乙酰多糖酶。存在于唾液、、泪液和鼻及气管等分泌物中，能溶解革兰氏阳性细菌。由于它的高等电点( pH11.0 )，使它能与细菌牢固结合，并水解细菌细胞壁肽聚糖，使细菌裂解死亡。
本实验在平板上进行唾液酶的测定。溶菌酶与枯草芽胞杆菌( Bacillus subtilis )作用后，可使该菌因细胞壁破坏而溶解，致使琼脂板加样孔周围出现溶菌环。溶菌环直径与样品中溶菌酶含量的对数呈直线关系。
【材料】
1? 无菌 PBS ( pH6.4 ， 1/15mol/L )， 5mol/LKOH ， 3%PBS 琼脂，溶菌酶标准品，受验者唾液。
2? 枯草芽胞杆菌 12 小时培养物。
3? 10×100 试管，试管架，无菌平皿，打孔器，微量加样器。
4? 分光光度计，水浴箱，温箱等。
【方法】
菌液配制：将 PBS 加入枯草芽胞杆菌斜面，置室温 5-10 分钟后制成菌悬液；在波长 640nm 处，测定菌悬液的浓度，并将菌液浓度调至透光率 30-40% 。
2. 溶菌酶标准液配制：称取溶菌酶标准品，用 PBS 配成 1000 m g/ml ，置冰箱冻存，临用时再稀释成 100 、 50 、 25 和 10 m g/ml 。
3. 收集唾液标本：待检测者用清水漱口后，将唾液收集于消毒平皿内待用。
4. 加热融化 3% 琼脂，冷至 60 -70℃ ，与预热好的枯草芽胞杆菌菌悬液等体积混合，到平板。用打孔器在平板上打孔，孔间距约 1.5cm , 每平板可打孔 8-9 个。
5. 各孔内依次加溶菌酶标准品和唾液样品，每孔 20 m l 。
6. 置于 24 -26 ℃ 12-18 小时后测量溶菌环直径。
【结果判断】
记录溶菌环的直径( mm )于下表，绘制标准曲线，并从标准曲线上查出所测样品的溶菌酶含量。
J. 溶菌酶含量的测定方法
那要看你用什么方法测定dna和rna：
（1）紫外吸收法也就是测量od（260）和od（280）的吸收值，这样的方法其它的杂质对测量结果影响大一点，因为其它杂质在这两个吸收波长也有吸收。
（2）荧光法，用picogreen荧光染料，测定dna，rna浓度比较灵敏，并且适合测量低浓度和微量dna和rna，并且受其它杂质的影响不大，缺点要有专门的荧光检测仪器，试剂比较昂贵。
纯化dna可以买试剂盒，主要有膜吸附法，磁珠分离法，都很方便。