蛋白酶k使用方法

A. 蛋白酶K用三蒸水溶解了，怎麼辦

提基因組DNA時，都用雙蒸水溶解的。
50mmol/L的Tris-Hcl（PH8.0）、1.5mmol/L乙酸鈣，這是指終濃度。可以先配100m/L的Tris-Hcl(pH8.0,也就是算出Tris的量後，加水約到終體積，再在用PH計下用HCL滴到pH8.0，最後定容至終體積）。再配3mmol/L乙酸鈣溶液，最後1:1混合，加入蛋白酶K.

B. 蛋白酶k有什麼作用

蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，從林伯氏白色念球菌中純化得到。該酶有兩個Ca2+結合位點，它們離酶的活性中心有一定距離，與催化機理並無直接關系。然而，如果從該酶中除去Ca2+，由於出現遠程的結構變化，催化活性將喪失80%左右，但其剩餘活性通常已足以降解在一般情況下污染酶製品的蛋白質。所以，蛋白酶k消化過程中通常加入edta（以抑制依賴於mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化對蛋白酶k具有較強耐性的蛋白，如角蛋白一類，則可能需要使用含有1mmol/lCa2+而不含edta的緩沖液。在消化完畢後、純化核酸前要加入egt（ph8.0）至終濃度為2mmol/l，以鰲合Ca2+。

C. 蛋白酶k的應用

蛋白酶K已廣泛應用在皮革、毛皮、絲綢、醫葯、食品、釀造等方面。皮革工業的脫毛和軟化已大量利用蛋白酶，既節省時間，又改善勞動衛生條件。蛋白酶還可用於蠶絲脫膠、肉類嫩化、酒類澄清。臨床上可作葯用，如用胃蛋白酶治療消化不良，用酸性蛋白酶治療支氣管炎，用彈性蛋白酶治療脈管炎以及用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶對外科化膿性創口的凈化及胸腔間漿膜粘連的治療。加酶洗衣粉是洗滌劑中的新產品，含鹼性蛋白酶，能去除衣物上的血漬和蛋白污物，但使用時注意不要接觸皮膚，以免損傷皮膚表面的蛋白質，引起皮疹、濕疹等過敏現象。

D. 蛋白酶k 究竟是37度還是65度

曾經作過腦組織的TUNEL，也指導過別人做心肌的TUNEL，談談我的意見：
蛋白酶K37度30min，好像有點偏長，我是10min。
你是NBT/BICP顯色的話，
這說明你用的是AP系統，而不是HRP
這樣的話就不是用3%H2O2來去除內源性酶的了，（H2O2是去過氧化氫酶的）；
你現在要去除的是內源性鹼性磷酸酶，要用乙酸或左旋咪唑：
我們用的是乙酸，效果很是不錯，要不你也試試用乙酸吧，
方法：新鮮配置的3%乙酸（pH2.5）孵育（我當時是37℃ 10min）
可以復染：
用核固紅（fast red，也有人叫 快紅）

E. 10 mg/mL蛋白酶K怎麼配

0.1g 蛋白酶K溶解於10mL去離子水中
建議：蛋白酶K最好不要稱量了，因為本身量就很少，稱量過程中會有損失，你就看看包裝上是多少克或者多少毫克，按比例算一下需要多少水，加進去就好了。

F. 蛋白酶k的簡介

從林伯氏白色念球菌（tritirachium album limber）中純化得到。據資料顯示：該酶有兩個ca2+結合位點，它們離酶的活性中心有一定距離，與催化機理並無直接關系。然而，如果從該酶中除去ca2+，由於出現遠程的結構變化，催化活性將喪失80%左右，但其剩餘活性通常已足以降解在一般情況下污染酸製品的蛋白質。所以，蛋白酶k消化過程中通常加入edta（以抑制依賴於mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化對蛋白酶k具有較強耐性的蛋白，如角蛋白一類，則可能需要使用含有1mmol/l ca2+而不含edta的緩沖液。在消化完畢後、純化核酸前要加入EGTA（ph8.0）至終濃度為2mmol/l,以鰲合ca2+。
蛋白酶K，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由於蛋白酶K在尿素和SDS中穩定，還具有降解天然蛋白質的能力，因而它應用很廣泛，包括制備脈沖電泳的染色體DNA，蛋白質印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml。在較廣的pH范圍內（pH 4-12.5）均有活性。
推薦反應緩沖液：50mMTris-HCl(pH7.5),10mM CaCl2 。
蛋白酶K配製標准：20mg/ml蛋白酶K配製標准（proteinase K）：將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中，輕輕搖動，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然後分裝成小份貯存於-20℃。

G. 蛋白酶K溶液怎麼配製

蛋白酶K溶液怎麼配製
蛋白酶，顧名思義，降解蛋白的酶，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，用於生物樣品中蛋白質的一般降解。 在RNA提取中，蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶，防止RNA的降解。
蛋白酶K廣泛應用於分子生物學，葯理學等科研方面。一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關的絲氨酸蛋白酶，具有很高的比活性。一般儲存在-20°C，避光防潮密閉乾燥 蛋白酶是所有能夠催化分解蛋白質的酶類的統稱

H. 我做的TUNEL，說明書上說是要20ug/ml的蛋白酶k，我買來的蛋白酶K是20mg/ml的不知道怎麼稀釋

1mg=1000ug，這個濃度不用稀釋了，用的時候1ml反應體系中加1ul就可以了，終濃度為20ug/ml。蛋白酶k分不分裝應該都可以，因為保存溫度是-20℃，是液態的，用的時候不需要融解，所以直接拿出來用就可以了。保存時間應該挺長的，具體看說明書。good luck！

I. 提取組織中DNA時蛋白酶K怎麼配

估計你看的是分子克隆2吧。

在分3中(中文p1656)用水就可以直接溶解了。

如果想用你說的溶液的話，可以直接配50 mL上述緩沖液 (50 mM Tris-HCl, 1.5 mM CaAc2, pH 8.0)就可以了，最好高壓滅菌一下，用時直接取來溶解蛋白酶K。

J. 請教：用蛋白酶K消化組織提取DNA，滅活後是否需

用蛋白酶K消化組織提取DNA，滅活後是否需
1、你說的那種方法是用蛋白酶K消化然後酚氯仿抽提的方法,這種方法中蛋白酶K可以消化掉各種蛋白,釋放出各種核酸(包括RNA),RNaseA可以用來消化掉RNA,那麼就只剩下DNA了.這種方法中蛋白酶K和RNaseA是必須的,不加蛋白酶K的話核酸釋放不充分,而且提取的DNA中容易出現蛋白污染,不加RNaseA的話可能會導致提取的DNA中殘留有RNA.
2、提取貼壁細胞的方法很多,你用PBS洗滌一下細胞,然後刮下來或者用酶消化細胞後離心收集之後就可以用隨便什麼方法提取了,說的那種方法可靠的,嫌麻煩的話就用試劑盒,比如天根的血液組織細胞基因組提取試劑盒(DP304)