島津高效液相色譜儀使用方法

A. 島津LP-10ATVP操作方法

1．目的
規范島津LC-10AT型高效液相色譜系統的使用和維護。
2．范圍
本規程適用於島津LC-10AT型高效液相色譜系統的使用和維護。
3．職責
質檢室儀器分析員負責島津LC-10AT型高效液相色譜系統的日常使用和維護。
4．規程
4.1 系統組成：本系統由2個LC-10ATvp溶劑輸送泵（分主/A泵和副/B泵）、Rheodyne 7725i手動進樣閥、SPD-10Avp紫外-可見檢測器、SCL-10AVP系統控制器、CLASS-VP（Ver. 6.1）工作站和IBM台式電腦等組成。
4.2 准備
4.2.1使用前應根據待檢樣品的檢驗方法准備所需的流動相，用合適的0.45μm濾膜過濾，超聲脫氣20min。
4.2.2 根據待檢樣品的需要更換合適的色譜柱（柱進出口位置應與流動相流向一致）和定量環。
4.2.3 配製樣品和標准溶液（也可在平衡系統時配製），用合適的0.45μm濾膜過濾。
4.2.4 檢查儀器各部件的電源線、數據線和輸液管道是否連接正常。
4.3 開機
4.3.1接通電源，依次開啟不間斷電源、B泵、A泵、檢測器、系統控制器，待泵和檢測器自檢結束後，打開電腦顯示器、主機。
4.3.2啟動CLASS-VP工作站
4.3.2.1確認儀器、系統控制器啟動後，打開計算機電源，並從Windows的任務欄中選擇Start > Programs > Chromatography > CLASS-VP以打開CLASS-VP菜單窗口。（可以通過桌面上的快捷方式，迅速打開CLASS-VP主菜單）
4.3.2.2 在Main Menu 窗口中雙擊Instrument圖標。
4.3.2.3 輸入用戶名和口令，以登錄CLASS-VP。預設情況下，已經用戶名和口令分別為「system」和「2001」。
4.3.2.4 當SCL-10Avp發出蜂鳴聲後，說明已建立與計算機之間的連接，Instrument窗口打開。
4.3.2.5 啟動色譜圖監視器
4.3.2.5.1 從Windows任務欄中選擇Program> Chromatography > Chromatogram Monitor 以打開 Chromatogram Monitor 窗口。
4.3.2.5.2 根據需要設置受監視項的類型和格式。
4.3.2.6 啟動離線處理
4.3.2.6.1 在 Main Menu 窗口中雙擊 Offline Processing 圖標。
4.3.2.6.2 雙擊為數據採集而設置的儀器名稱，以打開儀器進行離線處理。
4.4 CLASS-VP初始系統設置（設置方法預設參數）
4.4.1 單擊「New」按鈕，並接著單擊 New Method 即可初始化方法參數。
4.4.2 從Option 選項卡的Method菜單中選擇命令，並在對話框中更改每條命令的參數，以選擇常用的選項。
4.4.3 選擇File > Method > Save as Default 即可將在此處設置的選項保存成預設參數。
4.5 設置分析參數
4.5.1 設置LC參數
4.5.1.1 設置新的分析參數時，請從通過單擊「New」按鈕打開的列表中選擇New Method，則將載入預設方法參數，且方法文件名「Untitled.met」將顯示在LC Setup Assistant窗口中，通過單擊Open按鈕即可打開現有的方法文件。

B. 島津LC-20A高效液相色譜測定方法精密度、檢出限、准確度的操作步驟是什麼

精密度，准確度都是根據方法配製溶液，進樣來計算得出來的。RSD相對標准偏差是進6針樣品來計算的，准確度是通過加標回收率來計算的，含量在80%-120%之間。檢出限即配製溶液不斷稀釋使其信噪比達到3:1，設置儀器自己顯示結果。

C. 高效液相色譜儀的使用和原理分析

高效液相色譜儀(HPLC)是分析實驗室常用的測試儀器之一，其應用越來越廣泛。此種儀器在使用過程中，難免會出現各種各樣的問題，並將直接影響到所測數據的准確性和儀器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因，即可清楚預防和排除這些故障的方法，就可正確地使用儀器並最大限度地發揮儀器的性能。今天我們要從以下幾個方面和您分享下在使用高效液相色譜儀中需注意的幾個問題。

一、使用試管的問題

1、試管的潔凈問題。

高效液相色譜分析法是一個很靈敏的分析方法，如果因使用不潔凈的試管，便會影響試驗結果的准確性。例如，在用甲醇作溶劑來溶解樣品時，所用的小試管是用橡膠塞來做蓋子的，因此，在每次進樣時，都有一個保留時間固定的干擾峰存在，後經證實，此干擾峰是由甲醇浸泡橡膠塞而溶下的組分所產生，換用玻璃試管後，干擾峰消除。

2、塑料試管的溶解問題。

近年來，一次性塑料試管給試驗人員帶來了極大的方便，但是，在使用過程中一定要注意有機溶劑對試管的溶解現象，在利用此種試管提取樣品時，有些有機溶劑(如氯仿等)對管壁有溶解現象，這些被溶解下來的物質有時也能在檢測器上產生信號，從而干擾樣品的測定。這時，可用相同的實驗條件先行試驗一下，看看不含被抽提物時，提取液在檢測器上能否產生干擾信號，如確有干擾信號存在，就只能換用耐有機溶劑的玻璃試管了。

3、被測樣品在試管壁上的吸附問題。

這個問題也應引起注意，否則也會影響測試結果的准確性，在治療葯物監測(Therapeutic Drug Monitoring,TDM)中，有些被測葯物如阿米替林，丙咪嗪等易吸附在玻璃試管的管壁上，因此，操作中宜採用聚丙烯管，為防止提取中吸附現象的發生，可採用0.5%的已二胺已烷液做為提取劑，可有效地防止吸附。

二、操作進樣閥的問題

目前，在分析型高效液相色譜儀中常用的進樣閥是7725型進樣閥，其內部的六通閥結構使進樣操作非常方便，但是，如果使用不當，也會帶來問題。例如，在高效液相色譜法的試驗過程中，有時會有異常色譜峰的出現以及重現性不好的問題，這主要是由於操作方法不當所引起，要想解決此類問題，需從以下幾個方面入手。

1、進樣量的控制。

用進樣閥來進樣時，閥內的樣品環是定量的，(一般分析型進樣閥的樣品環體積為20ul)，由於進樣時，注射到進樣閥內的樣品溶液在樣品環的管路中有徑向的速度梯度(即管軸處比管壁處的液流速度快)。因此，要想使樣品環中充滿樣品溶液，從而使用進樣閥來准確地定量，則必須使進樣量大於樣品環體積的2倍。如果用注射器來控制進樣量，則最大隻能注射樣品環體積1/2的量，這樣才能防止部分樣品由溢流管溢出從而導致定量分析的誤差。

2、進樣閥的清潔問題。

如果樣品環中有上次進樣時樣品的殘留，必然會污染下次注射進的樣品，為防止這種現象的發生，應按下列步驟操作：a.進樣閥有2個位置，INJECT和LOAD。首先在LOAD位置時，以注射器將流動相注入進樣閥內清洗幾次，每次用量大約40ul；b.然後將進樣閥板手扳至INJECT位置時，再以流動相清洗幾次，每次用量還是40ul；c.最後，再將樣品注射到進樣閥里。

按照上述的步驟操作，可以避免由進樣閥引起的污染，從而使干擾峰消除並提高分析結果的准確性。

3、進樣閥溢流管的堵塞。

有時，進樣閥的溢流管會發生堵塞現象，向進樣閥內注射樣品時，注射針推不動。此故障是由於溢流管的堵塞所致。堵塞的原因多半是由於溶解樣品的流動相用的是鹽溶液，而其中的鹽在溢流管的排空埠處結晶所致。此時，可用小燒杯盛少量蒸餾水對溢流管口稍加浸泡，埠處鹽的結晶就能被溶解掉，故障排除。如能在每次進樣完成之後，用蒸餾水反復沖洗至溢流管中的鹽分全部沖出，則可避免此故障的發生。

三、流動相(MOBLLE PHASE)的問題

甲醇和乙腈在高效液相色譜分析法中常常被用來配製流動相。高效液相色譜法中常用的試劑最好是高等級的專用試劑，如色譜純試劑。在要求不太嚴格時，優級純甚至分析純的試劑也能用。高效液相色譜分析法中常用的是紫外檢測器，因此，從降低基線噪音和提高分析靈敏度上來考慮，應該使用紫外吸收小且雜質含量少的色譜純試劑。

1、流動相的過濾。

配製好的流動相在使用前一定要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來過濾。這是因為溶液中含有很多肉眼難以發現的微小顆粒，如果不把它們濾除掉，就會堵塞泵口、柱頭上的過濾器，這樣就堵塞了流動相的正常通道，使色譜柱的阻力增加，柱壓升高，柱效下降。碰到這種情況時，要換用經過濾的流動相，並將堵塞的濾器拆下來浸泡在20%的硝酸水溶液中以超聲波清洗機清洗20分鍾，以除去濾片上的堵塞物。

2、流動相的脫氣。

流動相在使用前必須脫氣，以盡可能的除去溶解在流動相中的氣體，否則，這些氣體會使柱填料的性能降低，還能夠對檢測器的信號產生很大的干擾。脫氣有多種方法，如超聲脫氣、真空脫氣、氮氣脫氣等。真空脫氣法和氮氣流脫氣法是目前最常用的脫氣法。水和甲醇混合後會產生大量的氣泡，如果不脫氣就使用，氣泡就會進入色譜柱和檢測器，並將影響分析工作的正常進行。

四、色譜柱的使用和保養

色譜柱是高效液相色譜儀最主要的部件，被測物質能否被很好的分離和測定，色譜柱的性能起著決定性的作用。因此，在日常工作中，應特別注意色譜柱的正確使用和維修保養，以延長色譜柱的使用壽命。

1、使用預柱和保護柱。

預柱(pre-column)安裝於泵和進樣器之間，它給色譜柱中的流動相提供了完全的平衡，並防止了對柱填料有破壞作用的組分或污染物進入色譜柱。保護柱(guard column)可以阻擋能夠牢固地吸附於色譜柱上的組分進入色譜柱，保護柱應與色譜柱的填料相同。預柱和保護柱可以經常更換，而不需要經常更換色譜柱，這就延長了色譜柱的使用壽命。

2、防止氣體進入色譜柱。

有些色譜柱(如凝膠柱)是不允許氣泡進入的，否則將會使柱效降低甚至形成微小的難以驅除的氣室。因此，為了防止氣泡進入色譜柱，一定要使用經過脫氣的流動相，並且要嚴格按照下列步驟來安裝色譜柱。a.拆卸下色譜柱入口處的密封螺絲，觀察是否有溶劑滲出；b.如有溶劑滲出，即可將色譜柱接到管路上，以避免氣泡的進入；c.如無溶劑滲出時，表明色譜柱的此端已經進去空氣了，此時，可將色譜柱的出口端接到進樣閥上，以流動相來反方向沖洗色譜柱，以便將柱內的空氣排除。最好以0.2ml/min的小流量來沖色譜柱，如果溶劑的流速太快或者是壓力突然的上升都將會導致柱性能的降低；d.如果流出的溶劑里不含有氣泡，說明柱內的氣體已經被排出了，再將色譜柱以正確的方向接好，這樣氣泡就進不到色譜柱裡面了。

3、色譜柱的清洗。

為了不使被測物質和雜質停留在色譜柱中，在每次的樣品分析工作完成之後，都應及時地清洗色譜柱。首先要用對被測樣品洗脫能力強的溶劑來洗脫色譜柱，以分析工作中常用的反相色譜分析法為例，因其先流出的物質是極性大的物質，此時應用100%的甲醇或使用異丙純、四氫呋喃等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內的極性小的物質洗脫下來，洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可。如果流動相是緩沖溶液，則應先用蒸餾水來沖洗色譜柱，以沖掉柱內的鹽，然後再用合適的溶劑來沖洗。

凝膠濾過色譜法(Gel Filtration Chromatography)中所使用的凝膠柱常用緩沖溶液做流動相，用完之後當然要用蒸餾水來沖洗。如果是連續操作，可以將緩沖溶液置於柱內過夜，但最好是維持小流速(＜0.5ml/min)以防止緩沖鹽的析出，如果流動相中含有鹵化物，即使是停一夜，也必須要用蒸餾水將色譜柱沖洗干凈，以防止它們對柱體的腐蝕。

4、色譜柱的存放。

如果色譜柱暫時不用，存放時要注意以下幾點：

a.幾天之內的短期放置，應先用溶劑沖洗好色譜柱(如凝膠柱則用蒸餾水來沖洗)，再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。

b.如果色譜柱長期不用，僅用上述方法來處理就不行了，這時應使用色譜柱使用說明書中所指明的溶劑來充滿色譜柱，反相柱一般使用甲醇，正相柱則可用正已烷或庚烷，而凝膠柱則不能用水了，因柱內如果有微生物的生長則會使柱效降低，此時應用0.05%的NaNs水溶液(防腐劑)來沖洗色譜柱，再將色譜柱封嚴。色譜柱長期放置時，一定要將色譜柱的兩端封嚴，以防止由於溶劑揮發而造成的柱填料干縮現象，因這可導致柱效的嚴重降低。

c.色譜柱應貯存在室溫下，如果放置於0℃以下的環境里，柱內就會結冰，這也將導致柱效的降低。

高效液相色譜儀的構造高效液相色譜儀（HPLC）一般由高壓輸液系統、進樣系統、分離系統、記檢測系統、數據處理系統等幾部分組成。制備型儀器還需配有餾份收集系統。為了取得較好的分析結果，HPLC儀器對於准確度、精確度、靈敏度及結果重現性有較高的要求。

高效液相色譜儀的工作原理

儲液器中的流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內，由於樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式列印出來。

(3)島津高效液相色譜儀使用方法擴展閱讀：

高效液相色譜儀的構造高效液相色譜儀（HPLC）一般由高壓輸液系統、進樣系統、分離系統、記檢測系統、數據處理系統等幾部分組成。制備型儀器還需配有餾份收集系統。為了取得較好的分析結果，HPLC儀器對於准確度、精確度、靈敏度及結果重現性有較高的要求。

A

BOUT

高壓輸液系統

高壓輸液系統包括：溶劑儲液瓶、溶劑脫氣裝置、高壓輸送泵以及梯度洗脫裝置。其中，高壓輸液泵是高效液相色譜儀的主要部件之一，輸送壓力達150—350×105Pa。輸液系統要為HPLC儀器提供流量恆定、准確、無脈沖的流動相，流量的精度和長期的重復性要好，同時還要提供精度好、准確度高、重現性好的多元溶劑梯度。因此，輸液泵的好壞直接影響著整個系統的質量和分析結果的可靠性。

進樣系統：進樣能在試樣引入色譜柱，有六個介面：1,4之間接定量環；2接高壓泵；3接色譜柱；5,6接廢液管。

色譜分離系統：色譜柱通常為不銹鋼柱，內裝各種填充劑。常用的填料為硅膠，可用於正相色譜;化學鍵合固定相，根據鍵合的基團不同，可用於反相或正相色譜。其中、最常用的是十八烷基鍵合硅膠，即ODS柱，可用於反相色譜或離子對色譜。

檢測系統：檢測系統用於連續檢測色譜柱流出的物質，進行定性定量分析。要求其靈敏度高、噪音小、基線穩定、響應值的線性范圍寬等。近年來各國都在研究開發新的檢測技術，進一步擴大了HPLC的應用。

根據檢測需要的不同檢測器可分為紫外檢測器(UVD)、示差折光檢測器(RID)、電化學檢測器(ECD)、紅外檢測器(IRD)、核磁共振檢測器(NMRD)、質譜檢測器(MSD)、蒸發光散射檢測器(ELSD)、小角度激光散射檢測器(LALLSPD)。

數據處理系統：高效液相色譜的分析結果除可用記錄儀繪制譜圖外，還可使用微處理機和色譜數據工作站來記錄和處理色譜分析的數據。

D. 高效液相色譜質朴聯用儀的用法

答案隱藏其中，耐心看吧
LCMS 2010A高效液相色譜質譜聯用儀(日本島津公司) ，配有熒光檢測器的Agilent 2010 液相色譜儀（美國惠普公司），Millipore SAS 67120 超純水儀（Millipore Inc,USA）。LIle(成都化學試劑廠)；DIle和DalloIle（美國Newjersey公司）,LalloIle(瑞士Fluka公司）,其它16對氨基酸（His、Ser、Asp、Glu、Cys、Thr、Try、Leu、Phe、Ala、Tyr、Lys、Pro、Val、Met和Arg）及甘氨酸標准品（Gly）（成都化學試劑廠）；鄰苯二甲醛(OPTA)(瑞士Fluka公司)，N乙醯L半胱氨酸（AcCys）(美國Aldrich公司)；醋酸銨為國產分析純試劑；甲醇為國產色譜純試劑。水為超純水。

2.2 液相色譜條件

色譜柱：ShimPack VPODS 5 μm,150 mm×2.0 mm i.d.; 流動相：甲醇0.05 mol/L醋酸銨溶液（40∶60，V/V）；流速：0.2 mL/min；柱溫：35℃；進樣量：5 μL。熒光檢測波長：λex 345 nm，λem 445 nm。

2.3 質譜條件

電噴霧離子化源(ESI)；負離子檢測方式；選擇離子監測（SIM），m/z 391[M-H]-；曲型脫溶劑裝置（CDL）溫度：250℃，加熱塊（block）溫度：200℃；毛細管電壓：25 V；檢測電壓：+1.3 kV；霧化氣：N2，流速，1.5 L/min；乾燥氣：N2，流速，2.0 L/min 。

E. 島津液相色譜儀梯度程序怎麼設置

做實驗時，需要設置梯度洗脫。對於組分復雜的樣品，採用一種色譜體系，往往很難得到理想的分離效果，要麼分離時間太長，要麼分離度太差。這種情況，採用梯度洗脫就可以縮短分析時間，提高分離效果。1儀器島津LC2010CHT型高效液相色譜儀（四元泵、在線脫氣、自動冷卻裝置、全自動進樣器、紫外檢測器)：梅特
勒-托利多AB135-S雙量程電子天平；超聲波清洗器。色；實驗用水採用雙重燕餾水；其它試劑均為分析純。進行高效液相色譜分析時，兩種洗脫方法：等度洗脫和梯度洗脫。等度洗脫是由不同溶劑構成的固定比例的流動相，在整個洗脫過程中，流動相的極性、離子強度、DH值等因素皆保持不變。對於較復雜的中葯成分來說，只單純的用等度洗脫來分析中葯的成分，顯然有些力不從心，為此採用梯度洗脫，在此過程中可調節流動相的極性，改善樣品中每個組分的分離度從而達到徹底分離的目的。

F. 島津高相液相色譜儀如何設置自動關機

摘要 1開機1.1准備流動相，過濾及超聲脫氣，樣品過濾並安裝色譜柱。1.2打開SPD-20A，CTO-10Asvp,SIL-20A電源，待各單元自檢通過,再打開LC-20AT電源。1.3排氣操作：打開LC-20AT泵排空閥，按「Purge」鍵，泵開始排氣運行；按SIL-20A自動進樣器「Purge」鍵，開始排氣。1.4在計算機中雙擊「LCSOLUTION」圖標，進入工作站，再雙擊「儀器1」進入實時分析窗口。2編輯分析方法2.1選擇「新建方法」：分別設定Detector  A  SPD-20A的波長， End Time（採集停止時間）， Pump泵參數（流量，最大壓限等，在「高級」選項中還可以設置梯度進樣），CTO-10Asvp柱溫等。2.2保存方法：選擇「方法另存為」，文件命名為「*****.lcm」並保存方法。2.3 查看及修改方法: 雙擊「LCSOLUTION」圖標,點擊「儀器1」（此圖標為一隻羽毛筆在紙上書寫），出現「分析編輯器」，點擊「文件」項下「打開方法文件」調出所需方法文件，即可查看或修改文件，如波長，流速等，修改以上參數後，點擊保存，退出。3 系統運行3.1點擊圖標「下載」傳輸方法，點擊圖標「儀器開關」，系統開始運行。3.2檢查各單元參數應與方法設定一致，等待系統平衡及儀器出現綠色「就緒」。註：一般情況下，由於流動相交換平衡時間不定。可以觀察SPD—20A檢測器吸收變化,如果吸收值穩定不變，即認為接近平衡，可以調零等待，確認不變後，可以進樣。

G. 島津高效液相色譜儀液相驗證中最小檢測濃度的具體操作步驟怎麼做

用微量進樣器注入20 μL 1×10-7 g/mL 萘－甲醇溶液，記錄色譜圖，由色譜峰高和基線雜訊－峰高計算，按照下式計算最小檢測濃度：（以20μL進樣量計）：
cL=2Ni*c*V/20H
式中：
cL——最小檢測濃度，g/mL；
Ni——雜訊峰高，Au（或V）；
c——樣品濃度，g/mL；
H——樣品峰高，Au（或V）。
V——進樣體積，μL

按標准就是以上，當然也可以用其他你更關注的樣品

朋友可以到行業內專業的網站進行交流學習！
分析測試網路網這塊做得不錯，氣相、液相、質譜、光譜、葯物分析、化學分析。這方面的專家比較多，基本上問題都能得到解答，有問題可去那提問，網址網路搜下就有。

H. 大連江申液相色譜儀LC-10P使用說明書

高效液相色譜儀使用說明
型號：LC-10AT 產地 日本島津 型號： L C - 10A T 高效液相色譜儀是日本島津公司 1996 年的產品, 檢測器為可變波長紫外檢測 器, 色譜柱為島津公司的 ODS - C18 。 2. 用途： 用途： 高效液相色譜法只要求樣品能製成溶液, 不受樣品揮發性的限制,流動相可選擇的范圍寬, 固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩定和非揮發性的、 離解的和非離解的以及各種分子 量范圍的物質。 與試樣預處理技術相配合，HPL C 所達到的高解析度和高靈敏度，使分離和同時測定 性質上十分相近的物質成為可能， 能夠分離復雜相體中的微量成分。 隨著固定相的發展, 有 可能在充分保持生化物質活性的條件下完成其分離。由於 HPL C 具有高解析度、高靈敏 度、速度快、色譜柱可反復利用, 流出組分易收集等優點,因而被廣泛應用到生物化學、食 品分析、醫葯研究、環境分析、無機分析等各種領域。高效液相色譜儀與結構儀器的聯用 是一個重要的發展方向。 3. 測定原理 高效液相色譜儀的系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。 儲液器中的流動相被高壓泵打入系統， 樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱 (固定相) 內, 由於樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數, 在兩相中作相對運 動時, 經過反復多次的吸附- 解吸的分配過程, 各組分在移動速度上產生較大的差別, 被 分離成單個組分依次從柱內流出, 通過檢測器時, 樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄 儀，數據以圖譜形式列印出來。 4. 使用方法 4.1 系統組成：本系統由 1 個 LC-10ATvp 溶劑輸送泵、Rheodyne 7725i 手動進樣閥、 SPD-10Avp 紫外-可見檢測器、色譜數據工作站和電腦等組成，另外還包括列印機、不間 斷電源等輔助設備。 4.2 准備 4.2.1 准備所需的流動相，用合適的 0.45?m 濾膜過濾，超聲波脫氣 20min。 4.2.2 根據待檢樣品的需要更換合適的洗脫柱（注意方向）和定量環。 4.2.3 配製樣品和標准溶液（也可在平衡系統時配製） ，用合適的 0.45?m 濾膜過濾。 3.2.4 檢查儀器各部件的電源線、數據線和輸液管道是否連接正常，特別注意輸液管道內 是否有氣泡。 4.3 開機：接通電源，依次開啟不間斷電源、溶劑輸送泵、先將機器預熱半小時，這時 的流動相用 85％甲醇溶液（已脫氣） ，而且要時刻注意輸液管道內是否有氣泡，如有氣泡 要進行排氣。預熱半小時後，開啟檢測器，待檢測器自檢結束後，打開列印機、電腦顯示 器、主機，最後打開色譜工作站。 4.4 各種參數設定 4.4.1 波長設定：在檢測器顯示初始屏幕時，按[func]鍵，用數字鍵輸入所需波長值，按 [Enter]鍵確認。按[CE]鍵退出到初始屏幕。 4.4.2 流速設定：在輸送泵顯示初始屏幕時，按[func]鍵，用數字鍵輸入所需的流速（柱在 線時流速一般不超過 1ml/min） ，按[Enter]鍵確認。按[CE]鍵退出。 4.5 更換流動相並排氣泡 4.5.1 將輸送管道的吸濾器放入裝有準備好的流動相的儲液瓶（已排氣）中； 4.5.2 逆時針轉動泵的排液閥 180 度，打開排液閥； 4.5.3 按泵的[purge]鍵，pump 指示燈亮，泵大約以 2ml/min 的流速沖洗，3min（可設定） 後自動停止； 4.5.4 將排液閥順時針旋轉到底，關閉排液閥。 4.5.5 如管路中仍有氣泡，則重復以上操作直至氣泡排盡。 4.5.6 如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下連接管，放入廢液瓶中，設流速為 5ml/min，按[pump]鍵，沖洗 3min 後再按[pump]鍵停泵，重新接上柱並將流速重設為規定 值。 4.6 平衡系統 4.6.1 按《大連江申色譜數據工作站操作規程》打開「在線色譜工作站」軟體，輸入實驗信 息並設定各項方法參數後，按下「數據收集」頁的 [查看基線] 按鈕。 4.6.2 等度洗脫方式 4.6.2.1 按輸送泵的[pump]鍵，泵啟動，pump 指示燈亮。用檢驗方法規定的流動相沖洗系 統，一般最少需 6 倍柱體積的流動相。 4.6.2.2 檢查各管路連接處是否漏液，如漏液應予以排除。 4.6.2.3 觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動應不超過 1MPa。如超過則可初步判斷為柱 前管路仍有氣泡，按 3.5 操作。 4.6.2.4 觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移<0.01mV/min，雜訊為<0.001mV 時，可認為 系統已達到平衡狀態，可以進樣。 4.7 測定步驟 4.7.1 計算校正因子 4.7.1.1 用編輯∈實驗參數編輯實驗參數在編輯實驗參數時， 紀錄圖譜名要按照校正文件名 的格式輸入 xxxx0101. 4.7.1.2 用編輯∈積分定量參數對話框，選擇單點外標法 4.7.1.3 用編輯∈報告參數對話框編輯好相應的參數，選擇校正實驗檢查框 4.7.1.4 用編輯∈校正∈校正實驗參數對話框編輯相應的校正參數及方式， 校正文件名前綴 必須與編輯∈實驗參數的文件名前 4 位一致 4.7.1.5 用編輯∈校正編輯定量峰表對話框編輯需要的校正的色譜峰的保留時間、樣品名、 每點的含量、峰標志及誤差，編輯完成後確認，以後∈校正∈計算校正因子命令利用定量 峰表進行峰的匹配及計算。 4.7.1.6 用∈操作∈數據採集功能進行求校正因子的實驗，將標准樣品進樣，進樣前按檢測 器[zero]鍵調零，按軟體中 [零點校正] 按鈕校正基線零點，再按一下 [查看基線] 按鈕使 其彈起。 4.7.1.7 用∈操作∈峰檢測功能對圖譜進行峰檢測， 完成後用∈操作∈校正∈計算校正因子 及繪制標准曲線。 4.7.2 進樣 4.7.2.1 進樣前按檢測器[zero]鍵調零，按軟體中 [零點校正] 按鈕校正基線零點，再按一 下 [查看基線] 按鈕使其彈起。用試樣溶液清洗注射器，並排除氣泡後抽取適量 4.7.2.2 進行樣品分析，用∈操作∈數據採集對樣品進行數據採集，並把編輯∈報告參數把 校正文件名填入校正文件名編輯框，然後進測定樣。 4.7.2.3 用∈操作∈峰檢測， 對採集的色譜峰進行檢測， 之後工作站自動裝入外標因子文件， 計算出含量。 4.7.2.4 列印報告 用∈列印∈列印分析報告，列印機輸出分析報告。 4.8 關機 樣品測定結束後，將檢測器關機，將輸送管道的吸濾器放入裝有 85％甲醇溶液（已脫氣） 的儲液瓶，進行測定系統清洗，半小時後關機。 5. 注意事項 5.1 流動相內有氣泡, 關閉泵, 打開泄壓閥, 打開 purge 鍵, 清洗脫氣, 氣泡不斷從過濾器冒 出, 進入流動相, 無論打開 purge 鍵幾次,都無法清除不斷產生的氣泡。 原因過濾器長期沉浸於乙酸銨等緩沖液內, 過濾器內部由於黴菌的生長繁殖,形成菌團, 阻塞了過濾器,緩沖液難以流暢地通過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經過濾器進入流動 相。 處理過濾器浸泡於 5 %硝酸溶液中,超聲清洗幾分鍾即可;亦可將過濾器浸泡於 5 %硝酸 溶液中 12～36 小時, 輕輕震盪幾次, 再將過濾器用純水清洗幾次, 打開泄壓閥, 打開 p urge 鍵,清洗脫氣, 如仍有氣泡不斷從過濾器冒出, 繼續將過濾器浸泡於 5 %硝酸溶液中, 如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,說明過濾器內部的黴菌菌團已被硝酸破壞, 流動相可以 流暢地通過過濾器。打開泄壓閥,打開泵,流速調至 1. 0～3. 0ml/ min ,純水沖洗過濾器 1 小 時左右。即可將過濾器清洗干凈。關閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時即可。 5.2 柱壓高原因(1) 緩沖液鹽分如(乙酸銨等) 沉積於柱內; (2) 樣品污染沉積。 處理對於第一種情況先用 40～50 ℃的純水,低速正向沖洗柱子, 待柱壓逐漸下降後, 相 應提高流速沖洗, 柱壓大幅度下降後, 用常溫純水沖洗, 之後用純甲醇沖洗柱子 30 分鍾; 對於第二種情況,由樣品的沉積引起污染的 C18 柱,和純水反向沖洗柱子, 然後換成甲醇沖 洗, 接著用甲醇+ 異丙醇(4 + 6) 沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定) , 再用 換成甲醇沖洗, 然後用純水沖洗, 最後甲醇沖洗正向沖洗柱子 30 分鍾以上。 5.3 既無壓力指示,又無液體流過 原因(1) 泵密封墊圈磨損; (2) 大量氣泡進入泵體。 處理對於第一種情況,更換密封墊圈;對於第二種情況,在泵作用的同時, 用一個 50ml 的 玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。 5.4 壓力波動大,流量不穩定. 原因系統中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。 處理工作中注意觀察流動相的量, 保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸入空氣,流動 相要充分脫氣[2 >。 如為單向閥和閥座之間夾有異物, 拆下單向閥, 放入盛有丙酮的燒杯用 超聲波清洗. 5.5 出峰不佳,峰分叉。 原因(1) 色譜柱被污染; (2) 柱頭填料塌陷。 處理對於第一種情況, 先用純水反向沖洗柱子, 然後換成甲醇沖洗, 接著用甲醇+ 異丙 醇(4 + 6) 沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定) , 再換成甲醇沖洗, 然後用純 水沖洗,最後甲醇沖洗正向沖洗柱子 30 分鍾以上。 如沖洗後依然出峰不佳,則考慮第二種情 況。對於第二種情況,擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結或塌陷。去除硬結部分(污染的填料) , 裝入新填料, 滴一滴甲醇, 填料下陷, 再填, 用與柱內徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊, 再填平, 滴甲醇, 再壓緊反復幾次, 直至裝滿填平[2 >。柱頭用甲醇沖洗干凈, 擦凈柱外壁 的填料, 擰緊柱頭,用純甲醇沖洗 30 分鍾以上。 5.6 峰面積重復性不佳。 原因(1) 進樣閥漏液; (2) 加樣針不到位。 處理對於第一種情況更換進樣閥墊圈; 對於第二種情況保證加樣針插到底,注射樣品溶 液後須快速、平穩地從 LOAD 狀態轉換到 INJ EC T 狀態,以保證進樣量的准確。日常工 作中, 液相色譜儀的保養非常重要, 如要注意不要讓空氣進入輸液系統和高壓泵中, 儲液 器內的溶液如長時間未用應清洗儲液器並更換溶液, 每次用完色譜儀後緩沖液要用純水沖 洗干凈,防止無機鹽析出或沉積; 樣品的前處理也很重要,任何樣品都要盡可能地去除雜質, 完全溶解, 盡量減少對色譜柱的污染, 以延長色譜柱的使用壽命, 同時避免注射過濃的樣 品溶液, 以免殘留液在進樣閥內析出固體引起堵塞; 色譜柱作好標記,用於不同分析目的 的色譜柱不要混用等。