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常用的選擇沉澱方法

發布時間:2022-04-08 15:01:08

1. 常用蛋白質沉澱方法有哪些有哪些應用實例求答案

沉澱可以是由蛋白質變性從而產生沉澱,也可以是由於鹽析。
蛋白質變性是指光照,熱,有機溶濟以及一些變性劑(如重金屬鹽)的作用時蛋白質的空間結構被破壞,使得蛋白質喪失活性,該過程不可逆。
鹽析是指向蛋白質的溶液中加入輕金屬鹽,使得蛋白質沉澱析出,這是由於加入鹽降低了蛋白質得溶解度而析出,該過程可逆,加水蛋白質又會溶解。
(一)材料的預處理及細胞破碎
分離提純某一種蛋白質時,首先要把蛋白質從組織或細胞中釋放出來並保持原來的天然狀態,不喪失活性。所以要採用適當的方法將組織和細胞破碎。常用的破碎組織細胞的方法有:
1. 機械破碎法
這種方法是利用機械力的剪切作用,使細胞破碎。常用設備有,高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等。
2. 滲透破碎法
這種方法是在低滲條件使細胞溶脹而破碎。
3. 反復凍融法
生物組織經凍結後,細胞內液結冰膨脹而使細胞脹破。這種方法簡單方便,但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜採用此法。
4. 超聲波法
使用超聲波震盪器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎。
5. 酶法如用溶菌酶破壞微生物細胞等。
(二) 蛋白質的抽提
通常選擇適當的緩沖液溶劑把蛋白質提取出來。抽提所用緩沖液的pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應根據欲制備的蛋白質的性質而定。如膜蛋白的抽提,抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑(十二烷基磺酸鈉、tritonX-100等),使膜結構破壞,利於蛋白質與膜分離。在抽提過程中,應注意溫度,避免劇烈攪拌等,以防止蛋白質的變性。
(三)蛋白質粗製品的獲得
選用適當的方法將所要的蛋白質與其它雜蛋白分離開來。比較方便的有效方法是根據蛋白質溶解度的差異進行的分離。常用的有下列幾種方法:
1. 等電點沉澱法
不同蛋白質的等電點不同,可用等電點沉澱法使它們相互分離。
2. 鹽析法不同蛋白質鹽析所需要的鹽飽和度不同,所以可通過調節鹽濃度將目的蛋白沉澱析出。被鹽析沉澱下來的蛋白質仍保持其天然性質,並能再度溶解而不變性。
3. 有機溶劑沉澱法
中性有機溶劑如乙醇、丙酮,它們的介電常數比水低。能使大多數球狀蛋白質在水溶液中的溶解度降低,進而從溶液中沉澱出來,因此可用來沉澱蛋白質。此外,有機溶劑會破壞蛋白質表面的水化層,促使蛋白質分子變得不穩定而析出。由於有機溶劑會使蛋白質變性,使用該法時,要注意在低溫下操作,選擇合適的有機溶劑濃度。
(四)樣品的進一步分離純化
用等電點沉澱法、鹽析法所得到的蛋白質一般含有其他蛋白質雜質,須進一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有:凝膠過濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時還需要這幾種方法聯合使用才能得到較高純度的蛋白質樣品。

2. 常用的沉澱滴定法都有哪些

沉澱滴定是以沉澱反應為基礎的一種滴定方法,常用的有銀量法,多用於鹵素的測定。
硫酸根通常也可以利用沉澱滴定的方法來進行定量。董亦斌利用該方法對鍍銅液中的硫酸根進行滴定,選用KI作為指示劑,可以簡便、快速的得到鍍液中硫酸根濃度。

3. 常用蛋白質沉澱方法有哪些有哪些應用實例

一般最常見的是鹽析沉澱,就是在蛋白質溶液中加入一定量的硫酸銨,蛋白質便會沉澱下來,不同蛋白沉澱所需要的硫酸銨濃度不一樣,通過這個方法也可以對蛋白進行初步的純化分離。再有就是等電沉澱,通過調節蛋白溶液的pH,使其剛好達到目標蛋白的等電點,這時候蛋白分子將不帶有電荷,在相互碰撞聚集過程中沉澱下來。與之類似的有通過加沉澱劑或絮凝劑比如明礬之類的,也可以沉澱蛋白。另外還有就是親和沉澱,利用生物分子親和力,比如抗原抗體親和、酶與底物親和等性質,將配對的另一半固定在某些介質,比如小磁珠上,就能將溶液裡面的目的蛋白抓住沉澱下來。

4. 常見沉澱有哪些

氫氧化鐵,氫氧化銅,氫氧化鎂,氫氧化鋁,碳酸鋇,氯化銀,硫酸鋇,碳酸鈣,碳酸銀。

1、Fe(OH)3 氫氧化鐵,紅褐色沉澱。

化學方程式:

可溶性鹼和鐵鹽溶液反應,例如氫氧化鈉和硫酸鐵反應生成氫氧化鐵和硫酸鈉:

6NaOH+Fe2(SO4)3==2Fe(OH)3↓+3Na2SO4

4Fe(OH)2+O2+2H2O==4Fe(OH)3

2Fe(OH)3=△=Fe2O3+3H2O

2、Cu(OH)2 氫氧化銅,藍色沉澱。

化學方程式:

CuSO4+2NaOH==Na2SO4+Cu(OH)2↓

CuCl2+2CaOH==Cu(OH)2↓+2CaCl

CuSO4+Ca(OH)2==Cu(OH)2↓+CaSO4

3、CaCO3碳酸鈣,白色沉澱。

化學方程式:Ca(OH)2+CO2==CaCO3↓+H2O

4、BaCO3 碳酸鋇,白色沉澱。

化學方程式:Na2CO3+BaCl2==2NaCl+BaCO3↓5、AgCl 氯化銀,白色沉澱。

6、BaSO4 硫酸鋇,白色沉澱。

這兩種沉澱既不溶於水,也不溶於酸!

化學方程式:Ag2SO4+BaCl2==2AgCl↓+BaSO4↓

7、Mg(OH)2氫氧化鎂,白色沉澱。

化學方程式:MgCl2+Ca(OH)2==CaCl2+Mg(OH)2↓

8、Ag2CO3碳酸銀,白色沉澱。

化學方程式:Ag2CO3+2HNO3=2AgNO3+H2O+CO2↑

9、Al(OH)3氫氧化鋁,膠狀沉澱。

化學方程式:AICI3 + 3NH3.H2O ==AI(OH)3 + 3NH4CI

AI3+ + 3NH3.H2O ==AI(OH)3 + 3NH4



沉澱的分類:

按照水中懸浮顆粒的濃度、性質及其絮凝性能的不同,沉澱可分為以下幾種類型。

1、自由沉澱。懸浮顆粒的濃度低,在沉澱過程中呈離散狀態,互不粘合,不改變顆粒的形狀、尺寸及密度,各自完成獨立的沉澱過程。這種類型多表現在沉砂池、初沉池初期。

2、絮凝沉澱。懸浮顆粒的濃度比較高(50~500mg/L),在沉澱過程中能發生凝聚或絮凝作用,使懸浮顆粒互相碰撞凝結,顆粒質量逐漸增加,沉降速度逐漸加快。經過混凝處理的水中顆粒的沉澱、初沉池後期、生物膜法二沉池、活性污泥法二沉池初期等均屬絮凝沉澱。

3、擁擠沉澱。懸浮顆粒的濃度很高(大於500mg/L),在沉降過程中,產生顆粒互相干擾的現象,在清水與渾水之間形成明顯的交界面(混液面),並逐漸向下移動,因此又稱成層沉澱。活性污泥法二沉池的後期、濃縮池上部等均屬這種沉澱類型。

4、壓縮沉澱。懸浮顆粒濃度特高(以至於不再稱水中顆粒物濃度,而稱固體中的含水率),在沉降過程中,顆粒相互接觸,靠重力壓縮下層顆粒,使下層顆粒間隙中的液體被擠出界面上流,固體顆粒群被濃縮。活性污泥法二沉池污泥斗中、濃縮池中污泥的濃縮過程屬此類型。

5. 常用的沉澱方法有哪些

沉澱法,是指由於表面擴散脫氧法速度慢,故實際生產中使用並不廣泛,而常使用沉澱脫氧法。這種方法用磷、鋰作為脫氧劑,脫氧反應在整個熔池內進行,所以反應速度快。缺點是脫氧劑可能會殘留在合金液體中,影響合金的性能。
沉澱法,是包括製造固體催化劑的方法之一、水彩畫的特殊技法和溶劑萃取的方法。沉澱法,在水處理中,是利用水中懸浮顆粒的可沉降性能,在重力作用下產生下沉作用,以達到固液分離的一種過程。

催化劑方法
把沉澱劑加入到鹽溶液中反應後,將沉澱熱處理得到納米材料。其特點簡單易行,但純度低,顆粒半徑大,適合制備氧化物。
特殊技法
.水彩畫的特殊技法,水彩畫顏色中有些顏色干後會產生沉澱,這就需要在上色時,水份 要充足,讓顏色中的小顆粒流動後沉澱在紙面上。這種方法顏色淡容易出效果。如: 深藍、赭石等顏色。
溶劑萃取法
介紹
最常用的是鉛鹽法,可以用於除去雜質,也可用於沉澱有效成分。
沉澱法通常是在溶液狀態下將不同化學成分的物質混合,在混合液中加人適當的沉澱劑制備前驅體沉澱物,再將沉澱物進行乾燥或鍛燒,從而製得相應的粉體顆粒.
鉛鹽法是利用中性醋酸鉛或醋酸鉛在水或稀醇溶液中能與許多物質生成難溶的鉛鹽或絡鹽,而用於中葯成分。中性醋酸鉛可以沉澱有機酸、蛋白質、氨基酸、粘液質、鞣質、酸性皂甙、樹脂、部分黃酮甙和花色甙等。鹼式醋酸鉛沉澱范圍更廣,除了述被中性醋酸鉛沉澱的物質外,還可以沉澱某些中性皂甙、異黃酮甙、糖類和一些鹼性較弱的生物鹼等。通常將鉛鹽沉澱濾出,然後將沉澱懸於水或稀醇中,通硫化氫氣體或硫酸鈉等試劑進行脫鉛,即可回收提取物。
鉛鹽沉澱法
鉛鹽沉澱法為分離某些中草葯成分的經典方法之一。由於醋酸鉛及鹼式醋酸鉛在水及醇溶液中,能與多種中草葯成分生成難溶的鉛鹽或絡鹽沉澱,故可利用這種性質使有效成分與雜質分離。中性醋酸鉛可與酸性物質或某些酚性物質結合成不溶性鉛鹽。因此,常用以沉澱有機酸、氨基酸、蛋白質、粘液質、鞣質、樹脂、酸性皂甙、部分黃酮等。可與鹼式醋酸鉛產生不溶性鉛鹽或絡合物的范圍更廣。通常將中草葯的水或醇提取液先加入醋酸鉛濃溶液,靜置後濾出沉澱,並將沉澱洗液並入濾液,於濾液中加鹼式醋酸鉛飽和溶液至不發生沉澱為止,這樣就可得到醋酸鉛沉澱物、鹼式醋酸鉛沉澱物及母液三部分。然後將鉛鹽沉澱懸浮於新溶劑中,通以硫化氫氣體,使分解並轉為不溶性硫化鉛而沉澱。含鉛鹽母液亦須先如法脫鉛處理,再濃縮精製。硫化氫脫鉛比較徹底,但溶液中可能存有多餘的硫化氫,必須先通人空氣或二氧化碳讓氣泡考試,大收集整理帶出多餘的硫化氫氣體,以免在處理溶液時參與化學反應。新生態的硫化鉛多為膠體沉澱,能吸咐葯液中的有效成分,要注意用溶劑處理收回。脫鉛方法,也可用硫酸、磷酸、硫酸鈉、磷酸鈉等除鉛,但硫酸鉛、磷酸鉛在水中仍有一定的溶解度,除鉛不徹底。用陽離子交換樹脂脫鉛快而徹底,但要注意葯液中某些有效成分也可能被交換上去,同時脫鉛樹脂再生也較困難。還應注意脫鉛後溶液酸度增加,有時需中和後再處理溶液,有時可用新制備的氫氧化鉛、氫氧化鋁、氫氧化銅或碳酸鉛、明礬等代替醋酸鉛、鹼式醋酸鉛。例如在黃芩水煎液中加入明礬溶液,
黃芩甙就與鋁鹽絡合生成難溶於水的絡化物而與雜質分離,這種絡化物經用水洗凈就可直接供葯用。
試劑沉澱法
例如在生物鹼鹽的溶液中,加入某些生物鹼沉澱試劑(見生物鹼性質下),則生物鹼生成不溶性復鹽而析出。水溶性生物鹼難以用萃取法提取分出,常加入雷氏銨鹽使生成生物鹼雷氏鹽沉澱析出。又如橙皮甙、蘆丁、黃芩甙、甘草皂甙均易溶於鹼性溶液,當加入酸後可使之沉澱析出。某些蛋白質溶液,可以變更溶液的值利用其在等電點時溶解度最小的性質而使之沉澱析出。此外,還可以用明膠、蛋白溶液沉澱鞣質;膽甾醇也常用以沉澱洋地黃皂甙等。可根據中草葯有效成分和雜質的性質,適當選用。

6. 沉澱方法有哪些

鹽沉澱
有機溶劑沉澱
等電點沉澱

7. 沉澱方法有哪些

蛋白質沉澱的方法: 1)加熱 2)加鹼或酸 3)加入氧化劑 4)離心 5)加重金屬鹽 6)加甲醛 7)加入濃的鹽溶液

8. 沉澱蛋白質的幾種方法及應用實例

1.鹽析法——多用於各種蛋白質和酶的分離純化

在蛋白質溶液中加入大量的中性鹽以破壞蛋白質的膠體穩定性而使其析出,這種方法稱為鹽析。常用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等。各種蛋白質鹽析時所需的鹽濃度及pH不同,故可用於對混和蛋白質組分的分離。例如用半飽和的硫酸銨來沉澱出血清中的球蛋白,飽和硫酸銨可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉澱出來,鹽析沉澱的蛋白質,經透析除鹽,仍保證蛋白質的活性。調節蛋白質溶液的pH至等電點後,再用鹽析法則蛋白質沉澱的效果更好。鹽析法分為兩類,第一類叫Ks分段鹽析法,在一定PH和溫度下通過改變離子強度實現,用於早期的粗提液;第二種叫b分段鹽析法,在一定離子強度下通過改變PH和溫度來實現,用於後期進一步分離純化和結晶。影響鹽析的因素包括:蛋白質濃度、離子強度和類型、PH值、溫度等。針對溫度這一條,需要強調:在低離子強度或純水中,蛋白質溶解度在一定范圍內隨溫度增加而增加。但在高濃度下,蛋白質、酶和多肽類物質的溶解度隨溫度上升而下降。在一般情況下,蛋白質對鹽析溫度無特殊要求,可在室溫下進行,只有某些對溫度比較敏感的酶要求在0-4℃進行。
使用硫酸銨沉澱蛋白需要注意:硫酸銨中常含有少量的重金屬離子,對蛋白質巰基有敏感作用,使用前必須用H2S處理:將硫酸銨配成濃溶液,通入H2S飽和,放置過夜,用濾紙除去重金屬離子,濃縮結晶,100℃烘乾後使用。另外,高濃度的硫酸銨溶液一般呈酸性(PH=5.0左右),使用前也需要用氨水或硫酸調節至所需PH。

2.有機溶劑沉澱法——多用於生物小分子、多糖及核酸產品的分離純化;

有機溶劑的沉澱機理是降低水的介電常數,導致具有表面水層的生物大分子脫水,相互聚集,最後析出。該法優點在於:1)分辨能力比鹽析法高,即蛋白質或其它溶劑只在一個比較窄的有機溶劑濃度下沉澱;2)沉澱不用脫鹽,過濾較為容易;3)在生化制備中應用比鹽析法廣泛。但是,在常溫下,有機溶劑沉澱蛋白質往往引起變性。例如酒精消毒滅菌就是如此。因此,操作要求在低溫下進行。有機溶劑的選擇首先是能和水混溶,使用較多的有機溶劑是乙醇、甲醇、丙酮,還有二甲基甲醯胺、二甲基亞碸、乙腈和2-甲基-2,4戊二醇等。

3.等電點沉澱法——此法單獨應用較少,多與其它方法結合使用;

兩性電解質分子上的凈電荷為零時溶解度最低,不同的兩性電解質具有不同的等電點,以此為基礎可進行分離。如工業上生產胰島素時,在粗提液中先調PH8.0去除鹼性蛋白質,再調PH3.0去除酸性蛋白質。利用等電點除雜蛋白時必須了解制備物對酸鹼的穩定性,不然盲目使用十分危險。不少蛋白質與金屬離子結合後,等電點會發生偏移,故溶液中含有金屬離子時,必須注意調整PH值。等電點法常與鹽析法、有機溶劑沉澱法或其他沉澱方法聯合使用,以提高其沉澱能力。

很全面實用的答案,望採納!

9. 常用的沉澱法

常用的有下列幾種方法:

  1. 等電點沉澱法不同蛋白質的等電點不同,可用等電點沉澱法使它們相互分離。

2. 鹽析法不同蛋白質鹽析所需要的鹽飽和度不同,所以可通過調節鹽濃度將目的蛋白沉澱析出。被鹽析沉澱下來的蛋白質仍保持其天然性質,並能再度溶解而不變性。

3. 有機溶劑沉澱法中性有機溶劑如乙醇、丙酮,它們的介電常數比水低。能使大多數球狀蛋白質在水溶液中的溶解度降低,進而從溶液中沉澱出來,因此可用來沉澱蛋白質。此外,有機溶劑會破壞蛋白質表面的水化層,促使蛋白質分子變得不穩定而析出。由於有機溶劑會使蛋白質變性,使用該法時,要注意在低溫下操作,選擇合適的有機溶劑濃度。

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