① 植物組織培養一般方法
植物組織培養可以分為四個階段:
(1)建立無菌體系,即外植體及培養基的消毒、接種,獲得愈傷組織或器官。
(2)進行增殖,不斷分化產生新的植株,或直接產生不定芽及胚狀體,也可以根據需要反復進行繼代培養,以達到大量繁殖的目的。
(3)將植株轉移進行生根培養,可以轉入生根培養基,也可以直接切取進行扦插生根。
(4)試管苗過渡,即試管苗出瓶後進行一定時間對外界環境的適應過程。
② 請分別簡述,植物組織培養、植物細胞培養、植物原生質體培養的過程。
植物組織培養:
1
植物進行切割形成外植體(芽
莖
根尖等)
2
外植體離體培養脫分化形成愈傷組織(這里需要高濃度的生長素和細胞分裂素強烈促進形成愈傷組織,同時要暗培養,防止分化成其他組織)
3
愈傷組織在分化形成植株(要一定光照,細胞分裂素/生長素
比值高時,形成芽
,低時,形成根)
條件:整個過程中要確保無菌,且必須有植物生長所需營養:無機鹽,糖類等,尤其是激素)
原理:細胞全能性
植物細胞培養:目的與植物組織培養不同,前者要獲得植株,而細胞培養要獲得細胞次級代謝產物
1
2與組織培養相同
3
愈傷組織在液體培養基中形成懸浮細胞,過程中獲得代謝產物(懸浮細胞的特點是細胞質豐富,液泡小而細胞核大)
植物體細胞雜交:1去細胞壁,在0.5-0.6mol/l的甘露醇溶液,纖維素酶,果膠酶作用下,分解細胞壁,得到原生質體(一掘侍般都用纖維素酶)
2
利用物理方法:離心,震盪等,化學方法:聚二乙醇(一般都這個)得到雜交細胞
3
誘導細胞,形成植株,再生細胞壁(新植株生成標志)。注意,這里要進行篩選肆櫻,得到AA
BB
AB細胞,我們需要的是AB細胞!
條件:同上
原理:細胞膜裂散叢的流動性
優點:克服遠緣雜交不親和的障礙(這句話出現頻率很高的)
純手打!不懂私信