1. 吸收放散試驗吸收試驗的方法
在進行吸收放散試驗時,首先進行冷吸收步驟。以已知抗原的鹽水洗滌紅細胞為起始,加入待檢血清,混合均勻後放入4℃冰箱中吸收1到2小時,適用於A型、B型、MN、P系統等抗原的檢測。另一方面,熱吸收則用於Rh系統等,將混合液置於37℃水浴箱中,通過吸收過程區分真偽凝集反應:真凝集在吸收後凝集力減弱或變為陰性,而假凝集保持不變。
放散試驗的核心在於將紅細胞上吸附的大量抗體釋放到小量生理鹽水中,形成放散液。這種溶液中的抗體具有高度特異性,能與相應的抗原結合,從而確認抗體的特性。熱放散試驗在ABO血型系統新生兒溶血病檢測中廣泛應用,尤其適用於一般實驗室。然而,該方法的缺點是回收抗體效果不佳,若抗體弱,可能導致假陰性結果。具體操作流程如下:將疑似抗體包被的紅細胞用生理鹽水洗滌,最後壓積紅細胞並吸取上層鹽水。在壓積紅細胞中加入等量生理鹽水(或AB血清或6%白蛋白),置於56℃水浴箱中7到8分鍾,期間需多次搖動。離心後取上清液(櫻紅色部分即為放散液),並與已知紅細胞進行試驗,根據試驗要求進行下一步操作,將放散液作為抗體使用。
吸收試驗(absorption test)抗原與抗體的結合是特異性的,因此具有抗體活性的血清加入相應抗原後,抗體的活性下降或消失,這種作用稱為吸收試驗,對一未知抗體可以用已知抗原進行吸收,吸收後抗體活性下降或消失,說明未知抗體中含有與已知抗原相對應的抗體。有時被檢血清中有多種抗體,可用已知抗原分別吸收及鑒定抗體的性質。放散試驗的原理是抗原與抗體的結合是可逆的,在物理條件改變時,抗體又會從抗原抗體復合物上分離下來,將抗體由抗原抗體復合物上分離下來的試驗稱為放散試驗。
2. 鑒定Rh血型要用什麼方法特別要注意什麼
鑒定信嘩弊方法因抗血清的性質而定,如鹽水抗體用滑族鹽水法,IgG抗體用聚凝胺法、抗球蛋白法或酶法等。
如一般蘆陸檢查為RhD陰性,應進一步確證,以排除諸如Du、DⅥ等弱D或不完全D抗原。因它們比正常D陽性紅細胞抗原弱,接受正常D抗原紅細胞仍有產生抗D的可能;故對受血者而言,作為RhD陰性對待最為安全。
3. 怎麼查rh抗體效價
多采免疫雙向擴散法
【基本原理】
*指抗原和抗體在同一凝膠內都擴散,彼此相遇後形成特異性的沉澱線。
-將抗原與抗體分別加入同一凝膠板中兩個相隔一定間距的小孔內,使兩者進行相互擴散,當抗原抗體濃度之比相適宜時,彼此相遇形成一白色弧狀沉澱線。
*優缺點:簡便,但敏感性較低,易出現假陰性結果。
免疫雙向擴散法的操作步驟
*將玻璃板用水洗凈後用75%乙醇沖洗,晾乾後放在水平台上備用。
*將1%agar 融化後,置56℃水浴。
*在玻璃板上鋪膠,約1.5mm 厚,凝固後打孔(直徑 3rnm),孔間距10mm。
l 抗血清(抗體預先作系列倍比稀釋即ml 抗原樣品,周圍孔內每孔加5m*中心孔加5 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。
*凝膠板置濕盒內,室溫擴散24h。
*觀察結果。
凝聚胺法測定孕婦血清IgG抗-A(抗-B)效價的方法待檢血清與0.2 mol/L 2?硫基乙醇(2?Me)在試管內等量混合,放入37℃水浴1 h以破壞血清中的IgM抗體,吸取處理後的血清用生理鹽水倍比稀釋,稀釋度分別為2、4、8、16、32、64、128、256、512、1 024,然後每管加入相應的3%~5%紅細胞懸液,置37℃水浴30 min,觀察是否凝集,不凝集者用生理鹽水洗滌3次,然後加入低離子鹽水介質(LIM液),混勻,滴入2滴凝聚胺,混勻後3 000 r/min離心30 s,扣搖肉眼可見明顯的凝集(無凝集者須重做),再加入2滴重懸液,輕搖,觀察凝集是否消失,凝集1 min內不消失者表示受檢者血清中含有IgG型抗?A(抗?B)。