Ⅰ 怎麼去掉細胞的細胞核啊 反復凍融破碎細胞 主要是想要細胞膜
要細胞膜還不簡單啊!搞得那麼復雜,還去細胞核,成熟的哺乳動物的紅細胞就木有細胞核,直接用這個不就行了,還搞得那麼復雜幹嘛!
Ⅱ 卵母細胞去核常用方法
在體細胞核移植過程中,採集的卵母細胞需培養到減數第二次分裂中期時;用顯微操作去核法去除卵母細胞的核;卵母細胞體積大,易操作,含有豐富的營養物質,且含有能使細胞核全能性表達的物質,因此常用卵母細胞作受體細胞;由於細胞質基因是由卵母細胞提供的,因此生出的犢牛與供體奶牛不完全相同.
故答案為:減數第二次分裂中期 顯微操作去核法
卵母細胞體積大,易操作,含有豐富的營養物質;且含有能使細胞核全能性表達的物質
因為細胞質基因是由卵母細胞提供的
Ⅲ 如何分離細胞核與線粒體
如何分離細胞核與線粒體
細胞核與線粒體的分級分離
一、原理
細胞內不同結構的比重和大小都不相同,在同一離心場內的沉降速度也不相同,根據這一原理,常用不同轉速的離心法,將細胞內各種組分分級分離出來。
分離細胞器最常用的方法是將組織製成勻漿,在均勻的懸浮介質中用差速離心法進行分離,其過程包括組織細胞勻漿、分級分離和分析三步,這種方法已成為研究亞細胞成分的化學組成、理化特性及其功能的主要手段。
勻漿(Homogenization)低溫條件下,將組織放在勻漿器中,加入等滲勻漿介質(即0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化鈣)進行破碎細胞使之成為各種細胞器及其包含物的勻漿。
分級分離(Fractionation)由低速到高速離心逐漸沉降。先用低速使較大的顆粒沉澱,再用較高的轉速,將浮在上清液中的顆粒沉澱下來,從而使各種細胞結構,如細胞核、線粒體等得以分離。由於樣品中各種大小和密度不同的顆粒在離心開始時均勻分布在整個離心管中,所以每級離心得到的第一次沈澱必然不是純的最重的顆粒,須經反復懸浮和離心加以純化。
分析 分級分離得到的組分,可用細胞化學和生化方法進行形態和功能鑒定。
二、細胞核的分離提取
(一)操作步驟
1.用頸椎脫位的方法處死小白鼠後,迅速剖開腹部取出肝臟,剪成小塊(去除結締組織)盡快置於盛有0.9%NaCl的燒杯中,反復洗滌,盡量除去血污,用濾紙吸去表面的液體。
2.將濕重約1g的肝組織放在小平皿中,用量筒量取8ml預冷的0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化鈣溶液,先加少量該溶液於平皿中,盡量剪碎肝組織後,再全部加入。
3.剪碎的肝組織倒入勻漿管中,使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中,左手持之,右手將勻漿搗桿垂直插入管中,上下轉動研磨3~5次,用3層紗布過濾勻漿液於離心管中,然後制備一張塗片①,做好標記,自然乾燥。
4.將裝有濾液的離心管配平後,放入普通離心機,以2500rpm,離心15分鍾;(1)緩緩取上清液,移入高速離心管中,保存於有冰塊的燒杯中,待分離線粒體用;(2)同時塗一張上清液片②做好標記,自然乾燥;(3)餘下的沉澱物進行下一步驟。
5.用6ml0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化鈣溶液懸浮沉澱物,以2500rpm離心15分鍾棄上清,將殘留液體用吸管吹打成懸液,滴一滴於干凈的載玻片上,塗片③,自然乾燥。
6.將①、②、③塗片用l%甲苯胺蘭染色後蓋片即可觀察。
(二)結果
分別於高倍鏡下觀察三張塗片,描述鏡下所見。
三、高速離心分離提取線粒體
(一)操作步驟
1.將裝有上清液的高速離心管,從裝有冰塊的燒杯中取出,配平後,以17000rpm離心20分鍾,棄上清,留取沉澱物。
2.加入0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化鈣液lml,用吸管吹打成懸液,以17000rpm離心20分鍾,將上清吸入另一試管中,留取沉澱物,加入0.1ml 0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化鈣溶液混勻成懸液(可用牙簽)。
3.取上清液和沉澱物懸液,分別滴一滴於干凈載玻片上(分別標記④、⑤塗片),各滴一滴0.02%詹納斯綠B染液蓋上蓋片染20分鍾。
(二)結果
油鏡下觀察,顆粒狀的線粒體被詹納斯綠B染成藍綠色。
Ⅳ 怎樣使用離心的方法去除卵母細胞細胞核
單純的使用離心法去除卵母細胞的的細胞核好像效果沒有那麼好,看最近的學術文章上好像都提倡「離心法+盲吸法」。
實驗表明:以2,000r/min將卵母細胞離心10min後,有86.6%卵母細胞的極體與染色體之間夾角在20°以內,此時去核效率最高(87.4%):將卵母細胞離心後,對隨後的重構胚發育無影響。因此,採用離心輔助去核的方法可以顯著提高牛卵母細胞的去核效率。
Ⅳ 細胞拆合技術除去細胞核的方法
1.顯微操作,用吸管移去核.
2.用細胞鬆弛素B處理細胞,使細胞排核,再通過離心得到無核細胞.
3.紫外線或X射線照射細胞,使細胞核失活.
Ⅵ 分離細胞質和細胞核的方法
現在可以用顯微注射的方法!
當然也可以用離心法
Ⅶ 是不是有一種細胞顯微鉤針可以把細胞核取出
你說的應該是盲吸法或者是半卵法去核——在顯微鏡下用玻璃針在細胞膜做一切口,然後用平口去核管沿切口插入,吸取細胞核以及附近胞質。當年多利羊的克隆好像就是用的此種方法,當然還有其他方法如微分干涉和極性顯微鏡去核法,離心去核法,化學試劑去核法等。
Ⅷ 目前核移植技術中普遍使用的去核方法是
目前核移植技術中普遍使用的去核方法是顯微操作去核法。還有人採用其他方法,如梯度離心,紫外光短時間照射,化學物質處理等。這些方法是在沒有刺破透明帶或卵母細胞質膜的情況下,去除細胞核或使卵細胞核DNA變性,從而達到去核目的。
具體的實驗操作是,通過顯微操作去除卵母細胞中的核,由於MⅡ期卵母細胞核的位置靠近第一極體,用微型吸管可一並吸出細胞核與第一極體。
希望可以幫到你
Ⅸ 動物細胞核移植普遍使用的去核方法
動物細胞核移植技術:體細胞核移入除去核的卵母細胞
動物細胞融合技術:兩個或多個動物細胞融合成一個細胞的過程,融合後形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞,稱為雜交細胞