抗體效價檢測方法

❶ 如何檢測western抗體效價

行.
以下為例：供參考
用Western blot檢測MUC1核心肽多克隆
抗體特異性：將純化的8R．MUCPT蛋白(2孔)經
SDS—PAGE後,轉移至硝酸纖維膜上；5％脫脂奶粉封
閉4℃ 12 h；將硝酸纖維膜剪成2條,每1個上樣孔
為1條,分別置於一抗為1：500稀釋的兔抗8R—
MUCF1r血清和1：500稀釋的MUC1核心肽單克隆抗
體中,室溫2 h；PBS洗5 min×3次；二抗分別為
1：500稀釋的過氧化物酶標記的羊抗兔IgG和1：500
稀釋的過氧化物酶標記的羊抗鼠I ,室溫2 h；PBS
洗5 min×3次；DAB顯色.

❷ 抗體效價怎樣檢查

醫院測抗體一般是用ELISA方法。靈敏度很高的。
在其他地方，還有血凝抑制試驗，瓊脂擴散試驗，抗體蛋白純化定量，抗體活性檢測等。
根據要求不同，選擇不同的方法，現在醫院最常用。使用方便的就是ELISA試劑盒。
原理是:在反應板上包上抗原，然後加入檢測樣品液(血清，組織液等，需要處理一下)，如果檢測樣品中有抗體，就可以與抗原結合，再加入酶標記的抗抗體，就可以和樣品中抗體結合，加入顯色劑，顯色後，檢測，通過吸光度的多少，確定抗體的含量。

❸ 制備免疫血清時，為檢測抗體效價，家兔最常用的采血方法是

正確答案:B
解析：制備免疫血清時，免疫家兔後，常採用耳緣靜脈采血來檢測家兔產生抗體的效價
。

❹ 求助ELISA測定抗體效價方法

我用的是間接ELISA，以下自我的畢業論文：
將抗原用包被液稀釋至約10 ?g/mL；分別將陽性血清和陰性血清用TBS倍比稀釋，稀釋梯度從1：200，1：400至1：204800，二抗用的是HRP標記的羊抗兔IgG(1:5000稀釋) 。酶標儀測定450nm處各個孔的吸光度(A450)，計算陽性血清與陰性血清的吸光度之比(P/N)，當P/N＜1.5時為陰性，當P/N≥1.5而＜2.1為可疑，當P/N≥2.1為陽性，將P/N≥2.1時所對應的抗體最高稀釋倍數作為抗體的效價。

❺ 怎麼查rh抗體效價

多采免疫雙向擴散法
【基本原理】
*指抗原和抗體在同一凝膠內都擴散，彼此相遇後形成特異性的沉澱線。
-將抗原與抗體分別加入同一凝膠板中兩個相隔一定間距的小孔內，使兩者進行相互擴散，當抗原抗體濃度之比相適宜時，彼此相遇形成一白色弧狀沉澱線。
*優缺點：簡便，但敏感性較低，易出現假陰性結果。
免疫雙向擴散法的操作步驟
*將玻璃板用水洗凈後用75%乙醇沖洗，晾乾後放在水平台上備用。
*將1%agar 融化後，置56℃水浴。
*在玻璃板上鋪膠，約1.5mm 厚，凝固後打孔(直徑 3rnm)，孔間距10mm。
l 抗血清(抗體預先作系列倍比稀釋即ml 抗原樣品，周圍孔內每孔加5m*中心孔加5 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。
*凝膠板置濕盒內，室溫擴散24h。
*觀察結果。
凝聚胺法測定孕婦血清IgG抗-A（抗-B）效價的方法待檢血清與0.2 mol/L 2?硫基乙醇(2?Me)在試管內等量混合，放入37℃水浴1 h以破壞血清中的IgM抗體，吸取處理後的血清用生理鹽水倍比稀釋，稀釋度分別為2、4、8、16、32、64、128、256、512、1 024，然後每管加入相應的3%～5%紅細胞懸液，置37℃水浴30 min，觀察是否凝集，不凝集者用生理鹽水洗滌3次，然後加入低離子鹽水介質(LIM液)，混勻，滴入2滴凝聚胺，混勻後3 000 r/min離心30 s，扣搖肉眼可見明顯的凝集(無凝集者須重做)，再加入2滴重懸液，輕搖，觀察凝集是否消失，凝集1 min內不消失者表示受檢者血清中含有IgG型抗?A(抗?B)。

❻ ELISA技術測定單克隆抗體效價方法有嗎

ELISA 是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。免疫酶技術是將酶標記在抗體/抗原分子上，形成酶標抗體/酶標抗原，稱為酶結合物。該酶結合物的酶在免疫反應後，作用於底物使之呈色，根據顏色的有無和深淺，定位或定量抗原/抗體。ELISA 法是免疫酶技術的一種，其特點是利用聚苯乙烯微量反應板(或球)吸附抗原/抗體，使之固相化，免疫反應和酶促反應都在其中進行。在每次反應後都要反復洗滌，這既保證了反應的定量關系，也避免了末反應的游離抗體/抗原的分離步驟。在ELISA 法中．酶促反應只進行一次，而抗原、抗體的免疫反應可進行一次或數次，即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進行免疫反應。 目前常用的幾種ELISA 方法有：測定抗體的間接法，測定抗原的雙抗體夾心法和測定抗原的競爭法等。本實驗採用間接法測定單克隆抗體效價。其主要過程為：首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應板的凹孔內，加待測抗體，保溫後洗滌以除去未結合的雜蛋白質，加酶標抗抗體，保溫後洗滌，加底物保溫30分鍾後，加酸或鹼終止酶促反應，用目測或光電比色測定抗體含量。

❼ 抗體效價的檢測方法

多采免疫雙向擴散法
【基本原理】
*指抗原和抗體在同一凝膠內都擴散，彼此相遇後形成特異性的沉澱線。
-將抗原與抗體分別加入同一凝膠板中兩個相隔一定間距的小孔內，使兩者進行相互擴散，當抗原抗體濃度之比相適宜時，彼此相遇形成一白色弧狀沉澱線。
*優缺點：簡便，但敏感性較低，易出現假陰性結果。
免疫雙向擴散法的操作步驟
*將玻璃板用水洗凈後用75%乙醇沖洗，晾乾後放在水平台上備用。
*將1%agar 融化後，置56℃水浴。
*在玻璃板上鋪膠，約1.5mm 厚，凝固後打孔(直徑 3rnm)，孔間距10mm。
l 抗血清(抗體預先作系列倍比稀釋即ml 抗原樣品，周圍孔內每孔加5m*中心孔加5 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。
*凝膠板置濕盒內，室溫擴散24h。
*觀察結果。
凝聚胺法測定孕婦血清IgG抗-A（抗-B）效價的方法待檢血清與0.2 mol/L 2?硫基乙醇(2?Me)在試管內等量混合，放入37℃水浴1 h以破壞血清中的IgM抗體，吸取處理後的血清用生理鹽水倍比稀釋，稀釋度分別為2、4、8、16、32、64、128、256、512、1 024，然後每管加入相應的3%～5%紅細胞懸液，置37℃水浴30 min，觀察是否凝集，不凝集者用生理鹽水洗滌3次，然後加入低離子鹽水介質(LIM液)，混勻，滴入2滴凝聚胺，混勻後3 000 r/min離心30 s，扣搖肉眼可見明顯的凝集(無凝集者須重做)，再加入2滴重懸液，輕搖，觀察凝集是否消失，凝集1 min內不消失者表示受檢者血清中含有IgG型抗?A(抗?B)。
抗體效價檢測的其它方法
*環狀沉澱試驗，需較多的抗血清，現已很少用；
*對流免疫電泳，比瓊脂免疫雙擴散法敏感，較簡便、實用；
*酶聯免疫吸附試驗 (ELISA)。
通常抗體效價低於1：128是沒有問題的，有些孕婦高達1：256以上，而且抗體效價最好1個月查上一次，有時候會有所變化。

❽ 抗體效價測定的介紹

抗體效價測定是指測定抗體的物理狀態及其在體內的滯留時間，以其與抗原反應的多少來表示其免疫效果。

❾ 抗體效價測定的方法內容

1．取小試管10支，分別標明1-10號，各管加生理鹽水0.2ml，用刻度吸管吸取被檢者血清0.2ml加入到第1管充分混勻，再用同一吸管從第1試管中吸出0.2ml加入到第2管，充分混勻後再吸取0.2ml加入第3管，以此倍量稀釋。取第10管的0.2ml稀釋液棄去。使成 1:2、1:4……。
2．然後各管再加等量含相應抗原的5%紅細胞鹽水懸液，振搖試管架使之混勻，置 37℃水浴中放置1h，以3000r/min離心15s，觀察凝集結果並記錄；對凝集強度為「1+」以下及不凝集者，用生理鹽水洗滌3遍，末次吸幹上清液；各加生理鹽水2滴，取出每管加抗人球蛋白試劑2滴，以3000r/min離心15s，觀察凝集結果並記錄。出現凝集的最高稀釋度的倒數為效價。例如右圖表抗A血清效價測定結果為256。