乙基脲檢測方法

① 微波輻射誘變是什麼原理

植物誘變以及RAPD分析實驗設計———
小麥的化學誘變及分析
一. 實驗原理：
誘變育種是人為的措施誘導植物遺傳基因產生變異，然後在產生變異的植株中按照需要選育出新的優良品種。誘變育種常用的有物理因素和化學因素，物理因素如各種射線、微波或激光等處理誘變材料，習慣上稱之為輻射育種；化學因素是運用能導至遺傳物質改變的一些化學葯物——誘變劑處理誘變材料促使變異，常稱之為化學誘變。
化學誘變劑種類現已不少，但常見使用效果較好的有：甲基磺酸乙脂（EMS，又稱乙基甲烷磺酸鹽）、乙烯亞胺（EN）、硫酸二乙脂（DES）、亞硝基尿烷（NEU）、亞硝基甲基尿烷（NMU）、亞硝基乙基脲（NEH）。以及從植物中提取的某些生物鹼類（如長春花鹼、秋水仙鹼、石蒜鹼等）。
誘變材料：在農業育種上，誘變劑常用來處理種子、營養體、花粉等。以選用種子為誘變材料最多。
誘變劑的濃度以多高為合適，還需要更多的實驗次數才能確定。開始實驗時應設立不同濃度的很多檔次，以便以後總結優選配方。處理時間一一般約1小時至兩晝夜，應掌握溫度高則濃度偏低，濃度高則處理時間縮短的原則進行。誘變劑處理時的溫度以20——25度為適。處理時間過長、溫度過高、誘變劑過濃會造成大量死苗。
誘變劑大多具有致癌作用，操作時盡量少接觸皮膚，更不能吸人體內。
RAPD是隨機擴增多態性DNA（Random Amplification Polymorphic DNA）的英文縮寫，RAPD是1990年由Willianms發明的，是新近發展起來一種分子生物學方法，RAPD是建立在PCR技術之上的一種分子標記方法，它是以一系列不同的隨機排列的寡聚核酸單鏈為引物，對於所研究的基因組DNA 進行擴增，擴增產物通過聚丙烯醯氨凝膠或者瓊脂糖凝膠電泳分析，經EB染色來檢測擴增產物的多態性，RAPD 所使用的引物各不相同，對於任一特定的引物，它同基因組DNA 序列有特定的結合位點，這些特定的結合位點在基因組某些區域內的分布符合PCR反應的條件，機隨機引物在模板的兩條鏈上有互補的位置，且引物的3『-端相距在一定的長度范圍之內，就可以擴增出來DNA片段，如果基因組在這些區域發生DNA的片段的插入或者缺失，或者鹼基突變就能夠導致這些特定結合位點分布發生變化，而使PCR產物增加或者減少，發生分子量的變化，通過對於PCR產物的檢測分析即可以測出基因組在這些區域的多態性。
RAPD技術繼承了PCR技術的優點，所以RAPD技術可以在對於所研究的物種沒有任何分子生物學基礎的情況下，對其進行DNA的多態性的分析，同RFLP，DNA 指紋圖譜法等其它DNA 多態性技術相比，RAPD 具有檢測效率高，樣品用量少，靈敏度高等特點和優勢，RAPD已經廣泛地應用於農作物品種以及品系的鑒定品種和品系的遺傳關系的確定，基因的定位和分離 ，夠建基因圖譜以及作物抗性育種等方面。

二. 實驗目的：
1.學習基因組的誘變方法；
2.掌握RAPD以及PCR檢測方法。
三. 實驗材料以及試劑：
1實驗材料：
小麥種子
2 . 試劑
誘變劑：
4種DNTS ，隨機引物，TAQ酶，

四. 實驗步驟
（一）化學誘變（材料為每1組）
將飽滿的小麥種子選取500粒，250 進行EMS處理，250直接進行培養。
具體為：1. 配置濃度為0.1%-0.3%的EMS
2. 將小麥種子用EMS處理兩晝夜，處理過程當中溫度保持在室溫，處理時間不要過長，保證種子沒有出現誘變致死。可以將種子浸泡在水中，在溫箱中培育，如果誘變的種子出芽率低，進行再次誘變。如果誘變成功，將出芽的種子繼續培養。同時，培育正常的種子.
（二）誘變後的種子和為誘變的種子培育到葉片生長到約8厘米左右可以進行下一步實驗.
（三）植物總DNA的提取
1.樣品制備：
取1克新鮮的小麥葉片（綠色的葉片最佳），加液氮研磨樣品至粉末狀
2.樣品移入50ml的離心管，加入20---25ml已預熱到65度的提取液，充分混勻，65度水浴20---30分。
3.將材料冷卻到室溫，加入16ml氯仿：異戊醇均勻混合，直至上層為綠色。
4.6000離心15分鍾，加入預冷的無水乙醇，將離心後的樣品上清夜緩慢許旋轉加入，靜置。DNA浮出。
5.用預冷-20的70%酒精洗滌DNA多次。將DNA勾出，吸出多餘酒精，晾乾。

② 脲熱合成法的特點是什麼

這個合成法的特徵點就是相輔相成，一脈相承，相互聯系的特點。

水熱法合成祖母綠（綠柱石）經常含有一些與天然祖母綠較為類似的含物特徵，例如氣液兩相包裹體、礦物包裹體（赤鐵礦等）、平直的色帶、發育完整的晶面等等，因此還是具有較大的迷惑性，但是通過仔細的觀察，仍然不難鑒定。

相關內容解釋：

根據加熱溫度，水熱法可以被分為亞臨界水熱合成法和超臨界水熱合成法。通常在實驗室和工業應用中，水熱合成的溫度在100-240℃，水熱釜壓力也控制在較低的范圍，這是亞臨界水熱合成法。而為了制備某些特殊的晶體材料，如人造寶石、彩色石英等，水熱釜被加熱至1000℃，壓力可達0.3 GPa，這是超臨界水熱合成法。

③ 化學誘變劑ntg屬於什麼篩選方法

已知的有烷化劑、鹼基類似物(base analog)、羥胺(hydroxylamine)、吖啶色素等. 常用化學誘變劑的種類及作用機制 （一）烷化劑 是栽培作物誘發突變的最重要的一類誘變劑.葯劑帶有一個或多個活潑的烷基.通過烷基置換,取代其它分子的氫原子稱為"烷化作用"所以這類物質稱烷化劑. 烷化劑分為以下幾類： 1. 烷基磺酸鹽和烷基硫酸鹽 代表葯劑：甲基磺酸乙酯（EMS）、硫酸二乙酯（DES） 2. 亞硝基烷基化合物 代表葯劑：亞硝基乙基脲（NEH）、N-亞硝基-N-乙基脲烷（NEU） 3. 次乙胺和環氧乙烷類 代表葯劑：乙烯亞胺（EI） 4. 芥子氣類 氮芥類、硫芥類 烷化劑的作用機制--烷化作用 作用重點是核酸,導致DNA斷裂、缺失或修補. （二）核酸鹼基類似物 這類化合物具有與DNA鹼基類似的結構. 代表葯劑： 5-溴尿嘧啶（BU）、5-溴去氧尿核苷（BudR） 為胸腺嘧啶（T）的類似物 2-氨基嘌呤（AP） 為腺嘌呤（A）的類似物 馬來醯肼（MH） 為尿嘧啶（U）的異構體 作用機制：作為DNA的成份而滲入到DNA分子中去,使DNA復制時發生配對錯誤,從而引起有機體變異. （三）其它誘變劑 亞硝酸 能使嘌呤或嘧啶脫氨,改變核酸結構和性質,造成DNA復制紊亂.HNO2還能造成DNA雙鏈間的交聯而引起遺傳效應. 疊氮化鈉(NaN3) 是一種呼吸抑制劑,能引起基因突變,可獲得較高的突變頻率,而且無殘毒. 以下是具體的使用方法,希望對你有點作用! 化學誘變劑的劑量主要決定於其濃度和處理時間. 化學誘變劑都具毒性,其中90%以上是致癌物質或極毒葯品,使用時要格外小心,不能宜接用口吸,避免與皮膚直接接觸,不僅要注意自身安全,也要防上污染環境,造成公害. 一、鹼基類似物用於誘發突變的鹼基類似物有5-BU、5-FU、BUdr、5－IU等他們是胸腺嘧啶的結構類似物,AP、6-MP是腺嘌呤的給、結構類似物.最常用是5－BU和AP. 當將這類物質加人到培養基中,在繁殖過程中可以摻人到細菌DNA分子中,不影響DNA的復制.它們的誘變作用是取代核酸分子中鹼基的位置,再通過DNA的復制,引起突變,困此,也叫摻人誘變劑.顯然這一類誘變劑要求微生物細胞必頓處在代謝的旺盛期,才能獲得最佳的誘變效果. （一）鹼基類似物的誘變機制正常的鹼基存在著同分異構體,互變異構現象在嘧啶分子中以酮式和烯醇式的形式出現,而嘌呤分子中以氨基和亞氨基互為變構的形式出現、一般互變異構現象在鹼基類似物中比正常DNA鹼基中頻率更高. 5-BU 導致A：T鹼基對轉換為GC鹼基 2-氨基嘌呤也可以誘發DNA分子中A：T－ G：C或G：C－ A：T的轉換. （二）鹼基類似物的誘變處理方法（以5-BU為例） 1．單獨處理將微生物液體培養到對數期．離心除去培養液,加入生理鹽水或緩沖液．飢餓培養8-10h,消耗其體內的貯存物質、將5-BU加入到經飢餓培養的培養液中,處理濃度為25-40ug／ml,溫合均勻．取0.1-0.2ml菌懸液加人到瓊脂培養基上塗布培養.在適宜溫度下,使之在生長過程中誘變處理.培養後挑取單菌落,進行篩選.如果是處理真菌、放線菌孢子,則要提高5-BU的濃度,常處理濃度為 0.1mg／ml. 2．與輻射線復合處理據報道；如果菌體先用5-BU等鹼基類似物進行處理,使它們首先滲人到DNA分予中,然後用輻射線照射,誘變效果會比單獨使用射線要好.因此鹼基類似物也是一種輻射誘變的增敏劑.從而提高突變率. 二、烷化劑（一）烷化劑的作用機制烷化劑分單功能烷化劑和雙功能或多功能烷化劑兩大類.前者僅一個烷化基團,對生物毒性小,誘變效應大.後者具有兩個或多個烷化基團,毒性大,致死率高,誘變效應較差.主要原因是雙功能烷化劑有硫芥、氮芥. 烷化劑主要是通過烷化基團使DNA分子上的鹼基及磷酸部分烷化,DNA復制時導致鹼基配對錯誤而引起突變,鹼基中容易發生烷化作用的是嘌呤類.其中鳥嘌呤N7是最易起反應的位點,幾乎可以和所有烷化劑起烷化作用；此外,DNA分子中比較多的烷化位點是鳥嘌呤O6和胸腺嘧啶O4,這些可能都是引起突變的主要位點.其次引起烷化的位點是鳥嘌呤N3、腺嘌呤N2,腺嘌呤N7和胞嘧啶N3.這些位點引起鹼基置換的僅占烷化作用的10％左右.因此,由這些位點改變所引起的突變僅是少數. 烷化劑也能造成磷酸和核糖之間的共價鍵斷裂,而造成突變. （二）烷化劑的性質溶液烷化劑的性質比較活潑,不太穩定,在水溶液中容易發生分解.它們大部分半衰期很短,其長短與溫反、溶液PH關系很大.因此,化學誘變劑要現用現配還要避光.配製烷化劑時,要採用合適的出緩沖液. 有毒! （三）常用的烷化劑亞硝基胍（NTG） 黃色晶體物質,性質不穩定,容易光解,黃色變為綠色時,誘變效應際低. 有超誘變劑之稱,常用緩沖溶液有磷酸緩沖液和Tri緩沖液. 誘變處理方法： ①用一定值的磷酸緩沖液或Tri緩沖液洗製成菌懸液.②NTG母液：配製需加助溶劑甲醯胺或丙酮少許,然後加緩沖液,其比例為緩沖液9ml：NTG丙酮溶液lml,濃度為NTG 1mg/ml ；使用時取母液0.2ml + 菌懸液1.8ml,NTG終濃度為100ug/ ml.一般隨菌種不同而異,細菌一般為100-1000 ug/ ml,放線菌、真菌為l000-3000 ug/ ml.③放線菌在生長適宜的溫度下培養,（細菌30-35℃、真菌25-28℃、放線菌30-32℃）處理若干時間,一般細菌20-60min,孢子90-120 min④終止反應.冷的生理鹽水50倍稀釋處理,或經過離心洗滌處理,作一定稀釋度分離於平皿.如果是細菌,把後培養基按一定濃度加入到菌體沉澱物中,振盪培養1.5-2h,經2-3次細胞分裂,再塗平皿. 處理完畢後,馬上把接觸過NTG的器皿用NaOH浸泡處理. NTG除以上直接以溶液處理外,還可以按以下方法誘變處理,搖瓶振盪處理：在接菌後的培養基中加人5-10 ug/ ml NTG．並加幾滴吐溫60或吐溫80,使成乳化狀（注意吐溫對該菌生長是否有影響）；在平皿上生長過程處理：如果將NTG、瓊脂和菌體混合製成平板,NTG濃度為10-50 ug/ ml.或將瓊脂培養基製成平板．然後將NTG和菌體混合塗抹平析,此時NTG濃度為10-20 ug/ ml. 經後培養的培養液．除部分進行平皿分離外.剩餘的培養液可以加人適量的葯物,保存於冰箱內數天.如日本有人把經過NTG處理後的大腸桿菌培養液,用50％甘油（最終濃度為12.5％）於-40℃、-80℃保存.在以後數天內隨時可取出融化,稀釋分離,突變體死亡很少. 據報道．無論是用輻射處理,還是用化學誘變劑處理後的菌懸液或後增養液,浸在冰浴中2-3h,試驗的重復性很好.認為在大腸桿菌、枯草桿菌和放線菌等可以採取這一措施來提高誘變效果. NTG是一種強烈致癌物質,操作時要帶橡皮手套,穿工作服,帶口罩,用稱量瓶稱量,最好在通風櫥中進行.凡接觸過NTG的器皿必須及時、單獨處理,例用自來水大量沖洗或用1-2N的NaOH浸泡過夜,洗凈. 2．甲基磺酸乙酯（簡稱EMS）甲基磺酸乙酯是磺酸酯類中誘變效果較好的一種烷基化合物,外觀呈粉末狀或無色液體,難溶於水,不穩定,易水解成無活性物質. EMS的誘變處理方法： ① EMS 母液的配製：為了安全和防上失效,配製前將需用的器皿,置冰箱內預冷,然後在冰浴中進行配製.取0.5ml EMS原液,加人到10 ml pH7.2磷酸緩沖液中,加蓋,並輕輕轉動試管.由於在水溶液中易失效,故盡可能低溫保藏,並要現用現配. ②取新鮮的菌體,經前培養至對數期．離心洗滌,用緩沖液製成8 ml菌懸液（107-108ml-1）.對於絲狀菌孢子,則前培養至萌動期,懸液含 106 ml-1. ③取EMS母液2ml,加人到以8ml的菌懸液中.在適宜溫度下處理一定時間（根據預實驗緒果確定）.處理的最終濃度為0 .lmol／L.對於真菌孢子,則為0.2-0.5rnol／L. ④EMS處理一定時間後,用50倍生理鹽水稀釋或加入一定量的2%NaS2O3溶液或多次離心、洗滌,以終止反應. EMS是劇毒的誘變劑,在整個誘變過程,包括配製葯品、操作處理、保存等都要嚴守安全,不能接觸皮膚,所有接觸過EMS的器皿,單獨用大量水沖洗洗滌,或用10％NaS2O3溶液浸泡過夜,再用清水沖洗干凈. 三、脫氨劑亞硝酸是一稀常用的誘變劑,毒性小．不穩定,易揮發．其鈉鹽易在酸性緩沖液中產生NO和NO2 （一）亞硝酸的誘變機制脫去鹼基中的氨基變成酮基,引起轉換而發生變異.A→H,C→U,G→X. A：T→G：C和G：C→A：T.亞硝酸的誘變也可以發坐回復突變. 亞硝酸除了脫氨基作用外,還可引起DNA交聯作用,DNA復制,從而導致奕變. （二）亞硝酸的處理方法 1．試劑的配製（1）1mol／L pH4.5醋酸緩沖液（2）0.1mol／L亞硝酸鈉溶液（3）0.07mol／L pH8.6磷酸氫二鈉溶液以上試劑用前均要滅菌. 2．處理方法取孢子懸液1 ml,pH4.5醋酸緩沖液2ml及硝酸鈉溶液lml,最後處理濃度為0.025 mol／L ；25-26℃保溫10-20min,加入的磷酸氫二鈉溶液 20 ml,使出下降至pH 6. 8左右,以終止反應.稀釋分離於平板. 如果是處理細菌,亞硝酸最後濃度以0.05 mol／L. 在亞硝酸處理菌體或孢子時要嚴格控制好溫度,否則會影響誘變效果. 四、移碼誘變劑移碼誘變劑與DNA相互結合引起鹼基增添或缺失而造成突變.它們主要包括吖啶黃、吖啶橙、ICR－171、ICR-191等.移碼誘變劑對噬菌體有強烈的誘變作用,誘發細菌、放線菌的質粒脫落比其他誘變劑效果更為顯著.如某些產生抗生素的放線菌.用處理後,發現產量明顯下降,主要就是由於控制抗生素合成的質粒脫落造成的. 吖啶黃的性質和使用方法：淡黃色晶體,微溶於熱水,溶於乙醇和乙醚,不穩定,見光易分解. 使用時,先用少許乙醇溶解,配成一定濃度的母液.通常處理方法是特它們加入培養基中,使最後濃度為10-50ug/ml,混合後製成平板,適溫培養,在生長過程中處理.另外還可將吖啶黃加人到培養液中,濃度為10-20 ug/ml ,在適溫條件下,振盪培養過程中處理. 五、羥化劑【以羥胺為例】羥胺的簡稱HA,常以鹽酸羥胺形式存在,為白色晶體,溶於水,不穩定易分解,具腐蝕性. 1.羥胺的誘變機制當羥胺濃度為0.1-1.0mol／L pH6.0時,主要與胞嘧啶反應,使羥化的C與A配對,在0.1-1.0mol／L pH9.0,羥胺可以與鳥嘧啶反應,10-3 mol／L時,羥胺可以與胸腺嘧啶、鳥嘌呤和尿嘧啶起反應.但據分析,羥胺與T、G反應的是它的產物,而不是它本身.此外,羥胺有時還能和細胞中其他物質作用產生過氧化氯,也具有誘變作用. 2．羥胺的處理方法常用濃度為0.1％-5％,可直接在溶液中處理,時間1-2h,然後分離培養.但一般都加到瓊脂平板或振盪培養基中.然後接入孢 子或細菌,在適溫下培養,生長過程中處理．所用濃度比直接處理時低些. 六、金屬鹽類用於誘變育種的金屬鹽類主要有氯化鋰、硫酸錳等.其中氯化理比較常用,與其他誘變劑復合處理,效果相當顯著. 氯化鋰稱之為助誘變劑,氯化鋰是白色粉末,易溶於水,使用時通常加到培養基中. 為了速免受破壞．倒平板時,當培養基溫度冷卻到50-60℃時才加入製成平板,然後把細菌或孢子塗布分離,處理終濃度為0.3％-1.5%. 七、其他化學誘變劑 1．秋水仙素秋水仙鹼是誘發細胞染色休多倍體的誘變劑.秋水仙鹼的主要作用是破壞細胞有絲分裂過程中紡錘絲的形成.導致多倍體的產生. 2．抗生素作為誘變劑的抗生素主要有鏈黑黴素、爭光黴素、絲裂黴素、放線菌素、光輝黴素和阿黴素等.這些抗生素都是抗癌葯物,它們在微生物育種中雖有應用,但效果不如烷化劑等誘變劑顯著,應用並不廣泛.一般不單獨使用,常與其他誘變劑一起復合使用. 八、直視化學誘變劑的操作安全化學誘變劑多數是極毒的致癌葯品,在進行誘變操作後的處置以及誘變劑的保藏等方面的安全防護都是極其重要的.如有疏忽,就可能對健康和環境帶來惡果,萬萬不可麻痹.

④ 乳酸鈉，黃原膠，尿囊素 羥乙基脲 分別是什麼 分別有什麼用

乳酸鈉，無色或幾乎無色的透明液體，能與水、乙醇、甘油溶合。應用於食品的保鮮、保濕、增香及制葯原料。

黃原膠又稱黃膠、漢生膠，黃單胞多糖，是一種由假黃單胞菌屬發酵產生的單孢多糖，由糖類經黃單胞桿菌發醉，產生的胞外微生物多塘。由於它的大分子特殊結構和膠體特性，而具有多種功能，可作為乳化劑、穩定劑、凝膠增稠劑、浸潤劑、膜成型劑等，廣泛應用於國民經濟各領域。

尿囊素純品是一種無毒、無味、無刺激性、無過敏性的白色晶體，水中結晶為單稜柱體或無色結晶性粉末。能溶於熱水、熱醇和稀氫氧化鈉溶液。微溶於常溫的水和醇，難溶於乙醚和氯仿等有機溶劑；在強鹼性溶液中煮沸及日光曝曬下可分解。

羥乙基尿素，又名羥乙基脲，大量用於化妝品保濕產品中。外觀:無色至淺黃色透明液體，極佳的保濕劑，能滲透進入角質層中，增加皮膚含水量，緩解乾燥，填補細紋，增加皮膚彈性，並提供愉快的使用感覺。能與化妝品絕大多少原料配伍，具有廣泛的PH適用范圍。

(4)乙基脲檢測方法擴展閱讀：

尿囊素用途：

1 、在醫葯方面：尿囊素具有促進細胞生長，加快傷口癒合，軟化角質蛋白等生理功能，是皮膚創傷的良好癒合劑和抗潰瘍葯劑。可用作緩解和治療皮膚乾燥症、鱗屑性膚疾患、皮膚潰瘍、消化道潰瘍及炎症，對骨髓炎、糖尿病、肝硬化、痤瘡均有較好療效。

2 、在化妝品方面：由於尿囊素是一種兩性化合物，能結合多種物質形成復鹽，具有避光、殺菌防腐、止痛、抗氧化作用，能使皮膚保持水份，滋潤和柔軟，是美容美發等化妝品的特效添加劑，廣泛用於雀斑霜、粉刺液、護發劑、收斂劑、抗汗除臭洗劑等的添加劑。

3 、在農業上：尿囊素是優良的植物生長調節劑，可刺激植物生長，對小麥、柑桔、水稻、蔬菜、大豆等均有顯著增產效果，並有固果，早熟作用

⑤ 農葯的成分mdncozeb . cymoxdnil 是什麼

cymoxdnil 霜脲氰,學名為1-（2-氰基-2-甲氧基亞胺基）-3-乙基脲。純品為無色結晶固體，熔點160-161℃，密度251.31；蒸氣壓0.080毫帕（25℃，外推法）。25℃下的溶解度：水1克/公斤。二甲基甲醯胺185克/公斤；己烷<1克/公斤。在一般貯存條件下和在中性或弱酸介質中穩定。農用殺菌劑。具有局部內吸作用。主要對霜霉目真菌，如疫霉屬、霜霉屬、單軸霉屬有效。對大鼠急性口服LD50為1196毫克/公斤（原葯），由乙基脲經醯化及甲基化製得。

mdncozeb? 是 mancozeb嗎?

mancozeb 代森錳鋅,黃色粉末，熔點136℃以下分解。閃點137.8℃(開式)。不溶於水和大多數有機溶劑。在35℃儲存時，每月失重0.18%，高溫遇潮濕和遇酸則分解。大鼠急性經口LD5012800～14000mg/kg。由乙二胺與二硫化碳、氫氧化鈉反應，生成代森鈉，然後與硫酸錳反應，生成代森錳，最後與硫酸鋅溶液反應，即製得本品。用於防治蔬菜、果樹、花卉、糧食作物及其他經濟作物的霜霉病、斑病、疫病、赤霉病等。制劑有50%，70%可濕性粉劑，40%乳粉。

⑥ 羥乙基脲是什麼提取的

你這話問的，我只能告訴你，化工產生，不是什麼提取的

⑦ 霜脲氰的基本信息

【中文名稱】霜脲氰；1-（2-氰基-2-甲氧基亞胺基）-3-乙基脲
【英文名稱】cymoxanil
英文別名 1-Cyano-N-[(ethylamino)carbonyl]-2-(methoxyimino)acetamide; Curzate; 2-Cyano-N-[(ethylamino)carbonyl]-2-(methoxyimino)acetamide; 1-(2-cyano-2-methoxyiminoacetyl)-3-ethylurea; 2-cyano-N-(ethylcarbamoyl)-2-(methoxyimino)acetamide; (2Z)-2-cyano-N-(ethylcarbamoyl)-2-(methoxyimino)ethanamide; (2E)-2-cyano-N-(ethylcarbamoyl)-2-(methoxyimino)ethanamide
【理化性質】 純品為無色結晶固體，熔點160℃～161℃。25℃時的溶解度：水lg/L，二甲基甲醯胺1.85glL，氯仿105g/L，甲醇41glL，苯2glL，己烷<lg/L。在一般貯存條件下和在中性或弱酸性介質中穩定，遇鹼及光照條件下分解。
【結構或分子式】C7H10N4O3
【分子量】：198.4
【密度】251.31
【熔點（℃）】160～161
【性狀】純品為無色結晶固體。
【溶解情況】25℃下的溶解度：水1克/公斤；二甲基甲醯胺185克/公斤；己烷<1克/公斤。
【用途】霜脲氰是一種高效、低毒殺菌劑，對霜霉目真菌如疫霜屬、霜霉屬、單軸霜屬有效。霜脲氰與其他保護性殺菌劑混用廣泛，使用於黃瓜、葡萄、蕃茄、荔枝、巨菜等十字花科蔬菜及煙草等。
【制備或來源】由乙基脲經醯化及甲基化製得。穩定性：在一般貯存條件下和在中性或弱酸介質中穩定，7天在土壤中損失50%。
【其他】蒸氣壓0.080毫帕（25℃，外推法）。【霜脲氰原葯質量控制指標】 項 目 指 標 優等品 一等品 霜脲氰含量，%（m/m）≥ 98.0 95.0 酸度（以H2SO4計），%（m/m）≤ 0.1 0.2 丙酮不溶物，%（m/m）≤ 0.2 0.3 乾燥失重，%（m/m）≤ 0.3 0.5 【毒性】：對人畜低毒。大白鼠急性經口LD50為562-1210mg/kg（雄性），459-1480mg/kg（雌性）。大白鼠急性經皮LD50>2000mg/kg，對皮膚無刺激作用，對眼睛有輕微刺激作用。

⑧ 用化學法如何進行菌種誘變有哪位做過此項目具體的操作過程

已知的有烷化劑、鹼基類似物(base analog)、羥胺(hydroxylamine)、吖啶色素等。

常用化學誘變劑的種類及作用機制

（一）烷化劑

是栽培作物誘發突變的最重要的一類誘變劑。葯劑帶有一個或多個活潑的烷基。通過烷基置換，取代其它分子的氫原子稱為"烷化作用"所以這類物質稱烷化劑。
烷化劑分為以下幾類：
1. 烷基磺酸鹽和烷基硫酸鹽
代表葯劑：甲基磺酸乙酯（EMS）、硫酸二乙酯（DES）
2. 亞硝基烷基化合物
代表葯劑：亞硝基乙基脲（NEH）、N-亞硝基-N-乙基脲烷（NEU）
3. 次乙胺和環氧乙烷類
代表葯劑：乙烯亞胺（EI）
4. 芥子氣類
氮芥類、硫芥類
烷化劑的作用機制--烷化作用 作用重點是核酸，導致DNA斷裂、缺失或修補。

（二）核酸鹼基類似物

這類化合物具有與DNA鹼基類似的結構。
代表葯劑：
5-溴尿嘧啶（BU）、5-溴去氧尿核苷（BudR） 為胸腺嘧啶（T）的類似物
2-氨基嘌呤（AP） 為腺嘌呤（A）的類似物
馬來醯肼（MH） 為尿嘧啶（U）的異構體
作用機制：作為DNA的成份而滲入到DNA分子中去，使DNA復制時發生配對錯誤，從而引起有機體變異。

（三）其它誘變劑

亞硝酸 能使嘌呤或嘧啶脫氨，改變核酸結構和性質，造成DNA復制紊亂。HNO2還能造成DNA雙鏈間的交聯而引起遺傳效應。
疊氮化鈉(NaN3) 是一種呼吸抑制劑，能引起基因突變，可獲得較高的突變頻率，而且無殘毒。

以下是具體的使用方法，希望對你有點作用！！！！！！！！！！

化學誘變劑的劑量主要決定於其濃度和處理時間。

化學誘變劑都具毒性，其中90%以上是致癌物質或極毒葯品，使用時要格外小心，不能宜接用口吸，避免與皮膚直接接觸，不僅要注意自身安全，也要防上污染環境，造成公害。

一、鹼基類似物

用於誘發突變的鹼基類似物有5-BU、5-FU、BUdr、5－IU等他們是胸腺嘧啶的結構類似物，AP、6-MP是腺嘌呤的給、結構類似物。最常用是5－BU和AP。

當將這類物質加人到培養基中，在繁殖過程中可以摻人到細菌DNA分子中，不影響DNA的復制。它們的誘變作用是取代核酸分子中鹼基的位置，再通過DNA的復制，引起突變，困此，也叫摻人誘變劑。顯然這一類誘變劑要求微生物細胞必頓處在代謝的旺盛期，才能獲得最佳的誘變效果。

（一）鹼基類似物的誘變機制

正常的鹼基存在著同分異構體，互變異構現象在嘧啶分子中以酮式和烯醇式的形式出現，而嘌呤分子中以氨基和亞氨基互為變構的形式出現、一般互變異構現象在鹼基類似物中比正常DNA鹼基中頻率更高。

5-BU 導致A：T鹼基對轉換為GC鹼基

2-氨基嘌呤也可以誘發DNA分子中A：T－ G：C或G：C－ A：T的轉換。

（二）鹼基類似物的誘變處理方法（以5-BU為例）

1．單獨處理

將微生物液體培養到對數期．離心除去培養液，加入生理鹽水或緩沖液．飢餓培養8-10h，消耗其體內的貯存物質、將5-BU加入到經飢餓培養的培養液中，處理濃度為25-40ug／ml，溫合均勻．取0.1-0.2ml菌懸液加人到瓊脂培養基上塗布培養。在適宜溫度下，使之在生長過程中誘變處理。培養後挑取單菌落，進行篩選。如果是處理真菌、放線菌孢子，則要提高5-BU的濃度，常處理濃度為 0.1mg／ml。

2．與輻射線復合處理

據報道；如果菌體先用5-BU等鹼基類似物進行處理，使它們首先滲人到DNA分予中，然後用輻射線照射，誘變效果會比單獨使用射線要好。因此鹼基類似物也是一種輻射誘變的增敏劑。從而提高突變率。

二、烷化劑

（一）烷化劑的作用機制

烷化劑分單功能烷化劑和雙功能或多功能烷化劑兩大類。前者僅一個烷化基團，對生物毒性小，誘變效應大。後者具有兩個或多個烷化基團，毒性大，致死率高，誘變效應較差。主要原因是雙功能烷化劑有硫芥、氮芥。

烷化劑主要是通過烷化基團使DNA分子上的鹼基及磷酸部分烷化，DNA復制時導致鹼基配對錯誤而引起突變，鹼基中容易發生烷化作用的是嘌呤類。其中鳥嘌呤N7是最易起反應的位點，幾乎可以和所有烷化劑起烷化作用；此外，DNA分子中比較多的烷化位點是鳥嘌呤O6和胸腺嘧啶O4，這些可能都是引起突變的主要位點。其次引起烷化的位點是鳥嘌呤N3、腺嘌呤N2，腺嘌呤N7和胞嘧啶N3。這些位點引起鹼基置換的僅占烷化作用的10％左右。因此，由這些位點改變所引起的突變僅是少數。

烷化劑也能造成磷酸和核糖之間的共價鍵斷裂，而造成突變。

（二）烷化劑的性質

溶液烷化劑的性質比較活潑，不太穩定，在水溶液中容易發生分解。它們大部分半衰期很短，其長短與溫反、溶液PH關系很大。因此，化學誘變劑要現用現配還要避光。配製烷化劑時，要採用合適的出緩沖液。 有毒！！！！

（三）常用的烷化劑

亞硝基胍（NTG）

黃色晶體物質，性質不穩定，容易光解，黃色變為綠色時，誘變效應際低。

有超誘變劑之稱，常用緩沖溶液有磷酸緩沖液和Tri緩沖液。

誘變處理方法：

①用一定值的磷酸緩沖液或Tri緩沖液洗製成菌懸液。②NTG母液：配製需加助溶劑甲醯胺或丙酮少許，然後加緩沖液，其比例為緩沖液9ml：NTG丙酮溶液lml，濃度為NTG 1mg/ml ；使用時取母液0.2ml + 菌懸液1.8ml，NTG終濃度為100ug/ ml。一般隨菌種不同而異，細菌一般為100-1000 ug/ ml，放線菌、真菌為l000-3000 ug/ ml。③放線菌在生長適宜的溫度下培養，（細菌30-35℃、真菌25-28℃、放線菌30-32℃）處理若干時間，一般細菌20-60min,孢子90-120 min④終止反應。冷的生理鹽水50倍稀釋處理，或經過離心洗滌處理，作一定稀釋度分離於平皿。如果是細菌，把後培養基按一定濃度加入到菌體沉澱物中，振盪培養1.5-2h，經2-3次細胞分裂，再塗平皿。

處理完畢後，馬上把接觸過NTG的器皿用NaOH浸泡處理。

NTG除以上直接以溶液處理外，還可以按以下方法誘變處理，搖瓶振盪處理：在接菌後的培養基中加人5-10 ug/ ml NTG．並加幾滴吐溫60或吐溫80，使成乳化狀（注意吐溫對該菌生長是否有影響）；在平皿上生長過程處理：如果將NTG、瓊脂和菌體混合製成平板，NTG濃度為10-50 ug/ ml。或將瓊脂培養基製成平板．然後將NTG和菌體混合塗抹平析，此時NTG濃度為10-20 ug/ ml。

經後培養的培養液．除部分進行平皿分離外。剩餘的培養液可以加人適量的葯物，保存於冰箱內數天。如日本有人把經過NTG處理後的大腸桿菌培養液，用50％甘油（最終濃度為12.5％）於-40℃、-80℃保存。在以後數天內隨時可取出融化，稀釋分離，突變體死亡很少。

據報道．無論是用輻射處理，還是用化學誘變劑處理後的菌懸液或後增養液，浸在冰浴中2-3h，試驗的重復性很好。認為在大腸桿菌、枯草桿菌和放線菌等可以採取這一措施來提高誘變效果。

NTG是一種強烈致癌物質，操作時要帶橡皮手套，穿工作服，帶口罩，用稱量瓶稱量，最好在通風櫥中進行。凡接觸過NTG的器皿必須及時、單獨處理，例用自來水大量沖洗或用1-2N的NaOH浸泡過夜，洗凈。

2．甲基磺酸乙酯（簡稱EMS）

甲基磺酸乙酯是磺酸酯類中誘變效果較好的一種烷基化合物，外觀呈粉末狀或無色液體，難溶於水，不穩定，易水解成無活性物質。

EMS的誘變處理方法：

① EMS 母液的配製：為了安全和防上失效，配製前將需用的器皿，置冰箱內預冷，然後在冰浴中進行配製。取0.5ml EMS原液，加人到10 ml pH7.2磷酸緩沖液中，加蓋，並輕輕轉動試管。由於在水溶液中易失效，故盡可能低溫保藏，並要現用現配。

②取新鮮的菌體，經前培養至對數期．離心洗滌，用緩沖液製成8 ml菌懸液（107-108ml-1）。對於絲狀菌孢子，則前培養至萌動期，懸液含 106 ml-1。

③取EMS母液2ml，加人到以8ml的菌懸液中。在適宜溫度下處理一定時間（根據預實驗緒果確定）。處理的最終濃度為0 .lmol／L。對於真菌孢子，則為0.2-0.5rnol／L。

④EMS處理一定時間後，用50倍生理鹽水稀釋或加入一定量的2%NaS2O3溶液或多次離心、洗滌，以終止反應。

EMS是劇毒的誘變劑，在整個誘變過程，包括配製葯品、操作處理、保存等都要嚴守安全，不能接觸皮膚，所有接觸過EMS的器皿，單獨用大量水沖洗洗滌，或用10％NaS2O3溶液浸泡過夜，再用清水沖洗干凈。

三、脫氨劑

亞硝酸是一稀常用的誘變劑，毒性小．不穩定，易揮發．其鈉鹽易在酸性緩沖液中產生NO和NO2

（一）亞硝酸的誘變機制

脫去鹼基中的氨基變成酮基，引起轉換而發生變異。A→H，C→U，G→X。 A：T→G：C和G：C→A：T。亞硝酸的誘變也可以發坐回復突變。

亞硝酸除了脫氨基作用外，還可引起DNA交聯作用，DNA復制，從而導致奕變。

（二）亞硝酸的處理方法

1．試劑的配製

（1）1mol／L pH4.5醋酸緩沖液

（2）0.1mol／L亞硝酸鈉溶液

（3）0.07mol／L pH8.6磷酸氫二鈉溶液

以上試劑用前均要滅菌。

2．處理方法

取孢子懸液1 ml，pH4.5醋酸緩沖液2ml及硝酸鈉溶液lml，最後處理濃度為0.025 mol／L ；25-26℃保溫10-20min，加入的磷酸氫二鈉溶液 20 ml，使出下降至pH 6. 8左右，以終止反應。稀釋分離於平板。

如果是處理細菌，亞硝酸最後濃度以0.05 mol／L。

在亞硝酸處理菌體或孢子時要嚴格控制好溫度，否則會影響誘變效果。

四、移碼誘變劑

移碼誘變劑與DNA相互結合引起鹼基增添或缺失而造成突變。它們主要包括吖啶黃、吖啶橙、ICR－171、ICR-191等。移碼誘變劑對噬菌體有強烈的誘變作用，誘發細菌、放線菌的質粒脫落比其他誘變劑效果更為顯著。如某些產生抗生素的放線菌。用處理後，發現產量明顯下降，主要就是由於控制抗生素合成的質粒脫落造成的。

吖啶黃的性質和使用方法：

淡黃色晶體，微溶於熱水，溶於乙醇和乙醚，不穩定，見光易分解。

使用時，先用少許乙醇溶解，配成一定濃度的母液。通常處理方法是特它們加入培養基中，使最後濃度為10-50ug/ml，混合後製成平板，適溫培養，在生長過程中處理。另外還可將吖啶黃加人到培養液中，濃度為10-20 ug/ml ，在適溫條件下，振盪培養過程中處理。

五、羥化劑【以羥胺為例】

羥胺的簡稱HA，常以鹽酸羥胺形式存在，為白色晶體，溶於水，不穩定易分解，具腐蝕性。

1.羥胺的誘變機制

當羥胺濃度為0.1-1.0mol／L pH6.0時，主要與胞嘧啶反應，使羥化的C與A配對，在0.1-1.0mol／L pH9.0，羥胺可以與鳥嘧啶反應，10-3 mol／L時，羥胺可以與胸腺嘧啶、鳥嘌呤和尿嘧啶起反應。但據分析，羥胺與T、G反應的是它的產物，而不是它本身。此外，羥胺有時還能和細胞中其他物質作用產生過氧化氯，也具有誘變作用。

2．羥胺的處理方法

常用濃度為0.1％-5％，可直接在溶液中處理，時間1-2h，然後分離培養。但一般都加到瓊脂平板或振盪培養基中。然後接入孢 子或細菌，在適溫下培養，生長過程中處理．所用濃度比直接處理時低些。

六、金屬鹽類

用於誘變育種的金屬鹽類主要有氯化鋰、硫酸錳等。其中氯化理比較常用，與其他誘變劑復合處理，效果相當顯著。

氯化鋰稱之為助誘變劑，氯化鋰是白色粉末，易溶於水，使用時通常加到培養基中。

為了速免受破壞．倒平板時，當培養基溫度冷卻到50-60℃時才加入製成平板，然後把細菌或孢子塗布分離，處理終濃度為0.3％-1.5%。

七、其他化學誘變劑

1．秋水仙素

秋水仙鹼是誘發細胞染色休多倍體的誘變劑。秋水仙鹼的主要作用是破壞細胞有絲分裂過程中紡錘絲的形成。導致多倍體的產生。

2．抗生素

作為誘變劑的抗生素主要有鏈黑黴素、爭光黴素、絲裂黴素、放線菌素、光輝黴素和阿黴素等。這些抗生素都是抗癌葯物，它們在微生物育種中雖有應用，但效果不如烷化劑等誘變劑顯著，應用並不廣泛。一般不單獨使用，常與其他誘變劑一起復合使用。

八、直視化學誘變劑的操作安全

化學誘變劑多數是極毒的致癌葯品，在進行誘變操作後的處置以及誘變劑的保藏等方面的安全防護都是極其重要的。如有疏忽，就可能對健康和環境帶來惡果，萬萬不可麻痹。

⑨ 誘變育種的基本原理是什麼

誘變育種的基本原理是基因突變，主要包括染色體畸變和基因突變。誘變育種是利用各種被稱為誘變劑的物理因素和化學試劑處理微生物細胞，提高基因突變頻率，再通過適當的篩選方法獲得所需要的高產優質菌種的育種方法。

誘變育種存在的主要問題是有益突變頻率仍然較低，變異的方向和性質尚難控制。因此提高誘變效率，迅速鑒定和篩選突變體以及探索定向誘變的途徑。

(9)乙基脲檢測方法擴展閱讀：

誘變育種是指用物理、化學因素誘導動植物的遺傳特性發生變異，再從變異群體中選擇符合人們某種要求的單株/個體，進而培育成新的品種或種質的育種方法。它是繼選擇育種和雜交育種之後發展起來的一項現代育種技術。

應用較多的是輻射誘變，即用α射線、β射線、γ射線、Χ射線、中子和其他粒子、紫外輻射以及微波輻射等物理因素誘發變異。當通過輻射將能量傳遞到生物體內時，生物體內各種分子便產生電離和激發，接著產生許多化學性質十分活躍的自由原子或自由基團。

它們繼續相互反應，並與其周圍物質特別是大分子核酸和蛋白質反應，引起分子結構的改變。由此又影響到細胞內的一些生化過程，如 DNA合成的中止、各種酶活性的改變等，使各部分結構進一步深刻變化，其中尤其重要的是染色體損傷。

由於染色體斷裂和重接而產生的染色體結構和數目的變異即染色體突變，而DNA分子結構中鹼基的變化則造成基因突變。那些帶有染色體突變或基因突變的細胞，經過細胞世代將變異了的遺傳物質傳至性細胞或無性繁殖器官，即可產生生物體的遺傳變異。

⑩ 遺傳毒性試驗的實驗方法

近十幾年,隨著遺傳毒理學相關領域特別是分子生物學的研究進展,遺傳毒性測試評價方法也在不斷改進。據報道,目前已建立的遺傳毒性短期檢測法已超過200種。根據其檢測的遺傳學終點可分為4種類型:1檢測基因突變;2檢測染色體畸變;3檢測染色體組畸變;4檢測DNA原始損傷。
1現行組合試驗方案由於一種遺傳毒性檢測方法通常只能反映一個或兩個遺傳學終點。沒有一種檢測方法能涵蓋所有的遺傳學終點,故需用一組試驗配套進行試驗。200多種檢測方法中,真正經過驗證有合適靈敏度和特異度的大概不到10種。目前多數國家規定,如體內誘變試驗顯示1個或以上試驗呈陽性結果,則需要進行生殖細胞遺傳毒性測試。
2各類遺傳毒性試驗方法的研究進展
2.1檢測基因突變
遺傳毒性試驗
2.1.1Ames試驗Ames試驗是檢測化學物質基因突變的常用方法。常規的Ames試驗選用四個測試菌株(TA97、TA98、TA100、TA102),最近有人提出增加TA1535測試菌株,該菌株特別適用於檢測混合物的致突變性。目前出現的新生菌株具有更高的敏感性和特異性,如YG7014、TG7108,缺乏編碼O6-甲基鳥嘌呤DNA甲基化轉移酶的ogtST基因,專用於對烷化劑引起的DNA損傷檢測;引入乙醯轉移酶基因的YG1024、YG1029菌株,對硝基芳烴和芳香胺的敏感性比原菌株高100倍以上[4]。測試代謝活化系統一般採用由Aro-clor1254(PCBs)誘導大鼠肝微粒體酶的S9;國外也有用人肝S9的報道,試驗證明其代謝活性明顯高於鼠S9[5,6]。為了克服S9制備上的困難和不穩定性,Josephy等將沙門氏菌的芳香胺N-乙醯轉移酶基因和人類細胞色素P-450基因Cyp1A2引入細胞,構建了在無外源S9時也可檢出芳香胺誘變性的Ames測試菌株如DJ4501A2[7]。
2.1.2TK基因突變試驗TK基因突變試驗是一種哺乳動物體細胞基因正向突變試驗,近年來其應用價值有明顯的提高。TK基因編碼胸苷激酶,該酶催化胸苷的磷酸化反應,生成胸苷單磷酸(TMP)。如果存在三氟苷(TFT)等嘧啶類似物,則產生異常的TMP,摻入DNA中導致細胞死亡。如受檢物能引起TK基因突變,胸苷激酶則不能合成,而在核苷類似物的存在下能夠存活。TK基因突變試驗可檢出包括點突變、大的缺失、重組、染色體異倍性和其他較大范圍基因組改變在內的多種遺傳改變。試驗採用的靶細胞系主要有小鼠淋巴瘤細胞L5178Y以及人類淋巴母細胞TK6和WTK1等。其基因型均為tk+/-。Honma(本間正充)和張立實(1999)指出原用染毒時間3～6h對於充分檢出斷裂劑和錘體來說這個時間太短,獲陰性結果時應延長至24h。據資料顯示對於同一陽性受檢物,WTK1細胞的突變頻率遠高於TK6細胞,認為與WTK1存在p53基因突變有關。Do-brovolsky(1999)建立了tk+/-轉基因小鼠,可用於體內試驗。
2.1.3轉基因小鼠基因突變試驗轉基因小鼠基因突變試驗可在整體狀態下檢測基因突變,比較不同組織(包括生殖腺)的突變率,確定靶器官,對誘發的遺傳改變作精確分析等[8]。1989年Gossen等報道了LacZ轉基因小鼠突變測試系統。近年來,國外已陸續發展了多種用於突變檢測的轉基因動物,其中3種已投入商品化生產,MutaTM小鼠、Big-BlueTM小鼠和Xenomouse小鼠,它們分別採用大腸桿菌乳糖操縱子的LacZ和/或Lacl作為誘變的靶基因。陳建泉等人(1997)已經以穿梭質粒pESnx載體,以xy1E基因因為誘變靶基因建立了攜帶xy1E的轉基因小鼠,並對轉基因小鼠進行了繁殖建系。並已實驗證明xy1E轉基因小鼠是一個研究體內基因突變的有效模型,它可望成為一種新的轉基因小鼠突變檢測系統[9]。Heddle等(2000)建立了1個種gptdelta轉基因小鼠。HiroyukiHayashi等(2003)將載有E.coligpt基因和λ噬菌體的red/gam基因λEG10DNA整合到SD大鼠每個單倍體基因組q24～q31位點。這種轉基因大鼠對乙基亞硝基脲(ENU)和苯並芘(B[a]P)的肝臟毒性顯示了很好的敏感性,它也有助於研究遺傳毒性物質對小鼠和大鼠的種間差異[10]。
2.1.4反向限制性酶切位點突變分析法(,iRSM)由英國威爾士大學分子遺傳和毒理中心建立並完善的[11]。iRSM適用於快速檢測誘變劑所致體內外DNA的突變,但這些突變的特點是使某一酶切位點變為另一酶切位點。該方法建立者Jenkins等首先將iRSM應用於化學誘變劑所致動物體內p53基因的突變檢測,取得了良好的結果:小鼠分別口服N-乙基N-亞硝基脲(ENU)、2-乙醯氨基芴(2-AAF)和二甲基醯肼(DMH)3天後,以iRSM方法相應地檢測小鼠脾、骨髓和肝組織p53基因第6內含子區域的Apa→Ava位點反向突變。結果表明ENU誘發肝組織p53基因突變的發生率為33%,2-AAF使肝組織突變的發生率為25%,這一陽性突變率反映出了不同誘變劑對相應組織的致突變強度,進一步驗證了該方法的高靈敏度和准確性。它具有靈敏度高、快速、操作簡便、以及突變檢測部位明確等優點,應當說是一種較具實用價值和生命力的突變檢測手段。但是,iRSM的不足之處是僅能檢測誘發限制性酶切位點反向的DNA突變。根據文獻資料分析,化合物致突的發生具有一定的規律性,即結構類似的一組化合物常常引起一些特定序列較固定的鹼基改變。例如,烷化劑和芳香胺類雖易使一連串鳥嘌呤(G)3′端G發生突變[12,13],這可能與該部位電荷密集有關,多數活性氧生成物質的DNA致突作用也具有類似規律[14];CpG二核苷常常是DNA加成物致突變作用部位[15],所以CpG突變的檢測在化合物致突檢測中具有重要意義,而CpG突變常引發某些固定酶切位點的變化。很顯然,iRSM可較廣泛地應用於遺傳毒性化合物致突作用的檢測。
2.2檢測染色體和染色體組畸變
2.2.1微核試驗傳統的體內微核試驗仍然是檢測化學物質染色體損傷的基本方法。目前微核試驗方法主要有以下改進:1體外微核試驗常用細胞有中國倉鼠肺細胞(CHL)、中國倉鼠卵巢細胞(CHO)及中國倉鼠成纖維細胞(V79)等,近年開始有用L5178Y小鼠淋巴瘤細胞和人的類成淋巴細胞TK6。也有用敘利亞倉鼠胚胎(SHE)細胞和BALB/c3T3細胞。體外試驗比體內試驗易於操作和控制。缺點是對直接作用的化合物有可能出現假陽性。2周圍血微核試驗優點是可重復采樣,自身對照,減少實驗動物數。李尊愛(1999)報道剛斷乳不久的小鼠(4～6周齡)用於外周血網織紅細胞微核試驗比年齡更大的敏感些[16]。3胞質分裂阻滯法微核試驗(CB-MNT)很好地排除了細胞分裂的影響。該法中,雙核細胞是只分裂了一次的細胞,其結果更加穩定敏感。CB-MNT可觀察到多種遺傳學終點。觀察不同分裂期的細胞比例,計算核分裂指數能檢測誘變物對細胞周期的影響。還可檢測切除修復,次黃嘌呤磷酸核糖轉移酶(HPRT)位點變異,凋亡。認為該試驗可使計數值提高,達到傳統方法的兩倍或以上。但也偶小於兩倍的結果(李來玉,1996)。最近Garriott和Phelps等推薦了關於體外雙核細胞微核試驗的幾個參數條件:細胞鬆弛素B不影響試驗結果;計數2000個雙核細胞;長時間暴露沒有必要;結果用趨勢檢驗分析;根據相應的細胞毒性選擇適當的濃度[17]。
2.2.2染色體畸變試驗染色體畸變試驗是檢測化學物質影響染色體數量和結構的基本方法。在化學物質安全性評價中常選體外CHL細胞染色體畸變、精原細胞染色體畸變試驗等檢測化學物質對染色體的影響。為了准確觀察誘發的畸變頻數,本試驗收獲細胞的時間應盡量提前至大多數細胞處於染毒後第1次有絲分裂時(Tucker,1996)。對於染色估數目改變,原則上只適合超倍體的觀察。因為塗片時可能人為地把染色體推出細胞外(Tucker,1997),Danford曾建議在制備標本時減弱低滲處理能力,以免漲破細胞膜,從而能准確觀察亞二倍體。經研究,認為以0.094mo1/LKC1弱低滲液處理2min～3min是達此目的的最佳條件(樓鐵柱,1997)。
2.2.3熒光原位雜交(FISH)技術熒光原位雜交最早由Bauman(1980)建立,後由Lucas(1989)首先應用於染色體畸變分析。其原理是按檢測目標准備恰當的DNA序列作為探針,並用生物素標記,對載玻片上待測標本中的DNA雜交,最後通過雜交位點的熒光觀察染色體結構或數目的改變。應用特殊染色體和染色體某區域的熒光探針可在體內檢測4種類型的細胞遺傳學終點[18]。1檢測中期細胞染色體畸變。2應用亞染色體區域的探針檢測間期染色體斷裂和非整倍體。3應用中心粒探針和/或抗著絲點抗體檢測微核的形成。Schriever-Schwemmet等利用CREST間接免疫熒光法,以及小鼠次要和主要衛星DNA探針,在小鼠骨髓細胞證明了受試物引起微核的來源[19]。4哺乳動物精子非整倍體檢測。徐德祥(1999)用雙色FISH方法對丙烯腈接觸男工精子性染色體數目畸變進行了檢測,證明FISH技術用於檢測精子染色體數目畸變實驗結果穩定可靠。
2.3檢測DNA原始損傷2.3.1單細胞凝膠電泳技術單細胞凝膠電泳分析(singlecellgeleletrophoresis,SCGE)是Ostling等(1984)首創的,以後經Singh等(1988)進一步完善而逐漸發展起來的一種快速檢測單細胞DNA損傷的實驗方法,因其細胞電泳形狀頗似慧星,又稱慧星試驗(cometassay)。Kizilian(1999)改進了一些試驗條件,能明顯將細胞調亡和細胞壞死的形象與「彗星」區分。MarkS.Rundell等(2003)報道彗星試驗測行的損傷主要是由致突變劑引起的[20]。RichardD.Bowden等(2003)研究出了一種新的分析試驗結果的彗星尾圖譜,可以更加准確的分析彗星的長度及密度[21]。SCGE是評價遺傳毒性損害非常敏感的實驗,可以檢測到每1.657×10-37kg中0.1個DNA的斷裂。與經典的染色體畸變、微核、SCE相比,SCGE可以用於活細胞DNA的檢測,也能用於死亡細胞DNA的分析,使SCGE不僅可以研究低劑量下的生物效應,也可用於研究高劑量下的生物效應;同時SCGE又可提供DNA修復能力的信息,這使得SCGE非常適用於評價受試物的遺傳毒性